从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物及其制备方法

本发明属于天然药物化学，具体涉及一种从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物及其制备方法。

背景技术：

1、金花茶(camellia nitidissima)属于山茶科山茶属植物，具有极高的药用价值，文献报告其花和叶部位具有抑菌、抗肿瘤、抗炎、降血糖、提高免疫力等功效，金花茶具有广阔的市场前景和开发价值。

2、植物内生菌是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌，普遍存在于高等植物中。现有技术对金花茶内生菌研究处于空白领域，本发明所涉及从金花茶内生菌aspergillus niger的发酵产物中分离纯化得到两种化合物，并通过体外抗肿瘤活性筛选发现其具有显著抑制活性，为抗肿瘤药物的研发提供重要物质来源。同时通过发酵技术，解决肿瘤药物生产的成本问题，扩大了内生菌的使用范围。

技术实现思路

1、本发明旨在解决上述技术问题，提供一种从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物及其制备方法。

2、本发明的技术方案为：

3、一种从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物，结构如式i和/或式ⅱ所示：

4、

5、分别命名为：camellianigerⅰ(式i)、camellianigerⅱ(式ⅱ)。

6、一种本发明的从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物的制备方法，包括以下步骤：

7、(1)金花茶内生菌的分离纯化：对金花茶茎部位消毒，切成短茎，然后将短茎接种于含有青霉素-链霉素的琼脂培养基上，当短茎从内部向培养基周围长出菌落时，挑出单菌落进行纯化，得到金花茶内生菌aspergillus niger；

8、(2)金花茶内生菌aspergillus niger发酵产物的制备：将步骤(1)的金花茶内生菌aspergillus niger接种至大米培养基表面进行发酵，得到金花茶内生菌aspergillusniger发酵产物；

9、(3)将步骤(2)金花茶内生菌aspergillus niger发酵产物捣碎，加入甲醇浸泡，过滤，收集滤液，减压浓缩，得到甲醇浸膏；

10、(4)将步骤(3)的甲醇浸膏用水搅拌分散成混悬液，加入乙酸乙酯萃取，过滤，收集滤液，减压浓缩，得到乙酸乙酯提取物；

11、(5)将步骤(4)所述乙酸乙酯提取物进行硅胶柱层析色谱分离，以体积比为100：1、50：1、20：1、10：1、5：1的三氯甲烷-甲醇梯度洗脱，收集合并相同馏分，得到6个馏分，分别记为其中馏分fr.4为体积比为20：1的三氯甲烷-甲醇洗脱得到；

12、(6)将步骤(5)的馏分fr.4浓缩，进行葡聚糖凝胶色谱分离，以体积比为5：5、7：3、9：1、1：0的甲醇-水梯度洗脱，收集合并相同馏分，得到4个馏分，分别记为其中馏分fr.4.2为体积比为7：3的甲醇-水洗脱得到，馏分fr.4.3为体积比为9：1的甲醇-水洗脱得到；

13、(7)对步骤(6)的馏分fr.4.2浓缩后，采用半制备高效液相色谱分离，得到式i的新化合物；

14、(8)对步骤(6)的馏分fr.4.3浓缩后，采用半制备高效液相色谱分离，得到式ⅱ的新化合物。

15、进一步地，步骤(2)中，所述大米培养基组成为：60g大米、3g蛋白胨、37.5g水。

16、进一步地，步骤(2)中，所述发酵条件为：温度：湿度：

17、进一步地，步骤(7)中，所述半制备高效液相色谱的条件为：色谱柱选择welchultimate xb-c18半制柱；流动相为乙腈和水的混合液，所述乙腈和水的体积比25：75；检测波长为210nm。

18、进一步地，步骤(8)中，所述半制备高效液相色谱的条件为：色谱柱选择welchultimate xb-c18半制柱；流动相为乙腈和水的混合液，所述乙腈和水的体积比37：63；检测波长为210nm。

19、本发明还提供一种从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。

20、具体地，所述肿瘤为肺癌、结肠癌、乳腺癌或宫颈癌。

21、本发明的有益效果为：

22、1、本发明以金花茶为原材料，从金花茶内生菌代谢产物中提取获得2种新化合物，经过鉴定分别为camellianigerⅰ(式i)、camellianigerⅱ(式ⅱ)，为金花茶药材的药理活性研究提供了化学依据和物质参考，并为金花茶制剂的开发和质量控制提供了基础。

23、2、本发明的2种新化合物均为首次从金花茶内生菌aspergillus niger发酵产物中得到；2种化合物均具有比较显著的体外抗肿瘤活性，为进一步开展深入的药理和临床研究，开发疗效强、副作用小的新型抗肿瘤药物提供了基础。

技术特征：

1.一种从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物，其特征在于，结构如式i和/或式ⅱ所示：

2.一种权利要求1所述的从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述大米培养基组成为：60g大米、3g蛋白胨、37.5g水。

4.根据权利要求3所述的从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述发酵条件为：温度：湿度：

5.根据权利要求2所述的从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，所述半制备高效液相色谱的条件为：色谱柱选择welchultimatexb-c18半制柱；流动相为乙腈和水的混合液，所述乙腈和水的体积比25：75；检测波长为210nm。

6.根据权利要求2所述的从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物的制备方法，其特征在于，步骤(8)中，所述半制备高效液相色谱的条件为：色谱柱选择welchultimatexb-c18半制柱；流动相为乙腈和水的混合液，所述乙腈和水的体积比37：63；检测波长为210nm。

7.权利要求1所述的从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肺癌、结肠癌、乳腺癌或宫颈癌。

技术总结
本发明属于天然药物化学技术领域，具体涉及一种从金花茶内生菌代谢产物中提取的新化合物及其制备方法，本发明中以金花茶为原材料，从金花茶内生菌代谢产物中提取获得2种新化合物，经过鉴定分别为CamelliaNigerⅠ(式I)、CamelliaNigerⅡ(式Ⅱ)，本发明的2种新化合物均为首次从金花茶内生菌Aspergillusniger发酵产物中得到；2种化合物均具有比较显著的体外抗肿瘤活性，为进一步开展深入的药理和临床研究，开发疗效强、副作用小的新型抗肿瘤药物提供了基础。

技术研发人员：杨克迪,谭璐,马思远,颜健华,李一向,葛利
受保护的技术使用者：广西大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13