一种珍珠多肽提取物及其在制备胶原纤维再生促进剂中的应用的制作方法

(一)本发明涉及一种珍珠多肽提取物及其在制备胶原纤维再生促进剂中的应用。

背景技术：

0、(二)背景技术

1、珍珠粉常用于中医美容和治疗各种疾病，能促进皮肤胶原细胞的再生、增强皮肤弹性、祛痘和延缓衰老(杨安全，珍珠活性成分的护肤功效研究，香料香精化妆品，2016；杨安全，珍珠提取物对紫外光辐射人表皮角质细胞损伤的保护作用，药物生物技术，2018)。多肽类药物在预防和治疗疾病中具有用药剂量小、疗效好、毒副作用低等突出优点，因此具有较大的研究开发价值(assaad sila,antioxidant peptides from marine by-products:isolation,identification and application in food systems.a review,journal offunctional foods,2016)。为了进一步探索珍珠粉的护肤作用机理，在珍珠多肽的制备过程中就要保证其完整的空间结构，减少蛋白酶的分解，验证多肽对皮肤胶原纤维的再生和抗氧化的作用。现有的不含酶解的珍珠多肽水溶性技术通常采用醋酸水解法、盐酸水解法、超声水解法和微波水解法等。

2、多肽分离纯化技术分为沉淀法(盐析沉淀，等电点沉淀，低温有机溶剂沉淀)，色谱法(反相高效液相色谱，凝胶排阻色谱，离子交换色谱，亲和色谱)，膜分离，电泳法和多方法联用(付文鹏，动物源活性蛋白多肽的分离纯化方法研究进展，天然产物研究与开发，2019)。

3、珍珠多肽的分离纯化是其研究与开发过程中的重要环节。多肽在分离纯化过程中既要保持其组成成分、结构性质和生物活性均不变，还要保证其安全性和高回收率，以达到经济环保的目的(王静，蛋白/多肽类药物脂质体的研究进展，化工技术与开发，2017)。想要进一步探究多肽的有效分子量，需要对其分子量进行分级，验证不同级分子量范围的活性以备后期的精深加工及工业化生产需要。已有研究报道分子量<2000da多肽比>3000da和>5000da的多肽具有更高的抗氧化活性(zohreh karami,bioactive food derivedpeptides:a review on correlation between structure of bioactive peptides andtheir functional properties,journal of food science and technology,2019)。

4、专利申请cn107337723a“一种制备新型生物活性多肽的方法”公开，通过阳离子交换hplc以及两步反相hplc从敬钊缨毛蛛毒液中分离鉴定到一种新型神经毒素(spkp-35)。其一级结构由36个氨基酸残基组成，分子量为4120.8da。蜘蛛毒液已成为神经毒素的一个重要新来源，而且蜘蛛毒液中特异性药物和毒素分子也是农业杀虫剂的较好模式分子。

5、专利申请cn106866787b“一种提取自香菇的醒酒肽及其制备方法与应用”公开，所述醒酒肽为ile-pro-leu-his。以香菇足为原料，以碱提酸沉法提取香菇足粉中的蛋白，再用碱性蛋白酶酶解，经超滤分离，得到不同分子量范围(0-3kda，3-5kda，5-10kda)的香菇足多肽，采用葡聚糖凝胶层析g-25纯化，得到醒酒性高的香菇足多肽。

6、专利申请cn109836471a“一种从黄芪中提取分离活性多肽的方法”公开，将已浓缩得到的洗脱液ⅳ，通过hplc梯度洗脱分析及纯化，收集目标多肽的洗脱液，在氮气保护加热浓缩至干，得到黄芪目标多肽成品。

7、本发明结合传统的植物化学分析方法、生物化学方法及现代色谱方法进行多肽分离纯化。

技术实现思路

0、(三)
技术实现要素：

1、本发明目的是提供一种珍珠多肽提取物及在制备胶原纤维再生促进剂中的应用，本发明从纳米珍珠粉中提取得到高纯度的珍珠多肽，所述珍珠多肽具有抗氧化和促胶原纤维再生的作用，解决了珍珠粉在护肤产品中功能有效作用成分不明确的问题。

2、本发明采用的技术方案是：

3、本发明提供一种珍珠多肽提取物，所述珍珠多肽提取物按如下方法制备：纳米珍珠粉，加入醋酸-盐酸-水溶液，磁力搅拌2-5h，再用超纯水通过300-800da透析袋透析，截留液上样sp-sephadex g-25填料柱(25mm*50cm)进行纯化，用3-5倍柱体积的超纯水洗脱，洗脱速度0.5-1.5ml/min，收集流出液，合并蛋白含量高于0.05mg/ml且有bca显色的流出液，加入3000da滤膜的超滤杯，透过液再倒入2000da滤膜的超滤杯中，收集透过液得到<2000da的珍珠多肽；冻干(-80℃，48h)，获得珍珠多肽提取物。

4、优选的，所述醋酸-盐酸-水溶液中醋酸、盐酸与水体积比为2：1：48，所述醋酸-盐酸-水溶液体积用量以纳米珍珠粉质量计为10-30ml/g，优选20ml/g。

5、优选的，所述透析采用500da透析袋透析24h。

6、优选的，所述洗脱速度1ml/min，每10ml流出液收集1管。

7、优选的，磁力搅拌转速60-100rpm，优选80rpm。

8、本发明还提供一种珍珠多肽提取物在制备抗氧化剂中的应用。分子量＜2000da的珍珠多肽的羟基自由基清除能力最强，明显高于其他组分。

9、本发明还提供一种珍珠多肽提取物在制备促胶原纤维再生制剂中的应用。

10、与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：本发明提取的珍珠多肽提取物提高了珍珠粉的利用率，0.015％的珍珠多肽提取物中多肽含量与5％珍珠粉中多肽含量相同，且0.015％多肽组的效果较好，胶原纤维含量最高，为62.65±2.85％，小鼠皮肤光滑细腻且有弹性。20％多肽组胶原纤维含量63.04±2.23％，与0.015％多肽组相差不大，30％多肽组的效果出现了下降趋势。由此证明，低浓度多肽样品即可对uvb损伤的皮肤起到修复作用，高浓度多肽组反而会抑制其活性。另外，珍珠多肽提取流程简单易操作，可得到纯度高的样品。

技术特征：

1.一种珍珠多肽提取物，其特征在于，所述珍珠多肽提取物按如下方法制备：纳米珍珠粉，加入醋酸-盐酸-水溶液，磁力搅拌2-5h，再用超纯水通过300-800da透析袋透析，截留液上样sp-sephadex g-25填料柱进行纯化，用3-5倍柱体积的超纯水洗脱，洗脱速度0.5-1.5ml/min，收集流出液，合并蛋白含量高于0.05mg/ml且有bca显色的流出液，加入3000da滤膜的超滤杯，透过液再倒入2000da滤膜的超滤杯中，收集透过液得到<2000da的珍珠多肽，冻干，获得珍珠多肽提取物。

2.如权利要求1所述珍珠多肽提取物，其特征在于，所述醋酸-盐酸-水溶液中醋酸、盐酸与水体积比为2：1：48。

3.如权利要求1所述珍珠多肽提取物，其特征在于，所述醋酸-盐酸-水溶液体积用量以纳米珍珠粉质量计为10-30ml/g。

4.如权利要求1所述珍珠多肽提取物，其特征在于，所述透析采用500da透析袋透析24h。

5.如权利要求1所述珍珠多肽提取物，其特征在于，所述洗脱速度1ml/min，每10ml流出液收集1管。

6.如权利要求1所述珍珠多肽提取物，其特征在于，磁力搅拌转速60-100rpm。

7.如权利要求1所述珍珠多肽提取物，其特征在于，冻干条件为-80℃，48h。

8.一种权利要求1珍珠多肽提取物在制备抗氧化剂中的应用。

9.一种权利要求1珍珠多肽提取物在制备促胶原纤维再生制剂中的应用。

技术总结
本发明公开了一种珍珠多肽提取物及其在制备胶原纤维再生促进剂中的应用，将纳米珍珠粉加入醋酸‑盐酸‑水溶液，磁力搅拌2‑5h，再用超纯水通过300‑800Da透析袋透析，截留液上样SP‑Sephadex G‑25填料柱进行纯化，用3‑5倍柱体积的超纯水洗脱，洗脱速度0.5‑1.5mL/min，合并蛋白含量高于0.05mg/mL且有BCA显色的流出液，超滤浓缩，得到珍珠多肽提取物；本发明提取的珍珠多肽提取物提高了珍珠粉的利用率，0.015％的珍珠多肽提取物中多肽含量与5％珍珠粉中多肽含量相同，为62.65±2.85％，珍珠多肽提取流程简单易操作，可得到纯度高的样品。

技术研发人员：王龑,裴晶莹,孙培龙,唐长明,陶俊俊,阮华君
受保护的技术使用者：浙江长生鸟健康科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13