一种脐带间充质干细胞提取分离器及其提取方法与流程

1.本发明细胞生物技术领域，尤其涉及一种脐带间充质干细胞提取分离器及其提取方法。


背景技术：

2.有报道表明脐带血管周围华通氏胶中分离培养的间充质干细胞未分化状态较好，并且分化能力较高，并有发现表明在脐带静脉内进行胰酶消化，然后将消化后的细胞进行培养，能够获得少量间充质干细胞。现有的技术清洁时凝血会跟随排放的废液排出。


技术实现要素：

3.针对上述技术问题，本发明提供一种脐带间充质干细胞提取分离器及其提取方法，其提取方法简单，对凝血进行过滤储存。
4.其技术方案是：一种脐带间充质干细胞提取分离器，包括分离筒和无菌过滤网，所述的分离筒的内侧下部放置有分离隔网，分离隔网与分离筒的内壁贴合，且分离筒的底部设置为漏斗状，分隔隔网的内侧设置为弧形凹槽；分离筒的上端焊接有限位环；分离筒的右侧焊接有侧边固定架，且侧边固定架上开设有螺栓孔；侧边固定架的上部左侧螺栓连接有分离气缸，且分离气缸与分离筒的中间位置垂直对应；分离气缸的下部螺栓安装有橡胶挤压头，且橡胶挤压头的下部设置为弧形；无菌过滤网放置在分离筒的内侧，同时无菌过滤网的上端套接在限位环的外侧。
5.一种脐带间充质干细胞的提取方法具体包括以下步骤：
6.步骤一：对脐带采集，选取所需提取干细胞的脐带；
7.步骤二：对脐带进行预处理；
8.第一步：对脐带进行清洗，利用pbs磷酸缓冲盐溶液对脐带冲洗多遍，接着利用无菌过滤网对冲洗掉落的凝血进行过滤收集；
9.第二步：将清洗的脐带切段，然后将脐带以8-10厘米进行切断处理；
10.第三步：对切段的起到进行消毒处理，将切断的脐带放入到酒精消毒液内浸泡，实现对脐带消毒处理；
11.第四步：对消毒后的起到进行二次清洗，接着利用pbs磷酸缓冲盐溶液对脐带再次清洁后，将脐带表面的水分筛除；
12.步骤三：对脐带粉碎过滤处理；
13.第一步：将二次清洗后的起到粉碎处理，将清洁后的脐带放入到粉碎机内进行粉碎处理；
14.第二步：将碎料放入离心管内，将粉碎的碎料放入到离心管内通过清洗液重悬清洗；
15.第三步：对粉碎后的碎块内加入消化液和催化剂，接着向离心管内添加3-5毫升催化剂和4-26毫升的消化液，并保持在37-39摄氏度温度范围内；
16.第四步：对放入消化液和催化剂的碎料进行振荡处理，接着利用对添加催化剂和消化液的碎料进行振荡消化；
17.步骤四：振荡完毕后利用无菌过滤网进行过滤处理，振荡消化后将碎料放入到无菌过滤网的内侧，无菌过滤网提前放入到分离筒的内侧，并且无菌过滤网的上端套接在限位环的外侧，将碎料放置完成后通过分离气缸向下推动橡胶挤压头，配合分离隔网方便将碎料内的料液向下分离，第一次挤压分离后，可等橡胶挤压头向上抬起后通过无菌玻璃搅拌杆对碎料搅拌，然后通过分离气缸向下推动橡胶挤压头，配合分离隔网对碎料进行多次挤压，从而能够提高分离效果，分离的料液经过分离筒底部向事先存放的搅拌桶内流落；
18.步骤五：对滤液进行处理；
19.第一步：向滤液内添加分离液，向料液内添加分离液，进行搅拌混合；
20.第二步：对滤液进行离心分离然后取出上清液，搅拌混合后将上清液取出；
21.第三步：加入间充质干细胞培养基后再次搅拌，再次添加间充质干细胞培养基后进行再次搅拌；
22.第四步：再次离心后取出上清液并搅拌制成混悬液，再次搅拌完毕后将产生的上清液再次取出，从而能够制成混悬液；
23.第五步：接种培养；
24.步骤六：对培养基进行吸弃，接种培养后，吸弃全部培养基，并重新加入间充质干细胞培养基即可。
25.优选地，在步骤二中，所述的第一步中的pbs磷酸缓冲盐溶液对脐带冲洗次数可设置为5次。
26.优选地，在步骤二中，所述的第一步中的无菌过滤网采用100-200目的无菌过滤网。
27.优选地，在步骤二中，所述的第二步中的脐带切断的长度可设置为9厘米。
28.优选地，在步骤二中，所述的第三步中的脐带在酒精消毒液内浸泡5-10分钟。
29.优选地，在步骤三中，所述的第三步中离心管内添加3毫升催化剂和25毫升的消化液，并保持在39摄氏度温度范围内。
30.优选地，在步骤四中，所述的无菌过滤网采用100-150目的无菌过滤网。
31.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：由于本发明的一种脐带间充质干细胞的提取方法广泛应用于细胞生物领域。本发明提供合理的提取方法，能够将排放清洗液内的凝血进行过滤收集。
附图说明
32.图1是本发明提取分离器的结构示意图。
33.图2是脐带间充质干细胞的提取方法流程图。
34.图3是对脐带进行预处理流程图。
35.图4是对脐带粉碎过滤处理流程图。
36.图5是对滤液进行处理流程图。
37.图中：
38.1、分离筒；2、分离隔网；3、限位环；4、侧边固定架；5、分离气缸；6、橡胶挤压头；7、
无菌过滤网。
具体实施方式
39.以下结合附图对本发明做进一步描述：
40.结合说明书附图1所示：一种脐带间充质干细胞提取分离器，包括分离筒1和无菌过滤网7，所述的分离筒1的内侧下部放置有分离隔网2，分离隔网2与分离筒1的内壁贴合，且分离筒1的底部设置为漏斗状，在需要对分离隔网2进行维护清洗时可利用钢丝挂钩挂接在分离隔网2上进行清洗维护，分隔隔网2的内侧设置为弧形凹槽，通过弧形凹槽的设置可使无菌过滤网7内的碎料中心更加靠下，从而能够使分离的液料从底部快速流落；分离筒1的上端焊接有限位环3；分离筒1的右侧焊接有侧边固定架4，且侧边固定架4上开设有螺栓孔，利用螺栓贯穿螺栓孔能够将侧边固定架4固定在墙壁上，或者其他较大设备的外壁上；侧边固定架4的上部左侧螺栓连接有分离气缸5，且分离气缸5与分离筒1的中间位置垂直对应；分离气缸5的下部螺栓安装有橡胶挤压头6，且橡胶挤压头6的下部设置为弧形，利用分离气缸5通过橡胶挤压头6向下挤压时能够将碎料和液料进行分离，同时不会对碎料造成较大的伤害；无菌过滤网7放置在分离筒1的内侧，同时无菌过滤网7的上端套接在限位环3的外侧，对碎料分离完毕后，方便利用无菌过滤网7分离液料后的碎料向上取出。
41.如附图2至图5所示
42.s101：对脐带采集，选取所需提取干细胞的脐带；
43.s102：对脐带进行预处理；
44.s201：对脐带进行清洗，利用pbs磷酸缓冲盐溶液对脐带冲洗多遍，接着利用无菌过滤网对冲洗掉落的凝血进行过滤收集；
45.s202：将清洗的脐带切段，然后将脐带以8-10厘米进行切断处理；
46.s203：对切段的起到进行消毒处理，将切断的脐带放入到酒精消毒液内浸泡，实现对脐带消毒处理；
47.s204：对消毒后的起到进行二次清洗，接着利用pbs磷酸缓冲盐溶液对脐带再次清洁后，将脐带表面的水分筛除；
48.s103：对脐带粉碎过滤处理；
49.s301：将二次清洗后的起到粉碎处理，将清洁后的脐带放入到粉碎机内进行粉碎处理；
50.s302：将碎料放入离心管内，将粉碎的碎料放入到离心管内通过清洗液重悬清洗；
51.s303：对粉碎后的碎块内加入消化液和催化剂，接着向离心管内添加3-5毫升催化剂和4-26毫升的消化液，并保持在37-39摄氏度温度范围内；
52.s304：对放入消化液和催化剂的碎料进行振荡处理，接着利用对添加催化剂和消化液的碎料进行振荡消化；
53.s104：振荡完毕后利用无菌过滤网进行过滤处理，振荡消化后将碎料放入到无菌过滤网7的内侧，无菌过滤网7提前放入到分离筒1的内侧，并且无菌过滤网7的上端套接在限位环3的外侧，将碎料放置完成后通过分离气缸5向下推动橡胶挤压头6，配合分离隔网2方便将碎料内的料液向下分离，第一次挤压分离后，可等橡胶挤压头6向上抬起后通过无菌玻璃搅拌杆对碎料搅拌，然后通过分离气缸5向下推动橡胶挤压头6，配合分离隔网2对碎料
进行多次挤压，从而能够提高分离效果，分离的料液经过分离筒1底部向事先存放的搅拌桶内流落；
54.s105：对滤液进行处理；
55.s501：向滤液内添加分离液，向料液内添加分离液，进行搅拌混合；
56.s502：对滤液进行离心分离然后取出上清液，搅拌混合后将上清液取出；
57.s503：加入间充质干细胞培养基后再次搅拌，再次添加间充质干细胞培养基后进行再次搅拌；
58.s504：再次离心后取出上清液并搅拌制成混悬液，再次搅拌完毕后将产生的上清液再次取出，从而能够制成混悬液；
59.s505：接种培养；
60.s106：对培养基进行吸弃，接种培养后，吸弃全部培养基，并重新加入间充质干细胞培养基即可。
61.优选地，在s102中，所述的s201中的pbs磷酸缓冲盐溶液对脐带冲洗次数可设置为5次。
62.优选地，在s102中，所述的s201中的无菌过滤网采用100-200目的无菌过滤网。
63.优选地，在s102中，所述的s202中的脐带切断的长度可设置为9厘米。
64.优选地，在s102中，所述的s203中的脐带在酒精消毒液内浸泡5-10分钟。
65.优选地，在s103中，所述的s301中离心管内添加3毫升催化剂和25毫升的消化液，并保持在39摄氏度温度范围内。
66.优选地，在s104中，所述的无菌过滤网采用100-150目的无菌过滤网。
67.具体实施实例
68.实施例1：选取所需提取干细胞的脐带，利用pbs磷酸缓冲盐溶液对脐带冲洗多遍，接着利用无菌过滤网对冲洗掉落的凝血进行过滤收集，然后将脐带以8-10厘米进行切断处理，将切断的脐带放入到酒精消毒液内浸泡，实现对脐带消毒处理，接着利用pbs磷酸缓冲盐溶液对脐带再次清洁后，将脐带表面的水分筛除，将清洁后的脐带放入到粉碎机内进行粉碎处理，将粉碎的碎料放入到离心管内通过清洗液重悬清洗，接着向离心管内添加3-5毫升催化剂和4-26毫升的消化液，并保持在37-39摄氏度温度范围内，接着利用对添加催化剂和消化液的碎料进行振荡消化，振荡消化后将碎料放入到无菌过滤网7的内侧，无菌过滤网7提前放入到分离筒1的内侧，并且无菌过滤网7的上端套接在限位环3的外侧，将碎料放置完成后通过分离气缸5向下推动橡胶挤压头6，配合分离隔网2方便将碎料内的料液向下分离，第一次挤压分离后，可等橡胶挤压头6向上抬起后通过无菌玻璃搅拌杆对碎料搅拌，然后通过分离气缸5向下推动橡胶挤压头6，配合分离隔网2对碎料进行多次挤压，从而能够提高分离效果，分离的料液经过分离筒1底部向事先存放的搅拌桶内流落，向料液内添加分离液，进行搅拌混合，搅拌混合后将上清液取出，再次添加间充质干细胞培养基后进行再次搅拌，再次搅拌完毕后将产生的上清液再次取出，从而能够制成混悬液，接种培养，接种培养后，吸弃全部培养基，并重新加入间充质干细胞培养基即可。
69.实施例2：选取所需提取干细胞的脐带，利用pbs磷酸缓冲盐溶液对脐带冲洗5次，接着利用100-200目的无菌过滤网对冲洗掉落的凝血进行过滤收集，然后将脐带以9厘米进行切断处理，将切断的脐带放入到酒精消毒液内浸泡，实现对脐带消毒处理，接着利用pbs
磷酸缓冲盐溶液对脐带再次清洁后，将脐带表面的水分筛除，将清洁后的脐带放入到粉碎机内进行粉碎处理，将粉碎的碎料放入到离心管内通过清洗液重悬清洗，接着向离心管内添加3毫升催化剂和25毫升的消化液，并保持在39摄氏度温度范围内，接着利用对添加催化剂和消化液的碎料进行振荡消化，振荡消化后将碎料放入到无菌过滤网7的内侧，无菌过滤网7提前放入到分离筒1的内侧，并且无菌过滤网7的上端套接在限位环3的外侧，将碎料放置完成后通过分离气缸5向下推动橡胶挤压头6，配合分离隔网2方便将碎料内的料液向下分离，第一次挤压分离后，可等橡胶挤压头6向上抬起后通过无菌玻璃搅拌杆对碎料搅拌，然后通过分离气缸5向下推动橡胶挤压头6，配合分离隔网2对碎料进行多次挤压，从而能够提高分离效果，分离的料液经过分离筒1底部向事先存放的搅拌桶内流落，向料液内添加分离液，进行搅拌混合，搅拌混合后将上清液取出，再次添加间充质干细胞培养基后进行再次搅拌，再次搅拌完毕后将产生的上清液再次取出，从而能够制成混悬液，接种培养，接种培养后，吸弃全部培养基，并重新加入间充质干细胞培养基即可。
70.利用本发明所述的技术方案，或本领域的技术人员在本发明技术方案的启发下，设计出类似的技术方案，而达到上述技术效果的，均是落入本发明的保护范围。