一种食源性致病菌的高灵敏检测试剂盒及其使用方法与流程

本发明涉及食源性致病菌检测，具体为一种食源性致病菌的高灵敏检测试剂盒及其使用方法。

背景技术：

1、食源性致病菌的快速检测，每一个反应体系中均含有目标菌的特异性引物和荧光探针，通过收集pcr扩增产生的荧光信号，通过仪器便可快速对常见食源性致病菌核酸的定性检测，首先进行pcr体系配置，在进行pcr体系配置时，无核酸酶水、核酸扩增反应液、引物探针反应液abc（以下简称试剂溶液）将以一定的比例放入pcr反应管中混合制备反应体系，然后对所要检测的样品进行增菌，增菌后取增菌液中的上清液于反应管中加生理盐水或者灭菌水混匀，提取核酸，核酸提取完成后进行核酸加样，取定量核酸于之前制作的反应体系溶液中，然后加入阴性和阳性对照溶液，然后将制作的溶液进行上机扩增，进行食源性致病菌的快速检测；

2、在上述操作过程中，有大量的试剂溶液混合制备，比如反应体系的制备，增菌液的制备，核酸提取加样，不同试剂溶液在混合时，每一组分的溶液的比例都是确定的，比如一个反应体系溶液制备的比例为无核酸酶水：2*核酸扩增反应液：10*引物探针反应液abc=3；5：1，溶液制备时各组分溶液加入时的误差均影响最后食源性致病菌测定的数据准确性、灵敏性，而在进行溶液的制备时，一般是工作人员通过吸管通过经验进行配置，这十分依赖于工作人员的技能水平和当时的工作状态，容易造成最后检测数据的不准确。

3、为此，提出一种食源性致病菌的高灵敏检测试剂盒及其使用方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种食源性致病菌的高灵敏检测试剂盒及其使用方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种食源性致病菌的高灵敏检测试剂盒，包括试剂盒；铰接在试剂盒上端面的用于定量取用试剂溶液的试剂部，所述试剂部上端面铰接有控制试剂部的盒盖，所述试剂部和盒盖上设置有定量组件，所述盒盖上端面开设有空腔；开设于盒盖上的空腔，所述空腔内滑动连接有控制板；设于试剂盒内用于进行收取试剂溶液的pcr反应管，所述试剂盒内放置有用于集中放置含有配置好的试剂溶液混合液的pcr反应管的联排，所述试剂盒、试剂部和盒盖外表面均涂抹有绝热保冷材料。

3、优选的，所述定量组件包括开设在试剂部上的定量孔，所述定量孔为多个，且所述定量孔内部上端贯穿伸出有压板，所述压板底部固定连接有支撑弹簧，所述支撑弹簧下端固定连接在试剂部上，所述压板上端面和控制板的下端面贴合，所述定量孔内弹性密封连接有密封计量块，所述定量孔底部开设有开口，所述开口内固定连接有橡胶片，所述橡胶片内密集开设有倒锥形的锥形孔，所述锥形孔下方对应设置有pcr反应管，所述pcr反应管放置在试剂盒内。

4、优选的，所述试剂部内开设有多个置物腔，每个所述置物腔和一个定量孔对应设置，且每个所述置物腔和其对应的定量孔底部相通开设有斜通孔，所述斜通孔朝向定量孔底部倾斜设置，所述置物腔上端面嵌入式固定连接有透明片，所述透明片上开设有进口。

5、优选的，所述控制板底部固定连接有可压缩的海绵块，所述海绵块下端和透明片接触连接。

6、优选的，所述压板上固定连接有弯弧片，所述弯弧片下端贯穿伸出试剂部并滑动连接，所述弯弧片底部开设有用于对pcr反应管进行定位的弯弧槽，所述弯弧槽内设有保护pcr反应管管口的柔性衬垫，所述弯弧槽和pcr反应管管口相适应。

7、优选的，每个所述置物腔上的透明片一侧均可拆卸地设置有对应置物腔内试剂溶液的标记，且每个所述pcr反应管侧壁上端也可拆卸的粘合有用于对应pcr反应管内混合的试剂溶液的标记，需要混合的试剂溶液所对应的所述定量孔彼此相邻，且共同对应下方的pcr反应管。

8、优选的，所述试剂盒内开设有多个容纳腔，所述容纳腔内侧壁开设有螺旋槽，所述pcr反应管伸入螺旋槽内，且所述pcr反应管侧壁上固定连接有凸起，所述凸起伸入并活动连接在螺旋槽内，所述螺旋槽上端相通开设有用于取出pcr反应管的直槽，所述pcr反应管底部活动连接有复位弹簧，所述复位弹簧下端固定连接在容纳腔内表面底部。

9、优选的，所述控制板上开设有反光孔，所述反光孔内固定连接有荧光灯，所述荧光灯底部设置有控制开关，所述控制开关设置在海绵块内。

10、优选的，所述空腔上固定连接有双杆件，所述控制板的上端面中心处嵌入式固定连接有控制筒，所述控制筒内贯穿伸出并滑动连接有t字块，所述t字块伸出控制筒的一端贯穿伸出双杆件的杆间间隙并转动连接有窄框，所述窄框底部对称固定连接有定位杆，所述双杆件上对称开设有定位孔，所述定位杆一端伸入定位孔并滑动连接。

11、优选的，一种食源性致病菌的高灵敏检测试剂盒的使用方法包括以下步骤：

12、s1：开盖注入溶液，打开固定盒盖的锁扣，然后打开盒盖，按照标记在不同的置物腔内注入相应的试剂溶液；

13、s2：定量提取，制备反应体系溶液：使控制板向下移动，能够定量提取相应的试剂溶液，需要混合的试剂溶液自动落入同一个pcr反应管中，即为制备得到的反应体系溶液；

14、s3：制取增菌液，增菌后通过该装置对定量的该增菌液中的上清液和生理盐水或者灭菌水混合；

15、s4：核酸提取加样，用s得到的混合试剂溶液进行提取核酸，通过该装置对定量的核酸分别和阴性和阳性对照溶液进行混合，得到不同试剂溶液的pcr反应管，然后进行将制得的检测试剂溶液放入联排中，再将联排放入仪器中进行食源性致病菌的快速检测。

16、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

17、1、本发明通过试剂部和盒盖均通过锁扣固定，在进行食源性致病菌的检测制取反应体系溶液时，打开固定盒盖的锁扣，手持窄框拉动盒盖使其打开，透明片为透明材料制成，如玻璃，透明片透明的设计便于及时贯穿置物腔内的试剂溶液储存情况，便于及时添加相应的试剂溶液，海绵块和透明片的贴合面为不能让试剂溶液通过的硬塑面，其余为普通海绵的可弹性压缩部分，这样设计能够有效防止在该装置倾倒时置物腔内的溶液不会马上洒出来，这样给了携带该装置的人员调正的时间，也能够具有一定的防止灰尘等进入置物腔内的试剂溶液中的作用；

18、2、本发明通过手持窄框可携带该装置移动，并将该装置放入冷藏室存储，试剂盒、试剂部和盒盖外表面均涂抹有绝热保冷材料的设计能够在将该装置拿出冷藏室后减少该装置内温度的上升速度，使内部试剂溶液能够更久的在适宜的低温环境中储存；

19、3、本发明通过密封计量块底部在定量孔底部形成储存溶液的存液空间，注入置物腔内的溶液通过斜通孔滴入存液空间中，每个所述的存液空间的大小刚好为进行所在试剂溶液制备时的一次制备量，这样能保证后续试剂混合溶液制备完成后，其内混合的每种溶液组分相同，即制备完成后的试剂混合溶液内的其各组分比例较为准确，以防止工作人员由于自身的技能水平和当时的工作状态，容易造成最后检测数据的不准确的问题；

20、4、本发明通过窄框向下移动，pcr反应管的瓶口伸入弧槽的设计能够对pcr反应管进行限位使其能够更好地转动离心震荡，也能够起到防止pcr反应管瓶口歪斜和调正的作用，弯弧片再向下移动首先挤压pcr反应管并使其向下移动，pcr反应管上固定连接的凸起向下移动，由于凸起伸入在螺旋槽内，因此凸起在螺旋槽内移动，螺旋槽的螺旋形状使其凸起螺旋下移，即凸起固定连接的pcr反应管在下移时螺旋转动，能够对pcr反应管内的混合试剂溶液进行实时的混合离心震荡；

21、5、本发明通过压板向下移动在接触到密封计量块后继续向下移动，此时密封计量块在向下移动堵住斜通孔后挤压存液空间内的试剂溶液，定量孔底部存液空间底部的橡胶片受压扩张，橡胶片上的倒锥形的锥形孔在橡胶片受压扩张时扭曲，锥形孔由原来的倒锥形变为近似的圆柱形，此时存液空间内的试剂溶液被下移的密封计量块通过变为近似圆柱形的锥形孔喷出，并喷至下方的pcr反应管内；

22、6、本发明通过需要混合的试剂溶液所对应的定量孔彼此相邻，且共同对应下方的pcr反应管的设计使在制作混合的试剂溶液时此步骤中混合试剂溶液指的是反应体系溶液，能够在喷出时落入同一个pcr反应管内混合，且在pcr反应管下降时自身转动，即能够实时地对落入pcr反应管内的不同种类的试剂溶液混合离心震荡，从而能够混合得更加均匀，这样定量提取各不同试剂溶液且自动混合的设计，只需要使控制板下移就能够完成，且由于制取得到的混合的试剂溶液此步骤中混合试剂溶液指的是反应体系溶液内各组分溶液的比例相对于人工用吸管提取更为精确，且避免了在反复大量人工提取、混合后容易出现误差甚至某一溶液忘记提取的情况，更加有利于提高对食源性致病菌检测的数据准确性、灵敏性；

23、7、本发明通过在存液空间内的试剂溶液全部被挤压喷至pcr反应管内时，控制板底部的控制开关和透明片接触并受到其挤压从而启动荧光灯，荧光灯发出灯光，当工作人员看到亮光后则表示存液空间内的试剂溶液全部被挤压喷至pcr反应管内；

24、8、本发明通过此时向上拉动窄框使控制板向上移动，或者松手使支撑弹簧的弹力使压板向上移动使其上端的控制板向上移动，此时pcr反应管在复位弹簧的作用力下向上移动，由于螺旋槽对pcr反应管上固定连接的凸起的限位，在pcr反应管向上移动时是反向螺旋转动上升，因此再一次对pcr反应管内的混合的试剂溶液进行混合离心震荡，使其效果更佳；

25、9、本发明通过在混合试剂溶液上述为制取反应体系溶液的过程制取完成后，打开固定试剂部的锁扣，转动打开试剂部，从而能够拿出试剂盒内的pcr反应管，然后放入联排内，然后制作增菌液，核酸提取加样时中的取样混合时通过该装置进行，然后将联排中制作的各种混合试剂溶液再依照pcr反应管上的标记和置物腔上的标记进行对照放入，制得最后的检测试剂溶液所在的pcr反应管放入联排中，再将联排上的pcr反应管进行上机扩增检测，从而完成对食源性致病菌的检测；

26、10、本发明通过螺旋槽上端的直槽的设计是为了在提取完成后能够取出pcr反应管，在使控制板下移或者上移时控制板的速度越快，pcr反应管的转动速度就越快，其混合离心震荡效果就越好，但是在提取的试剂溶液较多的场合，控制板上移的最后一段距离应逐渐变慢，这样能够防止pcr反应管上的凸起在移动至直槽时失去螺旋槽的限位自身不会由于转动太快和由于复位弹簧的余震向上弹起使pcr反应管歪斜，造成在pcr反应管内容纳的试剂溶液太多时会有洒出的情况发生。