eCAF在免疫检查点阻断治疗法治疗癌症的疗效预测中的应用

本发明属于生物医药领域，涉及ecaf在免疫检查点阻断疗法治疗癌症的疗效预测中的应用。

背景技术：

1、免疫检查点阻断(icb)治疗已经彻底改变了癌症治疗，免疫检查点阻断疗法的基本原理是基于免疫细胞t细胞的激活机制。程序性死亡受体表达在t细胞表面，其配体表达在肿瘤细胞和髓源性抑制细胞表面。程序性死亡受体与其配体结合可使t细胞衰竭而无法正常杀伤肿瘤细胞，肿瘤细胞便可逃脱宿主的免疫监视。因此，程序性死亡受体及其配体被称为“免疫检查点”。基于程序性死亡受体及其配体的免疫检查点阻断疗法通过抑制二者的结合，从而提高宿主免疫系统对肿瘤细胞的攻击性。

2、胃癌(gc)是全球第三大致死癌症，免疫检查点阻断(icb)疗法已阐明了多种实体肿瘤的癌症治疗，但抗pd1单药治疗的益处为晚期gc患者提供的生存益处不到20％。因此，icb耐药的潜在机制仍然是一个重大挑战。

3、肿瘤组织中大量的肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,cafs)为肿瘤的发展构建了良好的环境(占基质细胞50％以上)。cafs细胞分为肌成纤维细胞、周细胞、细胞外基质caf(ecaf)和免疫调节caf(icaf)，不同亚型cafs表面特征基因表达情况不同，如成纤维细胞活化蛋白(fap)、α-平滑肌动蛋白(α-sma)、成纤维细胞特异性蛋白1(fsp1)、血小板衍生生长因子受体(pdgfr)等。

技术实现思路

1、本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本技术的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。鉴于现有技术存在的技术缺陷，本发明克服了现有技术存在的不足，并提供了以下的
技术实现要素：
。

2、本发明提供了一种检测样本中ecaf细胞的试剂在制备免疫检查点阻断疗法治疗肿瘤疗效预测的产品中的应用。

3、进一步，所述检测样本选自器官或组织样本的固体组织，或活组织抽吸物。

4、进一步，所述检测样本为个体肿瘤组织。

5、术语“样本”是指大量生物材料，在一些实施例中，这些生物材料来自患者，并且包含细胞和/或无细胞dna；也就是说，该术语可与术语“标本”或“组织样本”交换使用。术语“样本”有时也分别用在获得(例如)重组核酸的更大组或量的子集或部分的统计学意义上；具体地讲，术语“样本”的统计学用法也可被理解为意指“代表性样本”，那样，这类样本被理解为反映或者近似于(例如)组织中不同核酸的相对频率。本领域的技术人员能够从上下文中辨别该术语的正确用法。特别的，本发明中所使用的样本是指从患者组织获得的类似细胞的集合。组织或细胞样本的来源可以来自新鲜、冷冻和/或保存的器官或组织样本的固体组织，或者活组织检查或者抽吸物。组织样本可以是初级或体外培养的细胞或细胞株。可选地，组织或细胞样本从疾病组织/器官获取。组织样本可能包含不与所述组织自然混合的化合物，诸如防腐剂、抗凝血剂、缓冲剂、固定剂、营养剂、抗生素、或类似化合物。

6、术语“个体”、“患者”或“主体”在本文中可以互换使用，是指哺乳动物、鸟、鱼、爬行动物或任何其它动物。术语“个体”亦包括人类。术语“个体”亦包括家庭宠物。家庭宠物之非限制性实例包括：狗、猫、猪、兔、大鼠、小鼠、沙鼠、仓鼠、天竺鼠、雪貂、鸟、蛇、蜥蜴、鱼、龟及蛙。术语“个体”亦包括家畜动物。家畜动物之非限制性实例包括：羊驼、野牛、骆驼、牛、鹿、猪、马、美洲驼、骡、驴、绵羊、山羊、兔、驯鹿、牦牛、鸡、鹅及火鸡。

7、如本文所用之术语“哺乳动物”是指任何哺乳动物，诸如人类、小鼠、兔、非人类灵长类动物。在一优选实施方式中，所述哺乳动物为人类。

8、进一步，所述肿瘤为实体瘤。

9、进一步，所述实体瘤包括肺癌、脑癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、肾癌、胃癌、子宫颈癌、头颈癌、卵巢癌、睾丸癌、垂体癌、食道癌、皮肤癌、胰腺癌或骨癌。

10、进一步，所述实体瘤为胃癌。

11、进一步，所述检测样本中ecaf细胞的试剂包括检测ecaf细胞活性的试剂、检测ecaf细胞分泌物的试剂、或检测ecaf细胞相关特征基因的试剂。

12、术语“试剂”意味着包含能够防止、改善、或治疗疾病或其它医疗状况的任何分子、化学实体、组合物、药物、治疗剂、化疗剂、或生物试剂。术语“试剂”包括小分子化合物、反义试剂、sirna试剂、抗体、酶、有机或无机肽分子、天然或合成化合物等。试剂可在临床试验、预实验测试、或fda-批准后的任何阶段根据本发明的方法分析。

13、进一步，所述检测ecaf细胞活性的试剂包括以下方法中所使用的试剂，所述方法包括化学染色法、荧光染色法、克隆-集落形成实验、mtt比色法、xtt比色法、ckk-8比色法、alamar blue法、乳酸脱氢酶释放法、srb法、atp含量测定法、液体闪烁计数仪法、或流式细胞术。

14、术语“细胞活性”是指活细胞浓度与细胞总浓度之间的比例，其中后者也包括死细胞。这个比例可以在任何一种方式下进行计算。其中一种方法是用染料标记这些细胞，而在活或死细胞上的染料会有差别。一个用于分辨活和死细胞的例子是使用台盼蓝染料。接下来，就可以数出所标记的细胞并确定活和死细胞的数量。然后计算出这个细胞活性，在其中就可以计算在活细胞数和细胞总数之间的比例。术语“细胞活性”也包括在细胞在增殖分裂过程的快慢，凋亡速度的快慢等。

15、术语“细胞分泌”是指细胞将在粗面内质网上合成而又非内质网组成部分的蛋白和脂通过小泡运输的方式经过高尔基体的进一步加工和分选运送到细胞内相应结构、细胞质膜以及细胞外的过程称为细胞的分泌。“细胞分泌”分为两种∶分泌的物质主要是供细胞内使用；另一种是要通过与细胞质膜的融合进入细胞质膜或运输到细胞外。术语“细胞分泌物”则包括各种酶类、激素、神经递质、局部介质、血清蛋白、抗体，以及细胞外基质成分。

16、进一步，所述检测ecaf细胞相关特征基因的试剂包括检测ecaf细胞相关特征基因postn、或fap的试剂。

17、进一步，所述检测ecaf细胞相关特征基因postn、或fap的试剂包括特异性识别postn或fap基因的探针，或特异性扩增postn或fap基因的引物，或特异性结合postn或fap基因编码的蛋白的结合剂。

18、进一步，所述产品包括试剂盒、芯片、试纸、系统中的一种或多种。

19、如本文所使用，术语“试剂盒”是指用于递送物质的任何递送系统。包含性的术语“试剂盒”是用于研究和临床应用的试剂盒。此类递送系统包括容许从一个位置到另一位置反应试剂(例如适当的容器中的寡核苷酸、酶等)和/或支持物质(例如缓冲剂、用于进行分析的书面说明书等)的储存、转运、或递送的系统。例如，试剂盒包括含有相关反应试剂和/或支持物质的一个或多个壳体(例如盒子)。

20、本发明还提供了一种用于预测免疫检查点阻断疗法治疗肿瘤疗效的产品，所述产品包括检测样本中ecaf细胞的试剂。

21、进一步，所述检测样本选自器官或组织样本的固体组织，或活组织抽吸物。

22、进一步，所述检测样本为个体肿瘤组织。

23、进一步，所述产品包括试剂盒、芯片、试纸、系统中的一种或多种。

24、进一步，所述肿瘤为实体瘤。

25、进一步，所述实体瘤包括肺癌、脑癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、肾癌、胃癌、子宫颈癌、头颈癌、卵巢癌、睾丸癌、垂体癌、食道癌、皮肤癌、胰腺癌或骨癌。

26、进一步，所述实体瘤为胃癌。

27、如本文所使用，与所定义的或描述的物件、组合物、装置、方法、过程、系统等元素相关的术语“包含”或“包括”及其变体，意思是包括一切的或开放式的，允许另外的元素，从而表示所定义的或描述的物件、组合物、装置、方法、过程、系统等包括那些指定的元素--或者，适当时，其等价物--并且其它元素可被包括并仍落入所定义的物件、组合物、装置、方法、过程、系统等的范围/定义内。

28、进一步，所述检测样本中ecaf细胞的试剂包括检测ecaf细胞活性的试剂、检测ecaf细胞分泌物的试剂、或检测ecaf细胞相关特征基因的试剂。

29、进一步，所述检测ecaf细胞活性的试剂包括以下方法中所使用的试剂，所述方法包括化学染色法、荧光染色法、克隆-集落形成实验、mtt比色法、xtt比色法、ckk-8比色法、alamar blue法、乳酸脱氢酶释放法、srb法、atp含量测定法、液体闪烁计数仪法、或流式细胞术。

30、进一步，所述检测ecaf细胞相关特征基因的试剂包括检测ecaf细胞相关特征基因postn、或fap的试剂。

31、术语“标记”表示处于化学或生物实体形式的任何性状或特征。标记可以在性质上是形态的、功能的或生物化学的。在优选的实施例中，标记是差异性或优先地由特定细胞类型表达或不表达，或由细胞在某些条件(例如，在细胞周期的特定时点或在特定细胞外基质)下表达的细胞因子或表面抗原或膜蛋白或胞浆蛋白等。在本发明中更具体地指那些可借助其存在(阳性)或不存在(阴性)来指示细胞或细胞亚群的标记。

32、本发明还提供了ecaf细胞的抑制剂在制备增强icb治疗肿瘤疗效的药物中的应用。

33、进一步，所述肿瘤为实体瘤。

34、进一步，所述实体瘤包括肺癌、脑癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、肾癌、胃癌、子宫颈癌、头颈癌、卵巢癌、睾丸癌、垂体癌、食道癌、皮肤癌、胰腺癌或骨癌。

35、进一步，所述实体瘤为胃癌。

36、进一步，所述药物还包括任何药学可接受的辅料。

37、进一步，所述辅料包括表面活性剂、助流剂、润滑剂、增塑剂，包衣剂、胶囊材料、助溶剂、赋形剂、ph调节剂、抗氧剂、稳定剂、螯合剂、抑菌剂、等渗剂、防腐剂、乳化剂，但不限于此。所述其他药学辅料可以在制备过程中根据剂型制备需要选用。

38、用于制备其药物的有用的药物载体可以是固体，液体或气体；因此，所述组合物可以采用片剂、丸剂、胶囊、栓剂、粉末剂、肠包衣的或其它保护的制剂(例如结合于离子交换树脂或包装在脂蛋白泡囊中)、缓释制剂、溶液、混悬剂、酏剂、气溶胶等的形式。所述载体可以选自不同油，包括石油、动物油、植物油或合成来源的油，例如，花生油，大豆油，矿物油，芝麻油等。水，盐水，含水葡萄糖，和乙二醇是优选的液体载体，特别是(当与血液等渗时)用于可注射溶液。

39、根据本发明的治疗的术语“疗效”可以基于疾病在对根据本发明的应用或方法的反应的过程中的变化来测量。例如，治疗癌症的疗效可以通过肿瘤体积的减少，和/或发展自由存活时间的增加，和/或初级癌症切除后复发风险的降低来测量。更具体地，对于通过免疫疗法治疗的癌症来说，疗效的评估可以通过新颖的免疫相关反应标准(irrc)的免疫治疗剂的抗肿瘤反应的临床模式的范围来进行，其从实体瘤疗效评价标准(recist)和世界卫生组织(who)标准改编而来(j.natl.cancer inst.2010,102(18):1388–1397)。感染性疾病的预防的疗效最终通过在人类群体中的流行病学研究来评估，其常与血清中的中和抗体的滴度和多功能病原体特异性t细胞反应的引发相关。临床前评估可包括用感染性病原体激发后对感染的抗性。感染性疾病的治疗可通过与病原体特异性抗体和/或t细胞免疫反应相关的病原体的生长的抑制或病原体的消除(并因此没有发现病原体)来测量。

40、术语“抑制剂”是指能够特异性的针对ecaf细胞的细胞骨架蛋白抑制剂、细胞凋亡诱导剂、细胞增殖抑制剂、或细胞杀伤剂，通过这些试剂使得ecaf细胞被抑制或特异性的杀伤并且死亡，或无法正常复制分裂。

41、术语“一个实施方案”、“一个实施例”、“实施方案”或“实施例”同义，是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”“在一个实施方案中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。