本发明属于药物和保健，涉及一种二氢杨梅素及其分离纯化的方法。
背景技术：
1、藤茶，一种葡萄科蛇葡萄植物显齿蛇葡萄的茎叶，学名为显齿蛇葡萄，是一种多年生的藤本植物，显齿蛇葡萄叶经国家卫生计生委食品安全标准与监测评估司认定，可做食品加工原料。藤茶含有人体所需的蛋白质、膳食纤维、胡萝卜素、维生素以及人体所需的铁、锌、钙、镁、钾、钠等元素，对预防肝火过盛、咽喉炎、高血压等有独特效果，还具有清热解毒、改善睡眠质量、抗衰老等作用。藤茶中主要有效成分是黄酮，是目前植物中发现黄酮含量较高的植物，黄酮的主要成分为二氢杨梅素(dmy)。
2、二氢杨梅素(dmy)，又名白蔹素，分子式c15h12o18，cas号27200-12-0，白色或类白色粉末，按溶解度为热水、热乙醇＞甲醇、乙醇＞醋酸乙酯＞氯仿、石油醚。二氢杨梅素是一种天然抗氧化剂，何桂霞等的研究表明在ph值≤4的弱酸性条件下二氢杨梅素是稳定的，但ph值的增加会加快它的氧化速度，在ph值≥9的碱性条件下会被氧化而变黄。在温度不超过100℃，时间不超过30min的条件下加热，二氢杨梅素的化学结构保持稳定，但随着温度的增加稳定性变差，甚至会发生不可逆的氧化反应。二氢杨梅素具有提高sod活性，清除自由基，控制血脂、血糖，降低血压和抑制血栓形成，以及消炎抗肿瘤等多重功效，对预防酒精肝、脂肪肝也有一定功效。因此二氢杨梅素在保健、抗衰老等领域备受关注，有良好的应用前景。
3、目前针对二氢杨梅素的提取和分离纯化的工艺相对步骤繁琐，耗时长，成本较高，例如cn109305954a公开了一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，所述方法包括：获取藤茶的水提液；使用大孔树脂对水提液进行吸附，随后依次使用水和质量百分比为30-50％的乙醇溶液洗涤大孔树脂，再用质量百分比为70-90％的乙醇溶液洗涤大孔树脂得到洗脱液；将洗脱液浓缩、结晶得到晶体，水洗后干燥。但是此方法获取藤茶粗提液的方法为水提，提取效率低，分离和纯化时间长。cn110526890a公开了一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法，所述方法包括：a.收集藤茶老叶、残次叶，乙醇超声粗提取总黄酮类化合物；b.按步骤a取得粗黄酮浸膏利用正相硅胶柱色谱分离，得到含有目标活性成分的组分；c.将含有目标活性成分的组分用半制备高效液相分离纯化得到活性化合物的单体；d.依据利用lc-hr-esims、1d和2dnmr波谱数据解析目标化合物的单体结构。但是所述方法使用多种有机溶剂，含有毒溶剂，操作复杂，且成本较高。
4、综上所述，目前从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法存在分离纯化时间长，过程涉及有毒有机试剂，需要高温条件等问题。如何提供一种高效，环保，分离纯化充分的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，已成为目前药物和保健技术领域亟待解决的问题之一。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种二氢杨梅素及其分离纯化的方法，解决了目前从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法存在的分离纯化时间长，过程涉及有毒有机试剂，需要高温条件等问题，能够实现分离纯化整个过程无强酸强碱类物质参与，并且具有提取时间短，反应条件温和，产物不易变性，产品纯度高。
2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
3、第一方面，本发明提供了一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，所述方法包括：
4、使用酶解液酶解藤茶原料获得藤茶混合液，超声水浴浸提后过滤收集滤液得到藤茶粗提液，超滤富集粗二氢杨梅素，最后纯化即得所述二氢杨梅素。
5、本发明分离纯化二氢杨梅素的方法不涉及任何有毒溶剂的使用，无高温反应，全过程无强酸强碱类物质参与，并且具有提取时间短，反应条件温和，产物不易变性，产品纯度高等优点，是一个绿色健康、低碳的化工制备分离过程，本发明具有环保和节能的双重意义，为二氢杨梅素的获得与处理提供了保障，具有良好的应用前景。
6、与传统水浸提取法相比，产率更大，产品纯度更高。
7、优选地，所述酶解液的ph为3-5。
8、上述3-5中的具体点值可以选择3、3.1、3.2、3.5、4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5等。
9、优选地，所述酶解液包括：纤维素酶和/或果胶酶。
10、优选地，所述藤茶原料与酶解液的质量体积比为1g:(2-6)ml。
11、上述2-6ml中的具体点值可以选择2ml、2.1ml、2.2ml、2.5ml、3ml、3.5ml、4ml、4.7ml、4.8ml、4.9ml、5ml、5.5ml、5.6ml、5.7ml、5.8ml、5.9ml、6ml等。
12、优选地，所述酶解液中纤维素酶的体积百分比为0.1％-0.8％。
13、上述0.1％-0.8％中的具体点值可以选择0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％等。
14、优选地，所述酶解液中果胶酶的体积百分比为0.1％-0.5％。
15、上述0.1％-0.5％中的具体点值可以选择0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.4％、0.45％、0.5％等。
16、优选地，所述超声水浴浸提使用的溶液包括：乙醇。
17、优选地，所述乙醇为体积百分比为50％-70％的乙醇水溶液。
18、上述50％-70％中的具体点值可以选择50％、51％、52％、53％、58％、60％、63％、65％、66％、67％、68％、69％、70％等。
19、优选地，所述超声水浴浸提的温度为30℃-50℃，时间为20-60min。
20、此温度区间有益于酶解反应，超声辅助增加提取效率。
21、上述30℃-50℃中的具体点值可以选择30℃、31℃、33℃、35℃、38℃、40℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃等。
22、优选地，所述超滤富集粗二氢杨梅素的方法包括：
23、超滤膜过滤藤茶粗提液，将滤液过大孔树脂柱，去离子水冲洗，再用乙醇洗脱，收集洗脱液。
24、超滤膜截留大分子杂质，得到无菌的产品粗液。
25、优选地，所述超滤膜的孔径为800道尔顿-2000道尔顿。
26、该孔径范围能有效截留生物大分子杂质，达到除菌效果，大于此孔径无法有效截留所有大分子杂质，小于此孔径则影响二氢杨梅素产物的收集。
27、上述800道尔顿-2000道尔顿中的具体点值可以选择800道尔顿、801道尔顿、802道尔顿、803道尔顿、900道尔顿、1000道尔顿、1500道尔顿、1600道尔顿、1700道尔顿、1800道尔顿、1900道尔顿、1996道尔顿、1997道尔顿、1998道尔顿、1999道尔顿、2000道尔顿。
28、优选地，所述滤液过大孔树脂柱的上样吸附流速为0.5bv/hr-2bv/hr。
29、上述0.5bv/hr-2bv/hr中的具体点值可以选择0.5bv/hr、0.6bv/hr、0.7bv/hr、0.8bv/hr、0.9bv/hr、1bv/hr、1.5bv/hr、1.6bv/hr、1.7bv/hr、1.8bv/hr、1.9bv/hr、2bv/hr等。
30、优选地，所述去离子水用量为所述大孔树脂柱体积的1-4倍。
31、上述1-4中的具体点值可以选择1、1.1、1.2、1.3、1.4、2.0、3.0、3.2、3.4、3.6、3.8、3.9、4.0等。
32、优选地，所述乙醇洗脱中的乙醇为体积百分比为30％-90％的乙醇水溶液。
33、上述30％-90％中的具体点值可以选择30％、31％、32％、33％、38％、40％、50％、60％、70％、80％、88％、89％、90％等。
34、优选地，所述乙醇洗脱的流速为2.5bv/hr-5bv/hr，时间为1h-4h。
35、上述2.5bv/hr-5bv/hr中的具体点值可以选择2.5bv/hr、2.6bv/hr、2.7bv/hr、2.8bv/hr、2.9bv/hr、3bv/hr、4bv/hr、4.5bv/hr、4.6bv/hr、4.7bv/hr、4.8bv/hr、4.9bv/hr、5bv/hr等。
36、上述1h-4h中的具体点值可以选择1h、1.1h、1.2h、1.3h、1.4h、2.0h、3.0h、3.2h、3.4h、3.6h、3.8h、3.9h、4.0h等。
37、优选地，所述纯化的方法包括：
38、减压浓缩洗脱液，冷却，收集二氢杨梅素粗晶体，加热溶解粗晶体，再冷却，过滤，收集二氢杨梅素晶体，得到高纯度二氢杨梅素产品。
39、优选地，所述减压浓缩的温度为50℃-60℃，所述加热的温度为50℃-70℃。
40、上述50-60℃中的具体点值可以选择50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃等。
41、上述50-70℃中的具体点值可以选择50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、60℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃等。
42、作为优选的技术方案，所述从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法包括以下步骤：
43、(1)使用(2-6)ml的酶解液酶解1g藤茶原料获得藤茶混合液，超声水浴浸提后过滤收集滤液得到藤茶粗提液，所述酶解液中纤维素酶的体积百分比为0.1％-0.8％，所述酶解液中果胶酶的体积百分比为0.1％-0.5％；
44、(2)使用孔径为800道尔顿-2000道尔顿超滤膜过滤藤茶粗提液，将滤液过大孔树脂柱，所述滤液过大孔树脂柱的上样吸附流速为0.5bv/hr-2bv/hr，使用大孔树脂柱体积的1-4倍的去离子水冲洗，再用体积百分比为30％-90％乙醇洗脱，所述乙醇洗脱的流速为2.5bv/hr-5bv/hr，时间为1h-4h，收集洗脱液；
45、(3)减压浓缩洗脱液，冷却，收集二氢杨梅素粗晶体，加热溶解粗晶体，再冷却，过滤，收集二氢杨梅素晶体，即得所述二氢杨梅素。
46、第二方面本发明提供了一种二氢杨梅素，所述二氢杨梅素由第一方面所述的方法分离纯化得到。
47、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
48、本发明分离纯化二氢杨梅素的方法不涉及任何有毒溶剂的使用，无高温反应，全过程无强酸强碱类物质参与，并且具有提取时间短，反应条件温和，产物不易变性，产品纯度高等优点，是一个绿色健康、低碳的化工制备分离过程，本发明具有环保和节能的双重意义，为二氢杨梅素的获得与处理提供了保障，具有良好的应用前景。