基因工程改造获得的分泌能力和凝血活性增强的人类八因子的制作方法

背景技术：

1、人类fⅷ因子是一种由位于x染色体上的f8基因编码的蛋白质，由2351个氨基酸组成。f8基因的缺陷导致它所编码的fⅷ蛋白的缺失或不足。a型血友病(hemophilia a，ha)是一种由fⅷ蛋白缺乏引起的遗传性出血性疾病，包括因产生有缺陷的fⅷ、fⅷ分泌不足或缺失而导致凝血活性缺失、或因抑制剂对fⅷ的部分或全部抑制而引起的凝血活性不足。由于fⅷ的缺乏，a型血友病人的血液不能正常凝结而控制出血。

2、治疗ha的常见方法是替代疗法。浓缩的fⅷ因子被缓慢地滴入或注射到ha患者的静脉中。这些输液有助于替代患者体内缺失或低下的fⅷ。然而，这种替代疗法可能产生因注射或获得的fⅷ的抑制剂，导致这种替代疗法的失败。

3、发明摘要

4、本发明提供了工程化的人fviii多肽、编码fviii蛋白的核酸和表达fviii蛋白的载体、含有fviii的药物组合物，以及该药物的使用方法，以解决本领域的需求，例如a型血友病的治疗。

5、第一，本发明提供了一种工程化的人fviii(hfviii)多肽，其在hfviii的a1结构域中包括至少两个替代的氨基酸。

6、在一些实施方案中，所述替代的氨基酸包括a1结构域中的l50和l152位点。

7、在一些实施方案中，所述替代的氨基酸包括a1结构域中的l50v和l152p。

8、在一些实施方案中，替代的氨基酸进一步包括a1结构域d20、g22、i61、d115、f129、g132、q139和l159中的一个或多个。

9、在一些实施方案中，替代的氨基酸进一步包括a1结构域d20s、g22l、i61t、a115e、f129i、g132d、q139e和l159f中的一个或多个。

10、在一些实施方案中，替代的氨基酸包括a1结构域中的d20s、l50v和l152p。

11、在一些实施方案中，替代的氨基酸包括a1结构域中d20s、g22l、l50v和l152p。

12、在一些实施方案中，工程化的hfviii多肽包括seq id no:3、seq id no:4、seq idno:5或seq id no:6的氨基酸序列。

13、第二，本发明提供了一个游离的核酸片段，其编码本文公开的工程化hfviii多肽。

14、第三，本发明提供了一种表达载体，其中包括了与启动子可操作地连接的本文公开的核酸片段。

15、第四，本发明提供了一种重组aav(raav)载体，其中包括了与启动子可操作地连接的本文公开的核酸片段。

16、第五，本发明提供了一种药物组合物，其包括了本文公开的表达载体或本文公开的raav载体。

17、第六，本发明提供了一种治疗a型血友病的方法。该方法包括了给患者注射有效量的、本文公开的药物组合物。

18、本发明的以上信息、特征和优点将在以下描述和所附权利要求中得到更好的解释。

技术实现思路

技术特征：

1.一种工程化的人fviii(hfviii)多肽，其在hfviii的a1结构域中包括至少两个替代的氨基酸。

2.根据权利要求1中所述的工程化hfviii多肽，其中替代的氨基酸位点包括a1结构域中的l50和l152。

3.根据权利要求1或2中所述的工程化hfviii多肽，其中替代的氨基酸包括a1结构域中的l50v和l152p。

4.根据权利要求2或3中所述的工程化hfviii多肽，其中替代的氨基酸位点进一步包括a1结构域中的d20、g22、i61、d115、f129、g132、q139和l159的一个或多个氨基酸突变位点。

5.根据权利要求4中的工程化hfviii多肽，其中d20、g22、i61、d115、f129、g132、q139和l159的氨基酸分别替代为d20s、g22l、i61t、d115e、f129i、g132d、q139e和l159f。

6.根据权利要求1-5中任一工程化hfviii多肽，其中替代的氨基酸包括d20s、l50v和l152p。

7.根据权利要求1-6中任一工程化hfviii多肽，其中所述替代的氨基酸包括d20s、g22l、l50v和l152p。

8.根据权利要求1-5中任一工程化hfviii多肽，含有seq id no：3、seq id no：4、seqid no：5、或seq id no：6中的氨基酸序列。

9.一个游离的核酸片段，其编码权利要求1-8中任一工程化hfviii多肽。

10.一种表达载体，包括权利要求9中的核酸片段，该核酸片段与启动子是可操作地连接在一起的。

11.一种重组aav(raav)载体，包括权利要求9中的核酸片段，其中该核酸片段是和启动子可操作地连接在一起的。

12.一种药物组合物，包括权利要求10中的表达载体或权利要求11中的raav载体。

13.一种治疗a型血友病患者的方法，包括向该患者注射有效量的权利要求12中的药物组合物。

技术总结
本发明提供了一种经过改造的人源凝血因子VIII（hFVIII）多肽，其中在hFVIII的A1结构域中包含至少两个被替代的氨基酸。该发明还提供了编码此hFVIII多肽的核酸片段，以及含有该核酸片段的表达载体或rAAV载体，以及使用改造的hFVIII多肽治疗血友病A患者的方法。

技术研发人员：董飚,张波,叶静娅,肖琳,郑赵悦,杨荔,刘瑜
受保护的技术使用者：四川至善唯新生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15