趋化因子CXCL10在建立皮肤衰老细胞模型中的应用的制作方法

本发明属于细胞生物学，特别涉及趋化因子cxcl10在建立皮肤衰老细胞模型中的应用。

背景技术：

1、早在2000年，意大利学者在《nature medicine》发表的文章中就提出了“炎性衰老”的概念。此后多项科学研究证实，衰老是一种全身性炎症过程。也就是说，细胞在衰老的过程中会分泌大量炎症因子，产生慢性炎症反应，慢性炎症又会导致氧化损伤、dna损伤、端粒变短，从而加速衰老。炎症衰老是近年来抗衰领域的热点研究方向，在护肤品行业也越来越受到关注，其原因有一部分是因为现代人的生活环境(紫外线、空气污染等)以及生活方式(熬夜、压力、电子产品使用等)而导致的皮肤敏感情况越发严重，从而加速衰老。皮肤敏感是涉及到神经、血管、免疫炎症等复杂的皮肤高反应状态，会激发皮肤中的细胞炎症产生因子和氧自由基，进一步加速衰老；而衰老的细胞又会分泌出sasps衰老相关分泌表型，影响周边细胞的状态，形成衰老的恶性循环。

2、在对皮肤衰老的研究中，往往会建立皮肤衰老细胞模型，模拟人体皮肤衰老过程，观察皮肤中与衰老相关的生化指标、组织学变化等。建立快速、实用、可靠、可行的皮肤衰老细胞模型，对于皮肤衰老的研究十分重要。

3、cxcl10，c-x-c基序趋化因子10，又名γ干扰素诱导蛋白10(ip-10)，是一个分子量为8.7kda的蛋白，属于cxc趋化因子家族。多种细胞类型包括单核细胞、内皮细胞和成纤维细胞在响应ifn-γ时可分泌cxcl10。cxcl10具有多种作用功能，如趋化单核/巨噬细胞、nk细胞和树突状细胞，促进t细胞粘附到内皮细胞，抑制骨髓集落形成及抑制血管生成等。但是，不曾有文献报道将cxcl10用于对炎症性衰老的研究。

4、本申请说明书中的缩略语、英文和关键术语定义如下：

5、1、sasps：衰老相关分泌表型；

6、2、mmps：基质金属蛋白酶；

7、3、sa-β-gal：β-半乳糖苷酶活性染色方法；

8、4、lamin b1：核纤层蛋白b1；

9、5、cxcl10：c-x-c基序趋化因子10。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供趋化因子cxcl10在建立皮肤衰老细胞模型中的应用，其中，所述皮肤衰老细胞模型为皮肤炎症性衰老细胞模型。

2、趋化因子是一类具有定向细胞趋化作用的炎症因子，用于招募免疫细胞进入病理位置，清除有害物质，行使机体保护功能。然而，过度炎症细胞的募集会导致组织处于长期慢性炎症状态，反而起到负面作用。本申请的发明人认为，在皮肤衰老过程中，皮肤在各种内外因素的持续刺激下，多种细胞均会持续产生趋化因子招募炎症细胞，从而导致皮肤处于慢性炎症状态。由此推断趋化因子可能长期存在皮肤中，并在皮肤衰老过程中起到了中间桥梁作用。基于此，发明人通过实验验证了趋化因子对于皮肤炎症的显著作用，并提出将趋化因子cxcl10用于建立皮肤衰老细胞模型，由此开发出基于特定趋化因子的体外炎症衰老的细胞模型平台，用于进一步的炎症衰老研究，以及抗炎症衰老新化合物的筛选。

3、本发明的第二方面提供了一种皮肤衰老细胞模型的建立方法，该方法包括用趋化因子cxcl10诱导人皮肤成纤维细胞衰老。

4、可选地，本发明提供的皮肤衰老细胞模型的建立方法中，所述趋化因子cxcl10的浓度为20～800ng/ml。

5、可选地，本发明提供的皮肤衰老细胞模型的建立方法中，所述趋化因子cxcl10的浓度为400～800ng/ml。

6、具体地，本发明提供的皮肤衰老细胞模型的建立方法包括如下步骤：将人皮肤成纤维细胞置于37℃、5％ co2培养箱中培养后，以pbs清洗，加入胰酶消化；消化完成后弃去胰酶，在完全培养基中培养；取对数生长期细胞，加入含趋化因子cxcl10的培养基培养，所述趋化因子cxcl10诱导所述人皮肤成纤维细胞发生炎症性衰老。

7、可选地，本发明所述的人皮肤成纤维细胞发生炎症性衰老包括：细胞形态发生改变、β-半乳糖苷酶活性增强、衰老相关基因p21和p16的表达增加、基质金属蛋白酶mmps的表达增加。

8、本发明的第三方面提供一种皮肤衰老细胞模型，该模型采用本发明第二方面所述的方法建立。

9、本发明的第四方面提供本发明第三方面的皮肤衰老细胞模型在筛选抗皮肤炎症性衰老活性物中的应用。

技术特征：

1.趋化因子cxcl10在建立皮肤衰老细胞模型中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述皮肤衰老细胞模型为皮肤炎症性衰老细胞模型。

3.一种皮肤衰老细胞模型的建立方法，其特征在于，包括：用趋化因子cxcl10诱导人皮肤成纤维细胞衰老。

4.根据权利要求3所述的皮肤衰老细胞模型的建立方法，其特征在于，所述趋化因子cxcl10的浓度为20～800ng/ml。

5.根据权利要求4所述的皮肤衰老细胞模型的建立方法，其特征在于，所述趋化因子cxcl10的浓度为400～800ng/ml。

6.根据权利要求3所述的皮肤衰老细胞模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：将人皮肤成纤维细胞置于37℃、5％co2培养箱中培养后，以pbs清洗，加入胰酶消化；消化完成后弃去胰酶，在完全培养基中培养；取对数生长期细胞，加入含趋化因子cxcl10的培养基培养，所述趋化因子cxcl10诱导所述人皮肤成纤维细胞发生炎症性衰老。

7.根据权利要求6所述的皮肤衰老细胞模型的建立方法，其特征在于，所述人皮肤成纤维细胞发生炎症性衰老包括：细胞形态发生改变、细胞周期阻滞、β-半乳糖苷酶活性增强、衰老相关基因p21和p16的表达增加、基质金属蛋白酶mmps的表达增加。

8.一种皮肤衰老细胞模型，其特征在于，采用权利要求3至7中任一项所述的方法建立。

9.权利要求8所述的皮肤衰老细胞模型在筛选抗皮肤炎症性衰老活性物中的应用。

10.权利要求8所述的皮肤衰老细胞模型在制备抗皮肤炎症性衰老药物中的应用。

技术总结
本发明涉及化妆品技术领域，公开了趋化因子CXCL10在建立皮肤衰老细胞模型中的应用，并提供了一种皮肤衰老细胞模型的建立方法。本发明通过实验研究证实了趋化因子可诱导皮肤炎症性衰老，并提出将趋化因子CXCL10用于建立皮肤衰老细胞模型，由此开发出基于趋化因子CXCL10的皮肤炎症性衰老体外细胞模型平台，用于进一步的皮肤炎症性衰老研究以及抗皮肤炎症性衰老化合物的筛选。

技术研发人员：胡晓芸,叶睿,胡璠,杜乐,吴叶林,杨威,姜兴武
受保护的技术使用者：懿奈（上海）生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22