对多能干细胞特异性的标记物及其使用方法与流程

文档序号:37168098发布日期:2024-03-01 12:11阅读:94来源:国知局

本发明通常涉及对多能干细胞特异性的标记物。特别地,本发明涉及由多能干细胞选择性表达的核酸和多肽标记物;以及通过检测一种或多种此类标记物的存在和/或不存在来检测一种或多种多能干细胞的存在和/或不存在的方法。


背景技术:

1、多能干细胞(psc)通常被认为在体外表现出无限自我更新的能力(即在未分化状态下无限分裂的能力);并具有分化成为代表早期胚胎的三个初级生殖细胞层(即外胚层、内胚层和中胚层)的细胞类型的能力。通过能够发育成这三个胚层,psc由此能够产生成熟生物体的所有细胞类型。参见thomson等人(science,1998;282:1145–1147)。在特殊情况下,例如环境条件和/或细胞信号通路的改变,psc退出自我更新的周期,并分化为来源于三个胚层的特化细胞类型。

2、最初,psc来源于胚胎(胚胎干细胞;esc),尽管最近,显示了psc通过重编程因子的表达从成熟(体)细胞中产生。参见takahashi等人(cell,2006,126(4):663-76)。这些psc被称为诱导性psc(ipsc),通常是通过向体细胞传递编码重编程因子的遗传物质来产生,其触发体细胞恢复到多能状态。因此,ipsc是psc的重要来源,不受限制esc实用性的伦理和技术约束(例如,生产与患者匹配的干细胞系)。

3、由于其多能性,psc,例如ipsc,在例如医学和科学研究、药物发现、细胞治疗、再生医学和组织工程学的领域中是重要的。在psc随后分化为特化细胞的应用中,例如在组织工程中,希望能够确定在分化过程之后是否有psc残留。例如,在细胞治疗产品和工程化组织中,残留的未分化psc的存在代表了质量控制问题,因为这些细胞有可能在体内形成畸胎瘤(即致肿瘤性)。

4、已建立的检测psc的存在的技术包括表型多能性检测(例如,胚状体形成;体内畸胎瘤形成),以及分子多能性检测,包括检测与psc相关的分子标记。然而,用于此目的的许多在psc中差异化表达的标记物在分化细胞中也显示出一定水平的表达(尽管具有不同的表达水平,和/或不同的表达模式),因此使得在更大的衍生的组织细胞群体中检测少量残留的psc成为了问题和挑战。


技术实现思路

1、本发明通过提供在psc中唯一表达的标记基因的子集解决了本领域中上述缺陷。因此,这些标记基因作为检测少量psc的分子标记是有用的,包括,例如在主要分化的psc来源的细胞群体中的少量的残留的未分化的psc的存在。本发明的非限制性实施方式包括如下。

2、[1]一种检测多能干细胞的方法,所述方法包括:

3、(a)获取含有多个细胞的目的样本;

4、(b)分析所述目的样本以检测至少一个标记基因的表达,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;以及

5、(c)当在所述目的样本中检测到所述至少一种标记基因的表达时,确定所述目的样本含有多能干细胞。

6、[2]根据[1]的方法,其中目的样本包含诱导多能干细胞。

7、[3]根据[1]的方法,其中目的样本包含胚胎多能干细胞。

8、[4]根据[1]的方法,其中所述目的样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

9、[5]根据[1]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测所述至少一个标记基因的表达。

10、[6]根据[1]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测所述至少一个标记基因的表达。

11、[7]根据[5]的方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测所述至少一个标记基因的表达:液滴数字聚合酶链式反应(dd-pcr)、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

12、[8]根据[7]的方法,其中所述技术包括微阵列分析或下一代测序。

13、[9]一种检测多能干细胞的方法,所述方法包括:

14、(a)获取含有多个细胞的目的样本;

15、(b)测量所述目的样本中至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;

16、(c)将步骤(b)中检测到的表达水平与参考表达水平进行比较,所述参考表达水平是通过在至少一个参考样本中测量所述至少一个标记基因的表达水平获得的,其中所述至少一个参考样本包含多个细胞,并且其中所述至少一个参考样本基本上不含多能干细胞;以及

17、(d)当在步骤(b)中检测到的表达水平大于所述参考表达水平时,确定所述目的样本含有多能干细胞,或

18、当在步骤(b)中检测到的表达水平等于或小于所述参考表达水平时,确定所述目的样本基本上不含多能干细胞。

19、[10]一种定量样本中多能干细胞数量的方法,所述方法包括:

20、(a)获取含有多个细胞的目的样本;

21、(b)测量所述目的样本中至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;

22、(c)将步骤(b)中检测到的表达水平与参考表达水平进行比较,所述参考表达水平是通过在至少一个参考样本中测量所述至少一个标记基因的表达水平获得的,其中所述至少一个参考样本包含多个细胞,其中所述至少一个参考样本包含多能干细胞,并且其中在所述至少一个参考样本中基本上所有的细胞都是多能干细胞;以及

23、(d)根据步骤(c)中的比较结果计算所述目的样本中的多能干细胞的数量。

24、[11]根据[9]的方法,其中目的样本包含诱导多能干细胞。

25、[12]根据[9]的方法,其中目的样本包含胚胎多能干细胞。

26、[13]根据[9]的方法,其中所述目的样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

27、[14]根据[9]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

28、[15]根据[9]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

29、[16]根据[14]的方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达:dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

30、[17]根据[10]的方法,其中目的样本包含诱导多能干细胞。

31、[18]根据[10]的方法,其中目的样本包含胚胎多能干细胞。

32、[19]根据[10]的方法,其中所述目的样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

33、[20]根据[10]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

34、[21]根据[10]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

35、[22]根据[20]的方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达:dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

36、[23]一种用于检测治疗产品中的残留ipsc的检测方法,所述检测方法包括:

37、(a)获得由ipsc生产的治疗产品的样本,所述样本包含多个细胞;

38、(b)分析所述样本以检测至少一个标记基因的表达,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;以及

39、(c)当在所述样本中检测到所述至少一个标记基因的表达时,确定所述治疗产品含有残留的ipsc。

40、[24]根据[23]的检测方法,其中所述样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

41、[25]根据[23]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

42、[26]根据[23]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

43、[27]根据[25]的检测方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达:dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

44、[28]一种用于定量治疗产品中残留ipsc数量的检测方法,所述检测方法包括:

45、(a)获得由ipscs生产的治疗产品的样本,所述样本包含多个细胞;

46、(b)测量所述样本中至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;

47、(c)将步骤(b)中检测到的表达水平与参考表达水平进行比较,所述参考表达水平是通过在至少一个参考样本中测量所述至少一个标记基因的表达水平获得的,其中所述至少一个参考样本包含多个细胞,其中所述至少一个参考样本包含ipsc,并且其中所述至少一个参考样本中的基本上所有的细胞都是ipsc;以及

48、(d)根据步骤(c)中的比较结果定量所述治疗产品中残留ipsc的数量。

49、[29]根据[28]的检测方法,其中所述样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

50、[30]根据[28]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

51、[31]根据[28]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

52、[32]根据[30]的检测方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达:dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

53、[33]一种用于检测治疗产品中残留ipsc的检测方法,所述检测方法包括:

54、(a)获得由ipsc生产的治疗产品的样本,所述样本包含多个细胞;

55、(b)测量所述样本中至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;

56、(c)将步骤(b)中检测到的表达水平与参考表达水平进行比较,所述参考表达水平是通过在至少一个参考样本中测量所述至少一个标记基因的表达水平获得的,其中所述至少一个参考样本包含多个细胞,并且其中所述至少一个参考样本基本上不含多能干细胞;以及

57、(d)当在步骤(b)中检测到的表达水平大于所述参考表达水平时,确定所述治疗产品含有残留ipsc,或

58、当在步骤(b)中检测到的表达水平等于或小于所述参考表达水平时,确定所述治疗产品基本上不含残留ipsc。

59、[34]根据[33]的检测方法,其中所述样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

60、[35]根据[33]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

61、[36]根据[33]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

62、[37]根据[35]的检测方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达:dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

63、[38]一种在不同分化时间下定量治疗产品中残留ipsc数量的检测方法,所述检测方法包括:

64、(a)获得治疗产品的第一样本,所述第一样本在第一分化时间、或在分化开始前获得,所述第一样本含有多个细胞;

65、(b)在不同分化时间获得治疗产品的至少一个额外样本,所述至少一个额外样本含有多个细胞;

66、(c)测量在(a)和(b)中获得的样本中的至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq idno:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;以及

67、(d)根据在步骤(c)中的测量结果,定量在不同分化时间下所述治疗产品中的ipsc的数量。

68、[39]根据[38]的检测方法,其中所述样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

69、[40]根据[38]的检测方法,其中在步骤(c)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

70、[41]根据[38]的检测方法,其中在步骤(c)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

71、[42]根据[40]的检测方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

72、[43]一种测定分化产品纯度的检测方法,所述检测方法包括:

73、(a)获得分化产品的样本,所述样本含有多个细胞;

74、(b)测量所述样本中至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;

75、(c)将步骤(b)中检测到的表达水平与参考表达水平进行比较,所述参考表达水平是通过在至少一个参考样本中测量所述至少一个标记基因的表达水平获得的,其中所述至少一个参考样本包含多个细胞,其中所述至少一个参考样本包含ipsc,并且其中所述至少一个参考样本中基本上所有的细胞都是ipsc;以及

76、(d)根据步骤(c)中的比较结果计算所述样本中ipsc的数量,从而确定分化产品的纯度。

77、[44]根据[43]的检测方法,其中所述样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

78、[45]根据[43]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

79、[46]根据[43]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

80、[47]根据[45]的检测方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达:dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

81、[48]一种测定分化产品纯度的检测方法,所述检测方法包括:

82、(a)获得分化产品的样本,所述样本含有多个细胞;

83、(b)测量所述样本中至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;

84、(c)将步骤(b)中检测到的表达水平与参考表达水平进行比较,所述参考表达水平是通过在至少一个参考样本中测量所述至少一个标记基因的表达水平获得的,其中所述至少一个参考样本包含多个细胞,并且其中所述至少一个参考样本基本上不包含多能干细胞;以及

85、(d)根据步骤(c)中的比较结果计算所述样本中ipsc的数量,从而确定分化产品的纯度。

86、[49]根据[48]的检测方法,其中所述样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

87、[50]根据[48]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

88、[51]根据[48]的检测方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

89、[52]根据[50]的检测方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

90、[53]一种评估ipsc群体分化能力的方法,所述方法包括:

91、(a)获得ipsc群体的第一样本,所述第一样本在诱导所述ipscs分化前获得,所述第一样本含有多个细胞;

92、(b)获得ipsc群体的至少一个额外样本,所述至少一个额外样本是在诱导所述ipsc分化后获得,所述至少一个额外样本含有多个细胞;

93、(c)测量在(a)和(b)中获得的样本中的至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq idno:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;以及

94、(d)将步骤(c)中检测到的不同样本的表达水平相互比较,和/或与参考表达水平比较,从而评估所述ipsc群体中ipsc的分化能力。

95、[54]根据[53]的方法,其中所述样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

96、[55]根据[53]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

97、[56]根据[53]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

98、[57]根据[55]的方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达:dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

99、[58]一种评估ipsc群体多能性的方法,所述方法包括:

100、(a)获取ipsc群体的样本,所述样本含有多个细胞;

101、(b)测量所述样本中至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;

102、(c)将步骤(b)中检测到的表达水平与参考表达水平进行比较,所述参考表达水平是通过在至少一个参考样本中测量所述至少一个标记基因的表达水平获得的,其中所述至少一个参考样本包含多个细胞,其中所述至少一个参考样本包含ipsc,并且其中所述至少一个参考样本中基本上所有的细胞都是能够分化的ipsc;以及

103、(d)根据步骤(c)的比较结果评估所述ipsc群体中ipsc的多能性。

104、[59]根据[58]的方法,其中所述样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

105、[60]根据[58]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

106、[61]根据[58]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

107、[62]根据[60]的方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达:dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

108、[63]一种评估ipsc群体多能性的方法,所述方法包括:

109、(a)获得ipsc群体的第一样本,所述第一样本在诱导所述ipsc分化前获得,所述第一样本含有多个细胞;

110、(b)获得ipsc群体的至少一个额外样本,所述至少一个额外样本是在诱导所述ipsc分化后获得,所述至少一个额外样本含有多个细胞;

111、(c)测量在(a)和(b)中获得的样本中的至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq idno:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列;

112、(d)将步骤(c)中检测到的不同样本的表达水平相互比较,和/或与参考表达水平比较,从而评估所述ipsc群体中ipsc细胞的多能性。

113、[64]根据[63]的方法,其中所述样本中的所述多个细胞以细胞混合物、细胞聚集体或组织的形式存在。

114、[65]根据[63]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量所述标记基因的mrna表达水平检测至少一个标记基因的表达。

115、[66]根据[63]的方法,其中在步骤(b)中,通过测量由所述标记基因编码的表达蛋白的水平检测至少一个标记基因的表达。

116、[67]根据[65]的方法,其中通过包括选自由以下技术组成的组中的方法中检测至少一个标记基因的表达:dd-pcr、聚合酶链式反应(pcr)、逆转录酶pcr(rt-pcr)、定量pcr、定量rt-pcr、northern印迹分析、差异基因表达、rna保护试验、微阵列分析、杂交试验和下一代测序。

117、[68]一种用于检测治疗产品中残留ipsc的检测试剂盒,所述检测试剂盒包含至少一种适用于特异性检测至少一个标记基因表达水平的试剂,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列。

118、[69]根据[68]的检测试剂盒,其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物,能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因。

119、[70]一种用于检测治疗产品中残留ipsc的检测试剂,其中所述试剂能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,并且

120、其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物。

121、[71]一种用于定量治疗产品中ipsc数量的检测试剂盒,所述检测试剂盒包含至少一种适用于特异性检测至少一个标记基因表达水平的试剂,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列。

122、[72]根据[71]的检测试剂盒,其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物,能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因。

123、[73]一种用于定量治疗产品中ipsc数量的检测试剂,其中所述试剂能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,并且

124、其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物。

125、[74]一种用于确定分化产品纯度的检测试剂盒,所述检测试剂盒包含至少一种适用于特异性检测至少一个标记基因表达水平的试剂,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列。

126、[75]根据[74]的检测试剂盒,其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物,能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因。

127、[76]一种测定分化产品纯度的检测试剂,其中所述试剂能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,并且

128、其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物。

129、[77]一种评估ipsc群体分化能力的检测试剂盒,所述检测试剂盒包含至少一种适用于特异性检测至少一个标记基因表达水平的试剂,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列。

130、[78]根据[77]的检测试剂盒,其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物,能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因。

131、[79]一种用于评估ipsc群体分化能力的检测试剂,其中所述试剂能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,并且

132、其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物。

133、[80]一种用于评估ipsc群体多能性的检测试剂盒,所述检测试剂盒包含至少一种适用于特异性检测至少一个标记基因表达水平的试剂,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列。

134、[81]根据[80]的检测试剂盒,其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物,能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因。

135、[82]一种用于评估ipsc群体多能性的检测试剂,其中所述试剂能够特异性检测至少一个标记基因的表达水平,其中所述至少一个标记基因表达具有相应的互补dna(cdna)序列的转录物,包括与选自由seq id no:1-5组成的组中的核苷酸序列具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,并且

136、其中所述试剂包含核酸、探针或一个或多个引物。

137、参引合并

138、本说明书中引用的所有专利、出版物和专利申请在本发明中通过引用合并于此本发明中,如同每个单独的专利、出版物或专利申请被具体和单独地指示为出于所有的目的而通过引用将其整体并入。

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