一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法

本发明涉及间苯二酚酯衍生物制备，具体为一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法。

背景技术：

1、许多间苯二酚类衍生物都被报道对酪氨酸酶的活性具有良好的抑制效果，酪氨酸酶是人体中黑色素形成的关键限速酶，因此间苯二酚类衍生物往往被用在化妆品中来治疗黄褐斑、雀斑、晒斑等色素沉着症。stratford等人对间苯二酚及其17种衍生物进行研究，发现单环间苯二酚衍生物通过清除酪氨酸酶活性位点的cu(o)形成3-羟基邻醌，从而使酪氨酸酶失活。

2、另外，由于酪氨酸酶的催化反应也会导致新鲜果蔬、水产品在加工、储藏过程中发生褐变，不仅影响产品感官，同时会破坏其营养价值。而使用酪氨酸酶抑制剂可以有效减少黑色素的形成和果蔬、水产品的褐变，因此近年来酪氨酸酶抑制剂在美容保健和食品保鲜方面得到了广泛的应用，同时它的相关研究也有了较大进展。但是，由于受限于来源、有效性、安全性以及成本等因素，只有少部分抑制剂在商业中得到应用。因此，获得资源丰富、绿色安全、高效简洁的酪氨酸酶抑制剂是目前的迫切需求，同时也是该领域的研究热点。

技术实现思路

1、(一)解决的技术问题

2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，解决了现有方法获取酪氨酸酶抑制剂效率较低的问题。

3、(二)技术方案

4、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，具体包括以下步骤：

5、s1.化合物1-5的合成

6、精确称取间苯二酚10mmol，氩气作为保护气体的条件下，0℃溶解到25ml二氯甲烷中，加入三乙胺10mmol，反应5min后缓慢加入10-20mmol酰氯，tlc监测反应进程，反应结束后减压除去二氯甲烷，用乙酸乙酯和去离子水萃取3次，取乙酸乙酯层，减压旋蒸除去乙酸乙酯，用硅胶进行逐层层析，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯；

7、s2.化合物6-10的合成

8、精确称取间苯二酚10mmol，氩气作为保护气体的条件下，0℃溶解到25ml二氯甲烷中，加入三乙胺10mmol，反应5min后缓慢加入20-40mmol酰氯，tlc监测反应进程，反应结束后减压除去二氯甲烷，用乙酸乙酯和去离子水萃取3次。取乙酸乙酯层，减压旋蒸除去乙酸乙酯，用硅胶进行逐层层析，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯；

9、s3.化合物1-10对酪氨酸酶活性的抑制率测定

10、依次向96孔板中加入40μl酪氨酸酶溶液、140μlpbs溶液、20μl底物，混匀后作为实验组一；依次向96孔板中加入180μlpbs溶液、20μl底物，混匀后作为实验组二；依次向96孔板中加入40μl蘑菇酪氨酸酶溶液、40μl抑制物、100μlpbs溶液、20μl底物作为实验组三；依次向96孔板中加入40μl抑制物、140μlpbs溶液、20μl底物，混匀后作为实验组四，每组样品设置三个平行对照组，在30℃下孵育30min，混匀后用酶标仪连续30min检测溶液在475nm处吸光值；

11、s4.化合物1-5与酪氨酸酶的分子对接

12、对接软件采用autodockvina，运行环境为windows10系统，采用蘑菇酪氨酸酶分子结构为受体，配体结构采用画图软件chemdraw2018画出保存为mnol格式，导入软件中经过预处理，运行半柔性对接模块，运用ds visulizer3.5分析软件，综合考虑软件打分值高低、分子rmsd及氢键作用和结合能大小选取最优最稳定的对接构象。

13、优选的，所述步骤s3中间苯二酚在样品浓度100μmol/l时抑制率达53.2％，所述化合物1在样品浓度100μmol/l时抑制率最大，达52.69％。

14、优选的，所述步骤s3中化合物2在样品浓度75μmol/l时抑制率最大，达71.50％，化合物3在样品浓度150μmol/l时抑制率最大，达65.05％。

15、优选的，所述步骤s3中化合物7在样品浓度200μmol/l时抑制率最大，达65.80％。

16、优选的，所述步骤s3中化合物8在样品浓度100μmol/l时抑制率最大，达54.89％。

17、优选的，所述步骤s3中化合物9在样品浓度200μmol/l时抑制率最大，达51.82％。

18、(三)有益效果

19、本发明提供了一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法。具备以下有益效果：

20、本发明提供了一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，本发明通过1步合成对间苯二酚酯衍生物，在三乙胺的催化下，以二氯甲烷为溶剂，间苯二酚与相应的酰氯反应得到粗产物，反应结束后将反应液除溶剂、萃取、浓缩得到粗产物，然后用柱色谱层析分离纯化即得目的化合物，本发明目的产物间苯酚酯衍生物，较间苯二酚有更好的稳定性，有更低的毒性，对酪氨酸酶具有良好的抑制作用，本发明还提供间苯酚酯衍生物作为酪氨酸酶抑制剂的用途，从而使得本发明获得的资源丰富、绿色安全、高效简洁。

技术特征：

1.一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，其特征在于：所述步骤s3中间苯二酚在样品浓度100μmol/l时抑制率达53.2％，所述化合物1在样品浓度100μmol/l时抑制率最大，达52.69％。

3.根据权利要求1所述的一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，其特征在于：所述步骤s3中化合物2在样品浓度75μmol/l时抑制率最大，达71.50％，化合物3在样品浓度150μmol/l时抑制率最大，达65.05％。

4.根据权利要求1所述的一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，其特征在于：所述步骤s3中化合物7在样品浓度200μmol/l时抑制率最大，达65.80％。

5.根据权利要求1所述的一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，其特征在于：所述步骤s3中化合物8在样品浓度100μmol/l时抑制率最大，达54.89％。

6.根据权利要求1所述的一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，其特征在于：所述步骤s3中化合物9在样品浓度200μmol/l时抑制率最大，达51.82％。

技术总结
本发明提供一种具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，涉及间苯二酚酯衍生物制备技术领域。该具有酪氨酸酶抑制活性的间苯二酚酯衍生物制备方法，具体包括以下步骤：S1.化合物1‑5的合成，S2.化合物6‑10的合成，S3.化合物1‑10对酪氨酸酶活性的抑制率测定，S4.化合物1‑5与酪氨酸酶的分子对接。本发明通过1步合成对间苯二酚酯衍生物，在三乙胺的催化下，以二氯甲烷为溶剂，间苯二酚与相应的酰氯反应得到粗产物，反应结束后将反应液除溶剂、萃取、浓缩得到粗产物，然后用柱色谱层析分离纯化即得目的化合物，本发明目的产物间苯酚酯衍生物，较间苯二酚有更好的稳定性，有更低的毒性，对酪氨酸酶具有良好的抑制作用。

技术研发人员：杨晓琴,谢东,陈保森,赵平,符汶淦,姜倩,朱国磊,解思达
受保护的技术使用者：西南林业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11