抑制胆固醇代谢的四价铂配合物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及医药，尤其涉及一种抑制胆固醇代谢的四价铂配合物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、癌症是造成全球人口死亡的第二位主要原因，其中耐药性是癌症治疗的主要障碍之一(fojo a.cancer 1987)。以顺铂(cddp)为代表的抗癌药是各种恶性肿瘤最常用的化疗药物(huang,x.；huang,r.；gou,s.bioconjugate chem.2016)。然而，获得性和固有耐药性对铂类抗癌治疗构成了严峻挑战。cddp的耐药性是由多种原因引起的，如细胞吸收效率低、dna损伤修复、与谷胱甘肽(gsh)及硫氧还蛋白(trxr)等含硫分子相互作用导致失活(wang,x.y.et al.j.med.chem.2019)。为了克服铂类药物的耐药性，研究人员开发了各种四价铂配合物作为cddp或其类似物的前体药物。这类配合物在血液或正常组织中是惰性的，但在肿瘤细胞中被还原为二价铂物种和轴向配体后具有活性。由于其化学惰性，脱靶反应较少，因此产生的副作用比cddp小(raveendran,r.et al.chem.sci.2016)。然而，大多数四价铂配合物的抗肿瘤活性来源于dna损伤，因此，有必要开发具有独特作用机制的新型四价铂配合物，以消除对传统铂类药物的耐药性。

2、胆固醇作为细胞膜的重要组成成分，在促进肿瘤发生及抑制肿瘤免疫反应中发挥重要作用(huang,c.f.；freter,c.int.j.mol.sci.2015)。在胆固醇代谢中，机体主要通过内源胆固醇合成和外源胆固醇摄取维持胆固醇稳态平衡。肿瘤细胞中胆固醇合成水平上调、摄取增加、大量代谢产物异常积累，导致细胞增殖、存活、侵袭、转移以及对肿瘤微环境的适应能力增强，从而使肿瘤细胞产生耐药性，逃避凋亡，持续分裂和增殖(gu,l.febsjournal 2019)。肿瘤细胞胆固醇代谢异常不仅导致肿瘤细胞耐药，其衍生物还可以调节肿瘤免疫识别或免疫逃逸，在免疫监视中发挥关键作用(huang,c.f.；freter,c.int.j.mol.sci.2015)。胆固醇可能通过调控t细胞的免疫应答及抗肿瘤免疫反应在免疫调控中发挥作用，也可能通过诱导肿瘤细胞本身免疫抑制性发挥作用。研究发现载脂蛋白e(apolipoprotein e,apoe)能结合肿瘤细胞表面的ldlr，招募mdscs抑制cd8+t细胞对肿瘤的浸润。胆固醇代谢可以影响肿瘤相关巨噬细胞(tams)招募和活化，对肿瘤的恶性进展具有重要的调控作用。此外，胆固醇及其代谢产物对树突细胞(dcs)的分化和功能具有重要调节作用。但是，单纯的胆固醇抑制剂一般都是降脂药物，对肿瘤细胞的细胞毒性或直接杀伤作用较弱，不能作为有效的抗肿瘤制剂。目前还没有人尝试将胆固醇抑制剂与铂类药物偶联，作为单分子化学免疫调节剂用于治疗肿瘤。因此，将胆固醇抑制剂引入铂药分子，通过抑制肿瘤细胞内胆固醇代谢和损伤dna诱导细胞死亡，并调节肿瘤微环境和抗肿瘤免疫反应，通过化学治疗和免疫治疗协同作用治疗肿瘤是克服传统铂类药物耐药性的全新途径。

技术实现思路

1、针对现有铂类抗肿瘤药物的不足，本发明提供了一类抑制胆固醇代谢的四价铂配合物及其制备方法和应用。本发明通过将胆固醇调节剂引入铂类药物结构中，通过调控胆固醇代谢破坏肿瘤细胞生长繁殖所需的物质和能量基础，实现抗肿瘤目的，并在调控胆固醇代谢过程中，对肿瘤微环境中的免疫细胞产生影响，激活抗肿瘤免疫反应，达到协同抗肿瘤的目的，同时克服了传统铂类药物的耐药性和系统毒性。

2、本发明的技术方案如下：

3、本发明首先保护一种抑制胆固醇代谢的四价铂配合物，所述四价铂配合物是将胆固醇代谢抑制剂与铂类衍生物连接配位得到；所述铂类衍生物包括顺铂衍生物或奥沙利铂衍生物；

4、所述四价铂配合物包括含一个胆固醇代谢抑制基团的单r铂配合物或含两个胆固醇代谢抑制基团的双r铂配合物；

5、所述单r铂配合物的结构通式为：

6、

7、所述双r铂配合物的结构通式为：

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9、其中，r为胆固醇代谢抑制基团。

10、进一步地，所述胆固醇代谢抑制基团选自具有如下结构式的基团中的一种：

11、

12、进一步地，所述四价铂配合物包括如下结构式中的一种：

13、

14、

15、

16、本发明还保护所述单r铂配合物的合成方法，其合成方法包括如下步骤：

17、s1-1、将铂类化合物与双氧水混合反应，得到铂类衍生物(即，铂类化合物的羟基化产物)；

18、s1-2、将胆固醇代谢抑制剂、n-羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳二亚胺及三乙胺加入乙腈中，室温搅拌反应后，旋转蒸发除去乙腈，将旋蒸产物在二氯甲烷中溶解，冲洗后，收集有机层，加入无水na2so4除水得到中间化合物；将中间化合物溶于无水二甲亚砜得到中间化合物溶液；

19、s1-3、将步骤s1-1得到的铂类衍生物滴加到步骤s1-2得到的中间化合物溶液中，搅拌反应后，过滤，收集滤液，并加入过量乙醚去除二甲基亚砜，用甲醇提取后洗涤，干燥得到抑制胆固醇代谢的单r铂配合物。

20、进一步地，步骤s1-1中，所述铂类化合物为顺铂或奥沙利铂；所述铂类化合物与双氧水的质量体积比为400g:10-30ml；所述混合反应的温度为30-70℃，时间为2-8h；

21、步骤s1-2中，所述胆固醇代谢抑制剂、n-羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳二亚胺、三乙胺、乙腈的摩尔体积比为0.3mmol:0.3mmol:0.3mmol:0.3mmol:15-45ml；所述搅拌的速度为160-450r/min，时间为12-48h；所述中间化合物与无水二甲基亚砜的质量体积比为100mg:3-5ml；

22、步骤s1-3中，所述搅拌反应的温度为30-70℃，时间为12-72h，搅拌的速度为180-450r/min；所述铂类衍生物与中间化合物溶液的质量体积比为100mg:3-8ml；所述干燥为真空干燥。

23、本发明还保护所述双r铂配合物的合成方法，所述合成方法包括如下步骤：

24、s2-1、将铂类化合物与双氧水混合反应，得到铂类衍生物；

25、s2-2、将胆固醇代谢抑制剂与s2-1中所得的铂类衍生物、o-苯并三氮唑-n,n,n′,n′-四甲基脲四氟硼酸、三乙胺混合在n,n-二甲基甲酰胺溶液中搅拌反应后，过滤，收集滤液，真空旋蒸去除n,n-二甲基甲酰胺后，加入乙醇和水，离心，收集沉淀，得到所需产物，真空干燥，即得抑制胆固醇代谢的双r铂配合物。

26、进一步地，步骤s2-1中，所述铂类化合物为顺铂或奥沙利铂；所述铂类化合物与双氧水的质量体积比为400g:10-30ml；所述混合反应的温度为30-70℃，时间为2-8h；

27、步骤s2-2中，所述胆固醇代谢抑制剂、铂类衍生物、o-苯并三氮唑-n,n,n′,n′-四甲基脲四氟硼酸、三乙胺、n,n-二甲基甲酰胺溶液的摩尔量体积比为0.3mmol：0.66mmol：0.66mmol：0.66mmol：6-25ml；所述搅拌反应的温度为室温，时间为24-96h，搅拌的速度为200-600r/min。

28、本发明还保护一种所述四价铂配合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

29、进一步地，所述肿瘤包括卵巢癌、结直肠癌、黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、头部和颈部鳞状细胞癌、膀胱癌、宫颈癌、胆囊癌、骨瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肺癌耐药细胞、卵巢癌耐药细胞株。

30、本发明还保护一种抑制胆固醇代谢的四价铂配合物的应用，所述抑制胆固醇代谢的四价铂配合物在制备肿瘤化学免疫治疗的金属小分子化学免疫治疗剂中的应用。

31、本发明同时保护一种用于肿瘤化学免疫治疗的金属小分子化学免疫治疗剂，所述金属小分子化学免疫治疗剂包括所述的四价铂配合物，所述铂配合物包括单r铂配合物或双r铂配合物。

32、本发明所述四价铂配合物是将胆固醇代谢抑制剂r与铂类衍生物顺铂或奥沙利铂衍生物连接配位得。

33、本发明所述单r铂配合物或双r铂配合物可以有效调控肿瘤细胞内的胆固醇代谢，克服肿瘤细胞的耐药性。

34、本发明用于肿瘤化学免疫治疗的金属小分子化学免疫治疗剂的有效成分为单r铂配合物或双r铂配合物，所述配合物对免疫细胞具有以下功效：(1)能够抑制巨噬细胞中m2表型和促进m1表型的表达；(2)能够促进dc细胞的成熟；(3)能够促进肿瘤内t淋巴细胞浸润；(4)能够抑制肿瘤微环境中mdsc和treg细胞的激活；(5)能够重塑肿瘤免疫微环境。

35、本发明有益的技术效果在于：

36、本发明通过将胆固醇调节剂引入铂类药物结构中合成铂配合物，所合成的四价铂配合物在体内外均具有优异的抗肿瘤活性，从抑制胆固醇代谢和激活抗肿瘤免疫反应两方面治疗癌症，以多重途径参与抗肿瘤过程，与传统铂类抗肿瘤药物的作用机制不同。

37、本发明首次通过调控胆固醇代谢来破坏肿瘤细胞生长繁殖所需的物质和能量基础，实现抗肿瘤目的；在胆固醇代谢调节过程中，对肿瘤微环境中的免疫细胞产生影响，能够抑制巨噬细胞向m2型极化，激活dc，抑制肿瘤微环境中mdscs和treg t细胞的表达，促进cd8+t淋巴细胞浸润，重塑肿瘤微环境。作为化学免疫治疗剂，本发明涉及的四价铂配合物除了具有上述免疫调节功能外，仍然保留铂类药物的化疗性质，因此其治疗效果优于单纯的化疗药物和免疫调节剂。