一种促进抗生素扰动后肠道微生态恢复的微生物组合

本发明涉及一种促进抗生素扰动后肠道微生态恢复的微生物组合，属于微生物以及医药。

背景技术：

1、人体肠道中栖息数以亿计的微生物，组成了有机的微生态系统。成年个体肠道微生物的数量大约有1014亿个，约为人体自身细胞数的10倍，总重占人体重量的1-3％。肠道微生物不仅影响肠道本身，还对人体的代谢、营养和免疫等诸多生理活动有着至关重要的作用。大量微生物栖息在人类肠道中，它们与宿主的共生互惠关系(宿主-细菌和细菌-细菌的相互作用)构成了一个复杂的动态生态系统。生态系统执行对宿主至关重要的功能，如能量代谢、免疫稳态和外源代谢，越来越多的研究强调了共生微生物群在人类健康中发挥的关键作用。这些研究主要关注于发现健康成年人与患有2型糖尿病、肥胖、炎症性肠病、大肠癌等疾病的肠道共生菌群差异。

2、值得注意的是，研究人员也开始探索抗生素暴露等外部干扰的影响。研究表明，抗生素干扰降低了微生物多样性，扰乱了正常菌群的群落结构和功能，并可能对肠道菌群组成和宿主产生长期不良后果，如抗生素相关性腹泻、抗生素耐药性、早产儿多种微生物组发育迟缓、成人代谢性疾病等，宿主还更容易感染病原体如艰难梭菌。当前研究大多集中在抗生素腹泻(aad)和艰难梭菌感染引起的肠道菌群差异上，且治疗方法主要是停用或更换抗生素。此外，国内外针对广谱短期抗生素扰乱正常肠道菌群以及提出有效干预措施的研究较少，此时肠道微生物的恢复可能有助于预防腹泻和感染等不良后果，还不会导致耐药性菌株的出现以及其他不良反应。

3、鉴于传统治疗方法存在多种问题，我们倾向于探索短期广谱抗生素治疗下恢复者和未恢复者肠道共生微生物群的差异，虽然现有研究技术中有公开单形拟杆菌(bacteroides uniformisi)可以缓解抗生素腹泻(aad)，但是单形拟杆针对短期广谱抗生素扰动的作用还未可知。另一方面，虽然嗜黏蛋白阿克曼菌(akkermansia muciniphila)是下一代益生菌，尚未被批准进入食品药品领域，但其对肠道屏障、粘液层的作用广为人知，探寻嗜黏蛋白阿克曼菌和单形拟杆菌协同互作是否可以作为促进抗生素扰动后肠道微生态恢复的有效组合具有重要意义。

4、综上，确定一组促进肠道微生态恢复的微生物组合或许不仅对广谱抗生素扰动后的肠道菌群具有很好的促进恢复作用，还可以减少潜在隐患比如抗生素腹泻和感染等。

技术实现思路

1、本发明提供单形拟杆菌(bacteroides uniformisi)ccfm1231或含有单形拟杆菌(bacteroides uniformisi)ccfm1231的微生物菌剂，所述单形拟杆菌ccfm1231分类学命名为bacteroides uniformis，于2023年6月7日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为gdmcc no:63532。

2、本发明还提供一种促进肠道微生态恢复的组合物，由单形拟杆菌(bacteroidesuniformisi)ccfm1231和嗜黏蛋白阿克曼菌(akkermansia muciniphila)atcc baa-835的菌液或冻干制剂组成。

3、在本发明的一种实施方式中，所述单形拟杆菌(bacteroides uniformisi)ccfm1231，分类学命名为bacteroides uniformis，于2023年6月7日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为gdmcc no:63532。

4、在本发明的一种实施方式中，所述单形拟杆菌(bacteroides uniformisi)ccfm1231是从人群粪便中分离得到的，该菌株经测序分析，将测序得到的16s rdna序列序列在genbank中进行核酸序列比对，结果显示与单形拟杆菌的核酸序列相似度高达99.45％，将其命名为单形拟杆菌(bacteroides uniformisi)ccfm1231。

5、在本发明的一种实施方式中，所述单形拟杆菌ccfm1231的生长特性：该菌株为严格厌氧菌，对氧气敏感，接入改良bhi液体培养基中，于37℃倒置培养36h最佳。

6、在本发明的一种实施方式中，所述单形拟杆菌ccfm1231的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基改良bhi，以水为溶剂，包括以下浓度的组分：bhi 38.5g/l、氯化血红素2ml/l(5mg/ml)、维生素k11 ml/l(10mg/ml)、半胱氨酸1g/l，所述发酵培养基的ph值为7.4±0.2。

7、在本发明的一种实施方式中，所述单形拟杆菌(bacteroides uniformisi)ccfm1231的菌落特征：在改良bhi液体培养基上的菌呈落乳白色，圆形凸起，边缘整齐光滑。

8、在本发明的一种实施方式中，嗜黏蛋白阿克曼菌(akkermansia muciniphila)atcc baa-835购自atcc。

9、在本发明的一种实施方式中，嗜黏蛋白阿克曼菌(akkermansia muciniphila)atcc baa-835为严格厌氧菌，对氧气敏感，接入bhi培养基中，于37℃倒置培养36h最佳。

10、在本发明的一种实施方式中，所述微生物组合中，单形拟杆菌(bacteroidesuniformisi)ccfm1231和嗜黏蛋白阿克曼菌(akkermansia muciniphila)baa-835的活菌数量均不低于5×108cfu/ml或5×108cfu/g。

11、本发明还提供了制备所述组合物的方法，其特征在于，将单形拟杆菌ccfm1231和嗜黏蛋白阿克曼菌atcc baa-835分别于培养基中发酵，然后将所得菌液或冻干制剂混合。

12、在本发明的一种实施方式中，所述培养基包括：bhi 38～39g/l、5mg/ml的氯化血红素1.8～2.2ml/l、10mg/ml的维生素k10.8～1.2ml/l、半胱氨酸0.3～1g/l，ph 7.2～7.6。

13、在本发明的一种实施方式中，于37℃，至少发酵36h。

14、所述组合物中单形拟杆菌ccfm1231和嗜黏蛋白阿克曼菌atcc baa-835的活菌数均不低于5×108cfu/ml或5×108cfu/g。

15、本发明还提供了应用所述组合物制备得到的产品，所述产品包括食品、药品或保健品。

16、本发明还提供了所述组合物在缓解抗生素扰动后肠道微生物菌群恢复中的应用。

17、在本发明的一种实施方式中，所述抗生素包括氨苄西林钠盐。

18、有益效果

19、本发明提供了一株单形拟杆菌(bacteroides uniformisi)ccfm1231，所述单形拟杆菌ccfm1231与嗜黏蛋白阿克曼菌(akkermansia muciniphila)baa-835协同喂养能够显著地促进肠道微生态在抗生素治疗后恢复，具体体现在，与模型组相比：

20、(1)抗生素扰动后小鼠肠道微生物的α多样性恢复更快，其中双歧杆菌属、肠杆菌属和瘤胃梭菌属_5丰度的恢复速度显著快于模型组；

21、(2)抗生素扰动后小鼠肠道微生物的健康水平始终更高；

22、(3)抗生素扰动后小鼠肠道微生物结构(β多样性)恢复至初始状态，且与正常对照组相似；

23、(4)抗生素扰动后小鼠肠道微生物共现网络的节点数，边数以及平均度始终更高；

24、(5)抗生素扰动后小鼠肠道微生物共现网络的hub(中心)节点更多；

25、(6)抗生素扰动后小鼠肠道微生物共现网络的脆弱性更小，即稳健性更大。

26、因此，单形拟杆菌(bacteroides uniformisi)ccfm1231与嗜黏蛋白阿克曼菌(akkermansia muciniphila)baa-835的微生物组合在促进肠道微生物群在抗生素治疗时/后的恢复中具有重要意义。

27、生物材料保藏

28、单形拟杆菌(bacteroides uniformis)ccfm1231，分类学命名为bacteroidesuniformis，于2023年6月7日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为gdmcc no:63532。