外周血白细胞联合标志物在制备原发性胆管癌检测产品中的应用

本发明涉及分子生物学和医学诊断领域，具体涉及外周血白细胞联合标志物在制备原发性胆管癌检测产品中的应用。

背景技术：

1、原发性胆管癌(cholangiocarcinoma，cca)起源于肝内胆管和肝外胆管的上皮细胞，是一类具有高度异质性、侵袭性的恶性肿瘤；根据肿瘤生长部位不同，cca又可以分为肝内胆管癌、肝门部胆管癌、以及远端胆管癌，其中肝内胆管癌占原发性肝癌的10％～15％。近30年内，cca的发病率在全世界范围内呈明显上升趋势，cca发病隐匿，极易侵犯肝脏周围器官、组织和神经，易造成远端转移，大部分病人确诊时通常已处于晚期，缺乏有效治疗方法；而在早期便进行手术干预的cca患者，患者5年内生存率高达80％。因此针对于cca的早期检测是十分有必要的。

2、目前cca的检测主要还是依赖于影像学、血清cea、ca19-9和ca125等传统血清标志物，灵敏性、特异性十分有限。因此，临床上亟需开发一类新型、快捷的生物标志物用于早期原发性胆管癌的检测。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了外周血白细胞联合标志物在制备原发性胆管癌检测产品中的应用，基于检测外周血白细胞联合标志物用于原发性胆管癌早期筛查，具有特异性好、灵敏度高、成本低的显著优势。

2、本发明的第一个目的是提供一种原发性胆管癌的外周血白细胞联合标志物，其中外周血白细胞联合标志物为来源于外周血白细胞rna的cyp27a1、kynu、mafb以及ptgds。

3、本发明的第二个目的是提供上述外周血白细胞联合标志物作为原发性胆管癌辅助诊断指标的应用。

4、本发明的第三个目的是提供一种原发性胆管癌诊断制剂，包括上述外周血白细胞联合标志物。

5、本发明的第四个目的是提供上述外周血白细胞联合标志物在制备早期原发性胆管癌检测试剂盒中的应用。

6、本发明的第五个目的是提供用于检测上述外周血白细胞联合标志物的引物，包括：

7、cyp27a1 f：5′-gccttgttcagaacccttcag-3′(seq id no：1)，

8、cyp27a1 r：5′-attccactcacttccaacatttcc-3′(seq id no：2)；

9、kynu f：5′-agtcacaactacaacttcacgg-3′(seq id no：3)，

10、kynu r：5′-ccaacataacaacccttcgc-3′(seq id no：4)；

11、mafb f：5′-tgtagcatctcaaatccatctg-3′(seq id no：5)，

12、mafb r：5′-acaccaccaagaactcttcc-3′(seq id no：6)；

13、ptgds f：5′-cgttgctgtgattctgttgg-3′(seq id no：7)，

14、ptgds r：5′-agtgtctgatctcctaaccacc-3′(seq id no：8)。

15、优选地，还包括内参引物序列：

16、hprt1 f：5′-gagaactacaaatcccaacaaagc-3′(seq id no：9)，hprt1 r：5′-cgtcattacaatagctcttcagtc-3′(seq id no：10)。

17、本发明的第六个目的是提供检测或诊断原发性胆管癌的cca检测试剂盒，包括：特异性检测人外周血白细胞cyp27a1、kynu、mafb、ptgds的检测试剂。

18、优选地，所述检测试剂包括上述引物。

19、本发明的优点和有益效果如下：

20、1.基于检测外周血白细胞(white blood cell，wbc)rna水平变化来构建的早筛模型能够在肿瘤形成的初期便可以进行特异性的检测。

21、2.外周血白细胞联合标志物是一种液体活检生物标志物，更为灵敏、稳定、无创，且需要的样本量较少，患者更容易接受，其成功开发有助于胆管癌的诊断。

22、3.原发性胆管癌的发病因素复杂，本发明基于检测多个外周血白细胞联合标志物相较于单一的分子标志物，可一定程度上减少因单一指标个体表达差异导致的误差，使结果更加准确。

技术特征：

1.一种原发性胆管癌的外周血白细胞联合标志物，所述外周血白细胞联合标志物为来源于外周血白细胞rna的cyp27a1、kynu、mafb以及ptgds。

2.权利要求1所述的外周血白细胞联合标志物作为原发性胆管癌辅助诊断指标的应用。

3.一种原发性胆管癌诊断制剂，包括权利要求1所述的外周血白细胞联合标志物。

4.权利要求1所述的外周血白细胞联合标志物在制备早期原发性胆管癌检测试剂盒中的应用。

5.用于检测权利要求1所述的外周血白细胞联合标志物的引物，包括：

6.根据权利要求5所述的引物，其特征在于，还包括内参引物序列：

7.检测或诊断原发性胆管癌的cca检测试剂盒，包括：特异性检测人外周血白细胞cyp27a1、kynu、mafb、ptgds的检测试剂。

8.根据权利要求7所述的cca检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂包括权利要求5或6所述的引物。

技术总结
本发明提供了外周血白细胞联合标志物在制备原发性胆管癌检测产品中的应用，外周血白细胞联合标志物为来源于外周血白细胞RNA的CYP27A1、KYNU、MAFB以及PTGDS。基于检测外周血白细胞RNA水平变化来构建的早筛模型能够在肿瘤形成的初期便可以进行特异性的检测；外周血白细胞联合标志物是一种液体活检生物标志物，更为灵敏、稳定、无创，且需要的样本量较少，患者更容易接受，其成功开发有助于胆管癌的诊断；本发明基于检测多个外周血白细胞联合标志物相较于单一的分子标志物，可一定程度上减少因单一指标个体表达差异导致的误差，使结果更加准确。

技术研发人员：陈健翔,董衡,乔逸婷,张政果,倪梦洁,许晓芸
受保护的技术使用者：杭州师范大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16