黄芪甲苷在制备促进囊胚形成和/或提高囊胚质量产品中的应用

本发明涉及动物医药相关，尤其是涉及黄芪甲苷在制备促进囊胚形成和/或提高囊胚质量产品中的应用。

背景技术：

1、辅助生殖技术已经在全球盛行并被人们所接受，该技术是在体内外对卵子、精子或受精卵发育的胚胎等进行操作，从而形成新生命的技术。由于体内外操作差异和女性生育年龄的增加，该技术面临着严峻的挑战，主要包括母体因素、胚胎障碍、营养因子不足、受精失败等，从而导致不良出生或子代健康等问题。

2、在哺乳动物胚胎的体外发生过程中，顺利发育到囊胚是非常关键的一步。囊胚具有紧密排列的滋养层和松散排列的内细胞团，只有质量最好的胚胎才能发育成为最终的囊胚。此外，囊胚也是胚胎体外培养的终末阶段，它通常形成于卵子受精后的第5-7天。自然状态下，胚胎以囊胚的形式植入母体，这样能获得较高的胚胎植入率。然而，相比于体内动态平衡的微环境，体外培养胚胎受到温度、湿度、氧气、二氧化碳和氨基酸等理化因素的影响。

3、胚胎发育是受精卵发育成幼体的过程。为了更好的模拟体外母体环境，通过向体外培养液中添加抗氧化药物来减少或者避免体外应激所引起的胚胎阻滞。因此，寻找天然抗氧化剂药物对提高胚胎发育和辅助生殖技术是非常必要的。

4、黄芪是豆科黄芪属植物，于春和夏两季采摘植物根部，需要除去茎苗、须根及根头等部分，再晒至六七成干后即可用药。黄芪甲苷，是从黄芪上提取出来的药物，属于一种有机物，外观为白色结晶粉末。黄芪甲苷是黄芪水提取物中的主要活性物质，其分子式和分子量分别为c14h68o14和784.97，易溶于乙醇、甲醇或丙酮，属于环烷型三萜糖苷化合物，被称为“超级黄芪多糖”。迄今为止，许多细胞实验和小动物模型研究表明，黄芪甲苷iv(asiv)在心脏血管、肺脏、肾脏和脑部中具有有效的保护作用，无明显不良反应或临床前毒性，具有抗氧化应激、抗细胞凋亡、抗老化、免疫活性、神经功能性保护、抗癌症和糖尿病等多种药理活性。部分相关技术记载其对改善卵母细胞质量及受精卵卵裂至2-细胞期有一定的促进作用，但卵母细胞及受精卵卵裂至2-细胞期与囊胚期所涉及的作用机理、细胞质变化等均是不同的，如脂质水平变化趋势等。因此，asiv发其对囊胚期胚胎发育是否有促进作用仍难以预期。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出黄芪甲苷在制备促进囊胚形成和/或提高囊胚质量产品中的应用，提供了一种新的促进囊胚形成和/或提高囊胚质量的途径。

2、根据本发明的一个方面，提出了黄芪甲苷iv在制备促进囊胚形成和/或提高囊胚质量产品中的应用。

3、根据本发明的一种优选的实施方式，至少具有以下有益效果：本发明方案可用于制备体外胚胎发育的培养基、试剂、药物等产品，也可以用于体内促进囊胚形成和/或提高囊胚质量；与体内动态平衡的微环境相比，体外培养胚胎更容易受到温度、湿度、氧气、二氧化碳、氨基酸等理化因素的影响，从而导致囊胚体外培养形成障碍且胚胎质量降低，本发明方案创新性地提出通过添加asiv促进囊胚形成并提升囊胚质量，asiv通过增强囊胚的增殖能力及线粒体活性，并改善线粒体分布，抑制脂滴形成，从而提升囊胚形成率并提高囊胚质量，对辅助生殖具有重要影响。

4、在本发明的一些实施方式中，所述产品为试剂、培养基或药物中的至少一种。

5、在本发明的一些实施方式中，所述药物还包括药学上可接受的辅料。

6、在本发明的一些优选实施方式中，所述辅料包括药学上可接受的稀释剂、赋形剂、载体、粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂或增溶剂中的至少一种。所述药物可以是多种形式，例如液体、半固体和固体剂型。

7、在本发明的另一些实施方式中，所述药物的形式包括液体溶液(例如可注射和可输注的溶液)、喷雾剂、分散体或混悬剂。

8、在本发明的一些具体实施方式中，所述药物为液体溶液。

9、在本发明的一些优选实施方式中，所述培养基还包括溶剂、无机盐、抗生素、有利于体外胚胎细胞发育的营养功能因子。

10、在本发明的一些优选实施方式中，所述溶剂为水。

11、在本发明的一些优选实施方式中，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫酸镁、碳酸氢钠中的至少一种。

12、在本发明的一些优选实施方式中，所述抗生素包括庆大霉素、青霉素、链霉素等中的至少一种。

13、在本发明的一些优选实施方式中，所述有利于体外胚胎细胞发育的营养功能因子包括激素、能量底物、氨基酸、生长因子中的至少一种。

14、在本发明的一些优选实施方式中，所述激素包括促卵泡激素(fsh)、促黄体生成素(lh)、人绒毛膜促性腺激素(hcg)、孕马血清促性腺素(pmsg)、雌二醇(e2)中的至少一种。

15、在本发明的一些优选实施方式中，所述能量底物包括葡萄糖、丙酮酸盐、乳酸盐中的至少一种。

16、在本发明的一些优选实施方式中，所述氨基酸包括必需氨基酸、非必须氨基酸中的至少一种。

17、在本发明的一些优选实施方式中，所述氨基酸包括l-半胱氨酸、l-异亮氨酸、l-亮氨酸、l-蛋氨酸、l-苯丙氨酸、l-苏氨酸、l-色氨酸、l-酪氨酸、l-缬氨酸、l-盐酸精氨酸、l-胱氨酸二盐酸盐、l-盐酸组氨酸一水物、l-赖氨酸盐酸盐中的至少一种。

18、在本发明的一些优选实施方式中，所述生长因子包括表皮生长因子(egf)、胰岛素样生长因子(igf)、碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)、神经生长因子(ngf)中的至少一种。

19、在本发明的一些实施方式中，黄芪甲苷iv，即3，6-环氧基-16，24-二羟基-20-(β-d-吡喃木糖氧基)-24，16-环氰烷-25-基。asiv具有如下分子式：

20、

21、根据本发明的另一个方面，提出了黄芪甲苷iv在制备提升囊胚的增殖能力、提升线粒体活性、改善线粒体分布和/或抑制脂滴形成产品中的应用。

22、在本发明的一些实施方式中，所述线粒体为胚胎4细胞期或4细胞期后的线粒体。如囊胚期等。

23、在本发明的一些实施方式中，所述产品为试剂、培养基或药物中的至少一种。

24、根据本发明的再一个方面，提出了一种促进囊胚形成和/或提高囊胚质量的方法，包括如下步骤：

25、向体外胚胎施加黄芪甲苷iv，培养体外胚胎直至囊胚期。

26、该方法可用于非治疗目的。具体地，该方法可以用于科学研究，例如体外细胞培养研究、体外胚胎培养研究以及植入前胚胎发育机制研究等。

27、在本发明的一些实施方式中，黄芪甲苷iv可在体外胚胎发育至囊胚阶段期间的任何时间点施加，包括卵母细胞经孤雌激活后或受精卵受精后，以及发育至2-细胞、4-细胞、8-细胞、16-细胞、桑葚胚、囊胚阶段的任何时间点。

28、在本发明的一些实施方式中，培养温度为36-40℃。具体地，可以在36℃、37℃、37.5℃、38℃、38.5℃、39℃或40℃下培养。

29、在本发明的一些实施方式中，黄芪甲苷iv可以施用一次，但更优选地施用多次。

30、在本发明的一些实施方式中，黄芪甲苷iv可以从每天施用一次至每周施用一次。具体地，黄芪甲苷iv可以每天施用一次、每两天施用一次、每三天施用一次、每四天施用一次、每五天施用一次、每六天施用一次、每周施用一次。

31、在本发明的一些实施方式中，所述黄芪甲苷iv的有效量为0.1-10μmol/l；在本发明的一些优选实施方式中为1μmol/l。

32、如本说明书和在权利要求中使用的术语“有效量”是指与未施用该化合物的情况相比，施用足以提供预期效果的化合物的量，该量按所施加的黄芪甲苷iv的质量与所施加液体环境(例如培养基)的体积计。

33、在本发明的一些实施方式中，所述体外胚胎包括哺乳动物体外胚胎。

34、在本发明的一些优选实施方式中，所述哺乳动物包括但不限于人类、家养动物、农场动物、动物园动物、运动动物、宠物动物(如狗、猫、豚鼠、兔子、大鼠、小鼠、马、骆驼、野牛、家牛、奶牛)、灵长类动物(如猿、猴子、猩猩和黑猩猩)、犬科动物(如狗和狼)、猫科动物(如猫、狮子和老虎)、马科动物(如马、驴和斑马)、食用动物(如奶牛、猪和羊)、有蹄类动物(如鹿和长颈鹿)，以及啮齿动物(如小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠)。

35、在本发明的一些实施方式中，所述哺乳动物包括猪。

36、在本发明的一些实施方式中，所述哺乳动物体外胚胎包括哺乳动物的体外孤雌激活胚胎或哺乳动物体外受精胚胎中的至少一种。

37、本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。