ALV-JMHC-B21限制性表位肽及其筛选方法和应用

本发明涉及生物，特别是涉及alv-j mhc-b21限制性表位肽及其筛选方法和应用。

背景技术：

1、禽白血病病毒(avian leukosis virus)为单股、正链rna病毒，属于反转录病毒科α反转录病毒属，其基因组分子有三个主要编码基因，即衣壳蛋白基因(gag)、聚合酶基因(pol)和囊膜糖蛋白基因(env)，表达gag、pol、gp85、gp37四种蛋白。目前根据宿主范围、病毒囊膜蛋白的抗原差异性等可以分为11种亚型，其中j亚型禽白血病病毒(alv-j)感染会诱发鸡产生肿瘤(如髓细胞瘤血管瘤等)，对全球的养禽业危害严重。到目前为止，预防alv-j的感染尚无有效的商品化疫苗，也没有切实有效的治疗措施。有研究表明，细胞免疫在抵抗alv-j感染过程中发挥了重要作用，尤其是cd8+ t细胞应答。

2、由cd8+ t细胞介导的细胞免疫应答过程主要是通过t细胞受体(t cellreceptor，tcr)对i型主要组织相容性复合体(major histocompatibility complexclass,mhc i)与抗原肽组成的复合物进行特异性识别而启动。抗原肽是由抗原递呈细胞(antigen presenting cell，apc)的酶系统对吞噬入胞内的抗原物质进行消化处理后形成的短肽，又称为表位，mhc i分子与特定的抗原多肽片段结合后被转移到细胞表面，通过淋巴细胞特异识别诱导免疫应答发生。所以，刺激机体产生细胞免疫应答，筛选出具有免疫原性的表位至关重要。

3、以往对于cd8+ t细胞表位的筛选主要是根据不同mhc单倍型spf鸡的基序合成随机肽库，然后利用多肽刺激pbmc或脾脏细胞，通过elispot检测ifn-γ的产生来确定是否为cd8+ t细胞表位，但是这个方法敏感性不高，因此有必要开发一种新的多肽表位免疫原性筛选方法，以增强其灵敏性。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供alv-j mhc-b21限制性表位肽及其筛选方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，该alv-j mhc-b21限制性表位肽具有良好的免疫原性，为alv-j表位疫苗的研发提供了基础。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供alv-j mhc-b21限制性表位肽，所述alv-j mhc-b21限制性表位肽的氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.2所示。

4、本发明还提供上述的alv-j mhc-b21限制性表位肽在制备alv表位疫苗中的应用。

5、本发明还提供一种alv表位疫苗，包含上述的alv-j mhc-b21限制性表位肽。

6、进一步地，所述alv表位疫苗还包括药学上可接受的辅料。

7、本发明还提供一种筛选alv-j mhc-b21限制性表位肽的方法，包括利用体外扩增alv-j特异性cd8+ t细胞筛选alv-j mhc-b21限制性潜在表位肽，再对所述alv-j mhc-b21限制性潜在表位肽进行免疫原性验证，从而得到所述alv-j mhc-b21限制性表位肽的步骤。

8、进一步地，所述免疫原性验证采用elisa检测和/或荧光定量pcr检测。

9、本发明公开了以下技术效果：

10、本发明首先根据文献报道的b21单倍型spf鸡mhc i类分子结合多肽的基序(x-h/k/r-x-x-x-x-x-(x)-e/d-x-a/v/l/i/f/m)合成多肽，然后体外培养alv-j特异性cd8+ t细胞，用多肽刺激cd8+ t细胞后通过elispot实验筛选出具有免疫原性的多肽表位，并利用elisa和qpcr实验验证其免疫原性，从而确定有效的t细胞表位。本发明的多肽表位免疫原性筛选方法灵敏性更高，从而找到更全面靶向alv-j的b21 mhc限制性表位，经验证本发明成功筛选出了两条具有免疫原性的表位肽gag343-352和gag531-541，为后续alv-j表位疫苗研发提供了基础。

技术特征：

1.alv-j mhc-b21限制性表位肽，其特征在于，所述alv-j mhc-b21限制性表位肽的氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.2所示。

2.如权利要求1所述的alv-j mhc-b21限制性表位肽在制备alv表位疫苗中的应用。

3.一种alv表位疫苗，其特征在于，包含权利要求1所述的alv-j mhc-b21限制性表位肽。

4.根据权利要求3所述的alv表位疫苗，其特征在于，所述alv表位疫苗还包括药学上可接受的辅料。

5.一种筛选alv-j mhc-b21限制性表位肽的方法，其特征在于，包括利用体外扩增alv-j特异性cd8+t细胞筛选alv-j mhc-b21限制性潜在表位肽，再对所述alv-jmhc-b21限制性潜在表位肽进行免疫原性验证，从而得到所述alv-j mhc-b21限制性表位肽的步骤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述免疫原性验证采用elisa检测和/或荧光定量pcr检测。

技术总结
本发明公开了ALV‑J MHC‑B21限制性表位肽及其筛选方法和应用，涉及生物技术领域。所述ALV‑J MHC‑B21限制性表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本发明首先根据B21单倍型SPF鸡MHC I类分子结合多肽的基序合成多肽，然后体外培养ALV‑J特异性CD8<supgt;+</supgt;T细胞，用多肽刺激CD8<supgt;+</supgt;T细胞后通过ELISpot实验筛选出具有免疫原性的多肽表位，并利用ELISA和qPCR实验验证其免疫原性，从而确定有效的T细胞表位。经验证本发明成功筛选出了两条具有免疫原性的表位肽，为后续ALV‑J表位疫苗研发提供了基础。

技术研发人员：代曼曼,李雪青,陈滢仪,马露露
受保护的技术使用者：华南农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15