用于抗SARS-COV-2抗体的双重免疫测定的组合物、试剂盒和方法与流程

背景技术：

1、医学诊断领域利用许多不同形式的分析技术。当怀疑患者感染微生物(例如但不限于细菌或病毒)时，可以对来自患者的生物样品执行测定，以检测通过患者的免疫系统产生的针对微生物的抗体。

2、当需要检测患者血清和血浆中的抗病毒或抗细菌抗原抗体(例如但不限于igg、igm和/或iga)时，已采用桥接血清学测定，其中固定化的病毒/细菌抗原和标记的病毒/细菌抗原经常用于配制测定试剂。在另一个实例中，乳胶颗粒凝集测定利用病毒/细菌抗原包被的乳胶颗粒作为单一试剂，其在患者样品中的抗病毒/细菌抗原抗体的存在下聚集。

3、商业上使用的测定的一个实例是发光氧通道测定(luminescent oxygenchanneling assay)技术。高级化学发光测定例如在美国专利号5，340，716(ullman等人)中进行描述，所述美国专利的全部内容通过引用明确并入本文。目前可用的技术具有高灵敏度并使用几种试剂。特别地，测定要求这些试剂中的两种(被称为“感光珠(sensibead)”和“发光珠(chemibead)”)由其它特异性结合配偶体测定试剂以这样的方式保持，由此感光珠和发光珠彼此紧密接近，以实现信号。当暴露于以特定波长的光时，感光珠释放单线态氧，并且如果两种珠紧密接近，则单线态氧转移到发光珠；这引起化学反应，其导致发光珠释放出可以在不同波长下进行测量的光。

4、在2020年6月，美国食品和药物管理局(u.s.food and drug administration)(fda)对于通过siemens healthineers(tarrytown，ny)开发的基于实验室的总抗体测试颁发了紧急使用授权(emergency use authorization)(eua)，所述总抗体测试用于检测血液中的总sars-cov-2抗体，包括igm和igg的存在。这种免疫测定基于平台，并且被称为cv2t免疫测定。

5、sars-cov-2病毒的表面上的刺突蛋白致使病毒能够穿透并感染多种器官和血管中发现的人细胞。siemens healthineers的total antibody cov2t cv2t免疫测定设计为检测针对刺突蛋白的受体结合结构域(rbd)的抗体。这些抗体中的一些被认为中和sars-cov-2病毒，并且因此预防感染。

6、另外，对于sars-cov-2已开发并利用了多种疫苗，其包括在其焦点内的刺突蛋白，包括广泛使用的pfizer/biontech、moderna、johnson&johnson(janssen)和oxford-astrazeneca covid-19疫苗。因此，免疫的患者目前正在产生针对sars-cov-2刺突蛋白的抗体。

7、因此，本领域需要用于检测sars-cov-2抗体的存在的新的和改进的免疫测定，其可以区分响应疫苗接种产生的抗体与响应感染产生的抗体，并且从而克服了现有技术的缺点和缺陷。本公开正是涉及此类测定，以及含有其的试剂盒和微流体装置以及使用其的方法。

技术实现思路

技术特征：

1.一种用于执行多重测定的试剂盒，其利用化学发光检测系统用于确定样品中的多种抗sars-cov-2抗体的存在和/或浓度，所述试剂盒包含：

2.权利要求1的试剂盒，其中所述第一靶抗原包含s1蛋白的受体结合结构域(rbd)。

3.权利要求1的试剂盒，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2核衣壳蛋白的至少一部分。

4.权利要求1的试剂盒，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2膜蛋白的至少一部分或sars-cov-2包膜蛋白的至少一部分。

5.权利要求1的试剂盒，其中以下至少一种：

6.权利要求1的试剂盒，其中(a)和(b)的荧光分子各自独立地选自铽、铀、钐、铕、钆和镝。

7.一种用于确定样品中的多种抗sars-cov-2抗体的存在和/或浓度的微流体装置，所述微流体装置包括：

8.权利要求7的微流体装置，其中所述第一靶抗原包含s1蛋白的受体结合结构域(rbd)。

9.权利要求7的微流体装置，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2核衣壳蛋白的至少一部分。

10.权利要求7的微流体装置，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2膜蛋白的至少一部分或sars-cov-2包膜蛋白的至少一部分。

11.权利要求7的微流体装置，其中(a)-(e)存在于同一区室中。

12.权利要求7的微流体装置，其中(a)-(e)在两个或更多个区室之间拆分。

13.权利要求7的微流体装置，其中以下至少一种：

14.权利要求7的微流体装置，其中(a)和(b)的荧光分子各自独立地选自铽、铀、钐、铕、钆和镝。

15.一种用于检测样品中的多种抗sars-cov-2抗体的存在和/或浓度的方法，所述方法包括以下步骤：

16.权利要求15的方法，其进一步包括以下步骤：

17.权利要求15的方法，其进一步包括重复步骤(2)-(5)。

18.权利要求15的方法，其中所述第一靶抗原包含s1蛋白的受体结合结构域(rbd)。

19.权利要求15的方法，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2核衣壳蛋白的至少一部分。

20.权利要求15的方法，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2膜蛋白的至少一部分或sars-cov-2包膜蛋白的至少一部分。

21.权利要求15的方法，其中以下至少一种：

22.权利要求15的方法，其中所述样品是选自以下的生物样品：全血或其任何部分、尿、唾液、痰、脑脊液、皮肤、肠液、腹腔内液、囊液、汗、间质液、细胞外液、泪、粘液、膀胱冲洗液、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液及其组合。

23.一种用于执行多重测定的试剂盒，其利用化学发光检测系统用于确定样品中的多种抗sars-cov-2抗体的存在和/或浓度，所述试剂盒包含：

24.权利要求23的试剂盒，其中所述第一靶抗原包含s1蛋白的受体结合结构域(rbd)。

25.权利要求23的试剂盒，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2核衣壳蛋白的至少一部分。

26.权利要求23的试剂盒，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2膜蛋白的至少一部分或sars-cov-2包膜蛋白的至少一部分。

27.权利要求23的试剂盒，其中以下至少一种：

28.权利要求23的试剂盒，其中(a)和(b)的荧光分子各自独立地选自铽、铀、钐、铕、钆和镝。

29.一种用于确定样品中的多种抗sars-cov-2抗体的存在和/或浓度的微流体装置，所述微流体装置包括：

30.权利要求29的微流体装置，其中所述第一靶抗原包含s1蛋白的受体结合结构域(rbd)。

31.权利要求29的微流体装置，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2核衣壳蛋白的至少一部分。

32.权利要求29的微流体装置，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2膜蛋白的至少一部分或sars-cov-2包膜蛋白的至少一部分。

33.权利要求29的微流体装置，其中(a)-(d)存在于同一区室中。

34.权利要求29的微流体装置，其中(a)-(d)在两个或更多个区室之间拆分。

35.权利要求29的微流体装置，其中以下至少一种：

36.权利要求29的微流体装置，其中(a)和(b)的荧光分子各自独立地选自铽、铀、钐、铕、钆和镝。

37.一种用于检测样品中的多种抗sars-cov-2抗体的存在和/或浓度的方法，所述方法包括以下步骤：

38.权利要求37的方法，其进一步包括以下步骤：

39.权利要求37的方法，其进一步包括重复步骤(2)-(5)。

40.权利要求37的方法，其中所述第一靶抗原包含s1蛋白的受体结合结构域(rbd)。

41.权利要求37的方法，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2核衣壳蛋白的至少一部分。

42.权利要求37的方法，其中所述第二靶抗原是sars-cov-2膜蛋白的至少一部分或sars-cov-2包膜蛋白的至少一部分。

43.权利要求37的方法，其中以下至少一种：

44.权利要求37的方法，其中所述样品是选自以下的生物样品：全血或其任何部分、尿、唾液、痰、脑脊液、皮肤、肠液、腹腔内液、囊液、汗、间质液、细胞外液、泪、粘液、膀胱冲洗液、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液及其组合。

技术总结
公开了含有多重化学发光检测系统的试剂盒和用于检测样品中的抗SARS‑CoV‑2抗体的存在和/或浓度的微流体装置以及方法。试剂盒、微流体装置和方法利用与发射以不同波长的光的两种或更多种荧光分子组合的单线态氧可激活的化学发光化合物。在某些非限制性实施方案中，试剂盒、微流体装置和方法可以区分响应疫苗接种生成的抗SARS‑CoV‑2抗体与响应感染生成的抗SARS‑CoV‑2抗体。

技术研发人员：T·魏
受保护的技术使用者：美国西门子医学诊断股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/16