基于NKG2D的嵌合抗原受体的制作方法

本公开涉及细胞疗法领域，并且更具体地涉及nkg2d嵌合抗原受体。

背景技术：

1、人癌本质上由正常细胞构成，这些正常细胞发生了遗传转化或表观遗传转化而变成异常癌细胞。这样一来，癌细胞开始表达与正常细胞所表达的那些不同的蛋白质和其他抗原。身体的先天免疫系统可使用这些异常肿瘤抗原来特异性地靶向和杀死癌细胞。然而，癌细胞采用各种机制来防止免疫细胞(诸如t和b淋巴细胞)成功靶向癌细胞。

2、目前的t细胞疗法依赖于经富集或修饰的人t细胞来靶向和杀死患者体内的癌细胞。为了增加t细胞靶向和杀死特定癌细胞的能力，已开发了工程化t细胞以表达将t细胞引导至特定靶癌细胞的构建体的方法。包含能够与特定肿瘤抗原相互作用的结合结构域的嵌合抗原受体(car)和工程化t细胞受体(tcr)允许t细胞靶向并杀死表达特定肿瘤抗原的癌细胞。然而，一些肿瘤类型，并且具体地为实体肿瘤，对t细胞免疫疗法具有抗性，并且需要开发下一代增强策略，以靶向肿瘤对t细胞免疫疗法的内在抗性机制。nkg2d配体在大多数类型的肿瘤上表达，并且与健康细胞相比，其证明了肿瘤细胞上配体表达的相对选择性，并代表了增强传统t细胞疗法的靶标。

技术实现思路

1、公开了一种嵌合抗原受体(car)，该car包含nkg2d胞外结构域；跨膜结构域；4-1bb共刺激结构域；和信号传导结构域，该信号传导结构域包含cd3-ζ信号传导结构域。在实施方案中，该4-1bb共刺激结构域包含根据seq id no:33的氨基酸序列。在实施方案中，该cd3-ζ信号传导结构域包含根据seq id no:27的氨基酸序列。在实施方案中，该car还包含cd8-α铰链结构域。在实施方案中，该cd8-α铰链结构域包含根据seq id no:15的氨基酸序列。在实施方案中，该nkg2d胞外结构域包含根据seq id no:3的氨基酸序列。在实施方案中，该跨膜结构域包含cd28跨膜结构域。在实施方案中，该cd28跨膜结构域包含根据seq idno:21的氨基酸序列。在实施方案中，该信号传导结构域还包含cd3-ε信号传导结构域。在实施方案中，该cd3-ε信号传导结构域包含根据seq id no:31的氨基酸序列。

2、公开了一种编码所公开的car的核酸和包含该核酸的载体。在实施方案中，该重组载体或该核酸还包含编码对肿瘤抗原具有特异性的工程化t细胞受体(tcr)的核酸。在实施方案中，该重组载体或该核酸还包含编码对肿瘤抗原具有特异性的第二car的核酸。在实施方案中，肿瘤抗原包含hpv-16e6、hpv-16e7、α叶酸受体、5t4、αvβ6整合素、bcma、b7-h3、b7-h6、caix、cd19、cd20、cd22、cd28、cd30、cd33、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd70、cd79a、cd79b、cd123、cd137(4-1bb)、cd138、cd171、cea、cspg4、cll-1、cs1。egfr、egfr家族包括erbb2(herii)、egfrviii、egp2、egp40、epcam、epha2、epcam、flt3、fap、胎儿achr、fra、gd2、gd3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、hla-al+magei、hla-a2+mage1、hlaa3+mage1、hla-al+ny-es0-1、hla-a2+ny-es0-1、hla-a3+ny-es0-1、il-llrα、il-13rα2、λ、lewis-y、κ、间皮素、mucl、muc16、ncam、nkg2d配体、nye-s0-1、prame、psca、psma、rori、ssx、存活素、taci、tag72、tem、或vegfrii。

3、公开了一种用所公开的核酸或重组载体转化的宿主细胞。在实施方案中，用所公开的核酸或重组载体以及编码对肿瘤抗原具有特异性的工程化t细胞受体(tcr)或对肿瘤抗原具有特异性的第二car的核酸或重组载体转化宿主细胞。在实施方案中，该肿瘤抗原包含：hpv-16e6、hpv-16e7、α叶酸受体、5t4、αvβ6整合素、bcma、b7-h3、b7-h6、caix、cd19、cd20、cd22、cd28、cd30、cd33、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd70、cd79a、cd79b、cd123、cd137(4-1bb)、cd138、cd171、cea、cspg4、cll-1、cs1、egfr、egfr家族(包括erbb2(herii)、egfrviii)、egp2、egp40、epcam、epha2、epcam、fap、胎儿achr、fra、flt3、gd2、gd3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、hla-al+magei、hla-a2+mage1、hlaa3+mage1、hla-al+ny-es0-1、hla-a2+ny-es0-1、hla-a3+ny-es0-1、il-llrα、il-13rα2、λ、lewis-y、κ、间皮素、mucl、muc16、ncam、nkg2d配体、nye-s0-1、prame、psca、psma、rori、ssx、存活素、taci、tag72、tem或vegfrii。在实施方案中，宿主细胞包含诱导多能干细胞(ipsc)、t细胞或nk细胞。公开了一种药物组合物，该药物组合物包含所公开的t细胞和/或nk细胞。公开了一种治疗有需要的患者的疾病的方法，该方法包括向该患者施用所公开的t细胞和/或nk细胞或该药物组合物。在实施方案中，该宿主细胞对患者是同种异体的。

1.一种嵌合抗原受体(car)，所述car包含：

2.根据权利要求1所述的car，所述car还包含：

3.根据权利要求2所述的car，其中所述cd8-α铰链结构域包含根据seq id no:15的氨基酸序列。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的car，其中所述nkg2d胞外结构域包含根据seq idno:3的氨基酸序列。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的car，其中所述跨膜结构域还包含cd28跨膜结构域。

6.根据权利要求5所述的car，其中所述cd28跨膜结构域包含根据seq id no:21的氨基酸序列。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的car，其中所述4-1bb共刺激结构域包含根据seqid no:33或seq id no:63的氨基酸序列。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的car，其中所述cd3-ζ信号传导结构域包含根据seq id no:27的氨基酸序列。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的car，其中所述信号传导结构域还包含cd3-ε信号传导结构域。

10.根据权利要求9所述的car，其中所述cd3-ε信号传导结构域包含根据seq id no:31或seq id no:61的氨基酸序列。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的car，所述car包含与选自由seq id no:53、seqid no:54、seq id no:66、seq id no:68、seq id no:70、seq id no:72、seq id no:74和seq id no:76组成的组的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性的氨基酸序列。

12.一种核酸，所述核酸编码根据权利要求1至11中任一项所述的car。

13.根据权利要求12所述的核酸，所述核酸包含与选自由seq id no:67、seq id no:69、seq id no:71、seq id no:73、seq id no:75和seq id no:77组成的组的核苷酸序列具有至少90％的序列同一性的核苷酸序列。

14.一种重组载体，所述重组载体包含根据权利要求12或13所述的核酸。

15.根据权利要求14所述的重组载体或根据权利要求12或13所述的核酸，其中所述重组载体或所述核酸还包含编码工程化t细胞受体(tcr)的核酸。

16.根据权利要求14所述的重组载体或根据权利要求12或13所述的核酸，其中所述重组载体或所述核酸还包含编码对肿瘤抗原具有特异性的第二car的核酸。

17.根据权利要求15或16所述的重组载体或核酸，其中所述肿瘤抗原包含：hpv-16e6和hpv-16e7、α叶酸受体、5t4、αvβ6整合素、bcma、b7-h3、b7-h6、caix、cd19、cd20、cd22、cd28、cd30、cd33、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd70、cd79a、cd79b、cd123、cd137(4-1bb)、cd138、cd171、cea、cspg4、cll-1、cs1、egfr、egfr家族(包括erbb2(herii)、egfrviii)、egp2、egp40、epcam、epha2、epcam、fap、胎儿achr、fra、flt3、gd2、gd3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、hla-al+magei、hla-a2+mage1、hlaa3+

18.一种宿主细胞，所述宿主细胞用根据权利要求12至17中任一项所述的核酸或重组载体转化。

19.一种宿主细胞，所述宿主细胞用根据权利要求12或13所述的核酸或根据权利要求14所述的重组载体以及编码工程化t细胞受体(tcr)或对肿瘤抗原具有特异性的第二car的核酸或重组载体转化。

20.根据权利要求19所述的宿主细胞，其中所述肿瘤抗原包含：hpv-16e6和hpv-16e7、α叶酸受体、5t4、αvβ6整合素、bcma、b7-h3、b7-h6、caix、cd19、cd20、cd22、cd28、cd30、cd33、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd70、cd79a、cd79b、cd123、cd137(4-1bb)、cd138、cd171、cea、cspg4、cll-1、cs1、egfr、egfr家族(包括erbb2(herii)、egfrviii)、egp2、egp40、epcam、epha2、epcam、fap、胎儿achr、fra、flt3、gd2、gd3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、hla-al+magei、hla-a2+mage1、hlaa3+mage1、hla-al+ny-es0-1、hla-a2+ny-es0-1、hla-a3+ny-es0-1、il-llrα、il-13rα2、λ、lewis-y、κ、间皮素、mucl、muc16、ncam、nkg2d配体、nye-s0-1、prame、psca、psma、rori、ssx、存活素、taci、tag72、tem或vegfrii。

21.根据权利要求18至20中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含ipsc、t细胞或nk细胞。

22.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求21所述的宿主细胞。

23.一种治疗有需要的患者的疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用根据权利要求21所述的宿主细胞或根据权利要求22所述的药物组合物。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述宿主细胞对所述患者是同种异体的。