海洋细菌泰坦尼克盐单胞菌LH-B.0026及其用途的制作方法

本发明涉及一种海洋细菌 halomonas titanicaelh-b.0026及其在处理高盐含氮废水的应用，属于环保生物。

背景技术：

1、高盐含氮废水是指总溶解固体（total dissolved inorganic salt, tds）质量分数高于1%的含氮废水称为，具有来源广泛、离子浓度高、污染物成分复杂等特点。如果未经处理直接排放，会导致江河湖泊的水质矿化度提高、，水体富营养化、毒害水生生物并对土壤造成严重污染。因此，高盐含氮废水的无害化处理，是废水处理与资源化利用的重大课题之一。

2、目前, 高盐含氮废水的处理方法主要有电解法、焚烧法、膜分离法、离子交换法、生物处理法等，但大多存在运行处理效果差、成本昂贵等弊端。电解法可以深度、高效地脱除多种污染物，但运行电耗高。焚烧法可以处理有机物浓度较高的废水，但焚烧过程中容易产生有毒有害物质，且设备腐蚀严重。膜分离技术具有无化学品添加、无二次污染的优点，但它只是将污染物富集，并不能无害化脱除；离子交换法可以抵抗较高的冲击负荷，但膜分离技术和膜分离法都具有膜易堵塞的缺点。

3、生物处理技术是利用微生物的催化、同化等作用脱除废水中污染物的一种方法，具有应用广、适应性强、经济性好、处理效率高等特点。目前，微生物处理技术在处理高盐废水时普遍存在由于盐浓度过高、离子浓度大所导致的细菌质壁分离、细胞失活甚至死亡等问题。嗜盐微生物是可以适应中、高盐浓度生长环境的一类微生物，接种嗜盐微生物可以有效避免生物法处理废水时面临的盐度限制问题。为了抵抗生长环境中的nacl造成的高渗透压，嗜盐微生物可以通过积累自身细胞内的相容性溶质浓度来防止细胞内水分的流失，嗜盐微生物还表达出具有高盐活性的蛋白质并减少蛋白质聚集、沉淀和变性用来适应极端的生存坏境。因此, 筛选出嗜盐菌种是微生物处理高盐含氮废水需要解决的关键问题。

4、现有技术关于嗜盐菌的硝化反硝化能力报道较少，尤其是在盐度≥15%的条件下，能够实现同步硝化反硝化脱氮的菌。从环境中获取耐盐能力大于15%的嗜盐硝化反硝化是高盐废水生物脱氮需要解决的关键技术问题。

技术实现思路

1、本发明所要解决的一个技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026菌株，该菌株具有能够在高盐条件下进行反硝化的作用。

2、本发明所要解决的另一个问题是提供了含有泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026发酵液的微生物菌剂。

3、本发明的再一个问题是提供上述泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026的应用及含泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026菌剂的应用，主要是为解决高盐条件下的生物脱氮问题，尤其是盐度≥15%条件下的生物脱氮问题。

4、本发明的目的可通过以下技术方案实现：

5、本发明公开的泰坦尼克盐单胞菌（ halomonas titanicae）lh-b.0026，根据其形态特征和生理生化特征及16srrna基因序列在genbank中的检索结果，分类命名为 halomonas  titanicaelh-b.0026。该菌株于2021年5月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmcc no: 22565。本发明的泰坦尼克盐单胞菌（ halomonas titanicae）lh-b.0026的16srrna序列长度为1359bp。

6、本发明的泰坦尼克盐单胞菌（ halomonas titanicae）lh-b.0026能够在盐浓度0%-20%、ph5-9、温度15-45℃范围内生长。最适生长温度是20℃，最适生长ph是6.5，最适生长盐度是1-15%。

7、本发明所述的泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026从海洋底泥样品中分离获得，其生长以麸皮和玉米芯粉，等为碳源，以酵母粉、氨氮、凯氏氮为氮源，同时能够以no3-或no2-为电子受体生长。

8、本发明所述的微生物菌剂，包含以上技术方案所述的泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026或者其发酵液的微生物菌剂。菌剂的制备方法可以采用现有技术中公开的常规菌剂的制备方法。

9、所述的微生物菌剂中泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026含量不低于10%。

10、本发明所述的微生物菌剂在高盐废水处理中的应用。

11、本发明所述的微生物菌剂在盐度0-20%的高盐废水的生物脱氮处理中的应用。

12、本发明所述的微生物菌剂进一步优选对于盐度大于15%的高盐废水进行反硝化。

13、利用本发明菌株lh-b.0026制备的微生物菌剂，当以生物脱氮为主要目标进行应用时，该菌剂的最适耐盐浓度范围是1%-20%。

14、当废水盐浓度为0%-20%，该菌剂可以no3-n、no2-n为电子受体，并且tn≤100mg/l、c/n≥5，且经过6h，no3-n、no2-n的去除率可以达到99%以上，无亚硝酸盐积累。

15、本发明与现有技术相比，有益效果如下：

16、本发明的泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026耐受高渗透压及高盐环境，其耐盐范围是1%-20%，可在该盐度范围内以no3-n、no2-n为电子受体进行反硝化，硝化反硝化效率均大于99%，不产生亚硝酸盐积累。

17、利用lh-b.0026制备的微生物菌剂，耐受高渗透压及高盐环境，在高盐废水处理，ro浓水处理、尾水净化、污染海水治理，盐碱地修复，消耗氮素营养，抑制藻类过度繁殖，净化水体，改良底质等方面有较好的应用效果。

技术特征：

1.一种海洋细菌泰坦尼克盐单胞菌（halomonas titanicae）lh-b.0026，其特征在于，其保藏编号为cgmcc no.22565。

2.权利要求1所述的泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026的用途，其特征在于，所述用途为该菌株还原硝酸盐为氮气的用途。

3.权利要求1所述的泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026的用途，其特征在于，所述用途为该菌株在盐度1%-20%的环境下进行有机物脱除的用途。

4.一种微生物菌剂，其特征在于：该微生物菌剂含有权利要求1所述的泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026的菌种发酵液。

5.根据权利要求4所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的微生物菌剂中泰坦尼克盐单胞菌lh-b.0026的菌种发酵液的质量含量不低于10%。

6.权利要求4或5所述的微生物菌剂的用途，其特征在于，所述的用途为将该菌剂应用于盐度1%-20%的高盐废水反硝化脱总氮的处理。

7.根据权利要求6所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的反硝化为缺氧或兼氧反硝化。

8.根据权利要求6所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的用途为将该菌剂应用于盐度15%-20%的高盐废水反硝化脱总氮的处理。

技术总结
本发明涉及海洋细菌泰坦尼克盐单胞菌（Halomonas titanicae）LH‑B.0026，属于生物技术领域。该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22565。菌株LH‑B.0026是从连云港赣榆海洋底泥筛选出的耐盐反硝化细菌，该菌株可以在高盐条件下彻底将硝酸盐转化为氮气，且不产生亚硝酸盐积累。本发明还公开了该菌株的菌剂，以及其处理高盐含氮废水的应用，该菌株最高可脱氮盐度为20%，在高盐含氮废水处理中很好的应用前景。同时能够在高盐环境下降解有机物，可用于高盐废水生物脱氮及降解COD，能低成本解决高盐环境下生物脱氮难题。

技术研发人员：田凤蓉,王开春,卢静,孙文妮,祖航天,徐军,王淑军,吕明生
受保护的技术使用者：中蓝连海设计研究院有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15