一种抗人激肽释放酶1单克隆抗体及其应用的制作方法

本发明涉及一种单克隆抗体，具体涉及一种抗人激肽释放酶1单克隆抗体及其应用，属于生物医学检测。

背景技术：

1、心脑血管疾病是严重危害人类健康的主要慢性非传染性疾病。其中冠心病和脑卒中是世界上最常见的死亡原因。在我国随着人口的老龄化，以冠心病、脑卒中为代表的心脑血管疾病其发病率、致死率及致残率呈逐年上升的趋势。尽管已经发现了许多心脑血管疾病的危险因素，如高血压、糖尿病、血脂代谢的异常、体重指数等。然而这些危险因素只能解释部分病人，因此，寻找新的心脑血管疾病危险因素将具有重要的临床意义。

2、基础研究证明，激肽---缓激肽系统与肾素血管紧张素系统相互作用并在心脑血管疾病的发生发展中具有重要的作用。激肽---缓激肽系统主要是激肽释放酶在发挥作用，激肽释放酶是一组丝氨酸蛋白酶，存在于不同组织和生物液体中。最初从胰腺中分离。主要分为血浆激肽释放酶和组织激肽释放酶两大类。

3、人和动物的组织激肽释放酶中只有一种酶能有效地使激肽原释放生物活性物激肽。在人体内该酶称为胰肾激肽释放酶，新的统一命名为klk1。能水解低分子量激肽原使之生成激肽，而激肽与血管平滑肌细胞膜上的舒缓激肽受体结合后，可使血管平滑肌增多，进而通过第二信使途径舒张血管，达到降压的目的。

4、研究证明降低的血浆人klk1含量具有较高的脑卒中发生率和再发率。升高的血浆人klk1含量与冠心病发生呈正相关关系，而与冠心病的严重程度呈负相关关系。因此，人klk1可能具有重要的心脑血管保护作用，其在血浆中含量的可能预测脑卒中及冠心病的发生及再发。

5、组织激肽释放酶是一个大的多基因家族，由15个成员组成，各成员间基因序列、蛋白水平、三级结构极为相似，具有较高的同源性。针对klk1来说，与其具有较高同源性的蛋白为klk2，同源性大概65.6％，另外，天然klk1存在多个糖基化位点，而重组表达klk1在糖基化位点等其他构象方面可能与天然蛋白存在较大的差异，在动物免疫和在特异性抗体筛选时采用重组人klk1就会出现筛选的特异性抗体不能有效识别天然人klk1的问题。

6、目前，市面上没有针对人klk1的高特异性、高灵敏度的检测试剂盒，所以迫切需要一种能有效、快速检测人klk1的产品。

技术实现思路

1、发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种能有效识别天然人klk1的抗人激肽释放酶1单克隆抗体。

2、本发明还要解决的技术问题是提供了利用天然人klk1进行动物免疫和特异性抗体筛选得到的抗人激肽释放酶1单克隆抗体。

3、本发明还要解决的技术问题是提供了抗人激肽释放酶1单克隆抗体在制备检测抗人激肽释放酶1含量的试剂盒中的应用。

4、本发明最后要解决的技术问题是提供了高特异性、高灵敏度的酶联免疫试剂盒。

5、技术方案：为了实现上述目的，本发明提供了一种抗人激肽释放酶1单克隆抗体，所述抗人激肽释放酶1单克隆抗体包括单克隆抗体44h9c11或单克隆抗体17b6-1；

6、所述单克隆抗体44h9c11包括重链cdr1、重链cdr2、重链cdr3，轻链cdr1、轻链cdr2和轻链cdr3；所述单克隆抗体44h9c11的重链cdr1的氨基酸序列如seq id no：1所示，所述单克隆抗体44h9c11的重链cdr2的氨基酸序列如seq id no：2所示，所述单克隆抗体44h9c11的重链cdr3的氨基酸序列如seq id no：3所示；所述单克隆抗体44h9c11的轻链cdr1的氨基酸序列如seq id no：4所示，所述单克隆抗体44h9c11的轻链cdr2的氨基酸序列如seq id no：5所示，所述单克隆抗体44h9c11的轻链cdr3的氨基酸序列如seq id no：6所示；

7、所述单克隆抗体17b6-1包括重链cdr1、重链cdr2、重链cdr3，轻链cdr1、轻链cdr2和轻链cdr3；所述单克隆抗体17b6-1的重链cdr1的氨基酸序列如seq id no：9所示，所述单克隆抗体17b6-1的重链cdr2的氨基酸序列如seq id no：10所示，所述单克隆抗体17b6-1的重链cdr3的氨基酸序列如seq id no：11所示，所述单克隆抗体17b6-1的轻链cdr1的氨基酸序列如seq id no：12所示，所述单克隆抗体17b6-1的轻链cdr2的氨基酸序列如seq id no：13所示，所述单克隆抗体17b6-1的轻链cdr3的氨基酸序列如seq id no：14所示。

8、其中，所述单克隆抗体44h9c11的重链可变区的氨基酸序列如seq id no：7所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：8所示。

9、其中，所述单克隆抗体17b6-1的重链可变区的氨基酸序列如seq id no：15所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：16所示。

10、本
技术实现要素：
还包括一种抗人激肽释放酶1单克隆抗体对，其包括所述的单克隆抗体44h9c11和单克隆抗体17b6-1。

11、本发明内容还包括所述的抗人激肽释放酶1单克隆抗体、所述的抗人激肽释放酶1单克隆抗体对在制备检测抗人激肽释放酶1含量的试剂盒中的应用。

12、其中，所述试剂盒包括胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒。

13、本发明内容还包括一种酶联免疫试剂盒，所述酶联免疫试剂盒包括包被所述单克隆抗体44h9c11的酶标板、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素和生物素标记的所述单克隆抗体17b6-1。

14、其中，所述酶联免疫试剂盒还包括标准品、质控品、样品稀释液、洗涤液、显色液及终止液；优选地，所述标准品为天然人klk1。

15、有益效果：与现有技术相比，本发明具备以下优点：

16、1、本发明提供的抗人激肽释放酶1单克隆抗体，其利用天然人klk1进行动物免疫和特异性抗体筛选得到，能有效识别天然klk1。

17、2、本发明提供的抗人激肽释放酶1单克隆抗体，利用klk2进行反筛，从而具有高特异性，能特异性识别天然klk1而不识别klk2。

18、3、本发明能特异性识别天然klk1而不识别klk2的多个抗体进行配对筛选，获得灵敏度高的抗体组合；对上述抗体对进行检测体系的调试优化工作，获得灵敏度等检测性能可满足动物血浆中和人血浆中人klk1浓度检测的酶联免疫定量检测试剂盒。

19、4、本发明提供的抗人激肽释放酶1单克隆抗体，应用于酶联免疫定量检测试剂盒，既可以检测重组小鼠klk1和人尿液中提取纯化klk1，检测范围广。

技术特征：

1.一种抗人激肽释放酶1单克隆抗体，其特征在于，所述抗人激肽释放酶1单克隆抗体包括单克隆抗体44h9c11或单克隆抗体17b6-1；

2.根据权利要求1所述的一种抗人激肽释放酶1单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体44h9c11的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示。

3.根据权利要求1所述的一种抗人激肽释放酶1单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体17b6-1的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:15所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:16所示。

4.一种抗人激肽释放酶1单克隆抗体对，其包括权利要求1~3任一项所述的单克隆抗体44h9c11和单克隆抗体17b6-1。

5.权利要求1-4任一项所述的抗人激肽释放酶1单克隆抗体、权利要求4所述的抗人激肽释放酶1单克隆抗体对在制备检测抗人激肽释放酶1含量的试剂盒中的应用。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述试剂盒包括胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒。

7.一种酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶联免疫试剂盒包括包被权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体44h9c11的酶标板、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素和生物素标记的权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体17b6-1。

8.根据权利要求7所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶联免疫试剂盒还包括标准品，所述标准品为天然人klk1。

技术总结
本发明提供一种抗人激肽释放酶1单克隆抗体，包括抗人激肽释放酶1单克隆抗体44H9C11或抗人激肽释放酶1单克隆抗体17B6‑1，以及上述抗体对在制备检测抗人激肽释放酶1含量的试剂盒中的应用，本发明对特异性识别天然KLK1而不识别KLK2多个抗体进行配对筛选，获得灵敏度高的抗体组合；对上述抗体对进行检测体系的调试优化工作，获得灵敏度等检测性能可满足人KLK1浓度检测的酶联免疫定量检测试剂盒。

技术研发人员：侯晓彦,于九洋,孙铁,祁洪,贾小刚,许冬志
受保护的技术使用者：江苏艾迪药业股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15