预防和/或治疗宫颈癌的多肽及其应用

本发明属于生物，具体涉及一种预防和/或治疗宫颈癌的多肽及其应用。

背景技术：

1、宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌，位居第二，且有年轻化的趋势。目前宫颈癌治疗以手术联合放射治疗、化学治疗的综合疗法为主，但是具有毒副作用大、医疗费用高等缺点，开发新的宫颈癌治疗药物是科学界的重要课题之一。

2、研究表明，生物活性肽具有抗肿瘤的生理功能。与目前临床应用的抗肿瘤药物相比，生物活性肽的分子量低、结构简单，具有免疫原性低、不易产生过敏反应等优势。独特的氨基酸结构特点和序列特征，可能赋予生物活性肽特别的肿瘤特异性和靶向性。因此，研发多肽类抗肿瘤新药，具有切实的临床需求和重大的社会意义。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提供一种预防和/或治疗宫颈癌的多肽及其应用。本发明的多肽对宫颈癌细胞具有高特异性和靶向性，能抑制宫颈癌细胞增殖，可用于预防和/或治疗宫颈癌。

2、因此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种多肽。根据本发明的实施例，所述多肽的氨基酸序列如seq id no：1所示。

3、rwtpr（seq id no：1）。

4、需要说明的是，本发明述及的氨基酸序列均按照n端至c端的方式示出。

5、需要说明的是，在本文中，“多肽”有时也被称为“五肽”或“生物活性肽”或“生物活性多肽”。

6、根据本发明实施例的多肽对宫颈癌细胞具有高特异性和靶向性，能抑制宫颈癌细胞增殖，可用于预防和/或治疗宫颈癌。由此，利用该多肽的抗宫颈癌活性，制得的包含该多肽的抑制剂、药物组合物具有抑制宫颈癌细胞增殖的生物活性，可进一步用于药物、细胞培养物或试剂盒的开发。

7、根据本发明的实施例，所述多肽具有如seq id no：1所示的保守修饰形式的氨基酸序列。

8、需要说明的是，在不实质性影响本发明多肽的抗宫颈癌活性（保留至少90%的活性）的前提下，本发明多肽的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的其它氨基酸残基替代，并且其可用本文中说明的功能测定方法对经改变的多肽的保留功能进行测试。优选地，保守修饰在数目上不超过1个或2个。

9、在本发明的第二方面，本发明提出了一种缀合物。根据本发明的实施例，所述缀合物包括：

10、前述多肽；

11、缀合部分，所述缀合部分与所述多肽相偶联。

12、在本文中，术语“缀合物”有时也被称为“偶合物”或“偶联物”，是指使用任何共价或非共价生物缀合策略与偶联部分比如载体物质、药物、毒素、细胞因子、蛋白标签、修饰物、治疗剂和化疗剂等缀合的蛋白质或多肽片段。

13、为了获得预期的多肽性能，例如便于给药、降低多肽对正常组织的毒性、延长在体内血液循环系统中停留时长、提高靶向性等，可以将多肽与适宜的偶联部分相连。由此，得到含有本发明实施例多肽的缀合物。

14、根据本发明的实施例，所述偶联部分包括载体、药物、毒素、细胞因子、蛋白标签、修饰物、治疗剂和化疗剂中的至少之一。

15、在本发明的第三方面，本发明提出了一种核酸分子。根据本发明的实施例，所述核酸分子编码前述的多肽。

16、根据本发明的实施例，所述核酸编码的前述多肽对宫颈癌细胞具有高特异性和靶向性，能抑制宫颈癌细胞增殖，可用于预防和/或治疗宫颈癌。由此，利用所述核酸编码多肽的抗宫颈癌活性，制得的包含该多肽的抑制剂、药物组合物具有抑制宫颈癌细胞增殖的活性，可进一步用于药物、细胞培养物或试剂盒的开发。

17、需要说明的是，对于本文中所提及的核酸分子，本领域技术人员应当理解，实际包括互补双链的任意一条，或者两条。为了方便，在本文中，虽然多数情况下只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。另外，本发明中的分子序列包括dna形式或rna形式，公开其中一种，意味着另一种也被公开。

18、在本发明的第四方面，本发明提出了一种构建体。根据本发明的实施例，所述构建体包括前述核酸分子。由此，利用构建得到的构建体，比如载体或转化子，可有效表达上述的多肽。

19、根据本发明的实施例，所述构建体，可以是载体或转化子。

20、在本文中，术语“载体”通常是指能够插入在合适的宿主中自我复制的核酸分子，其将插入的核酸分子转移到宿主细胞中和/或宿主细胞之间。所述载体可包括主要用于将dna或rna插入细胞中的载体、主要用于复制dna或rna的载体，以及主要用于dna或rna的转录和/或翻译的表达的载体。所述载体还包括具有多种上述功能的载体。所述载体可以是当引入合适的宿主细胞时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。通常，通过培养包含所述载体的合适的宿主细胞，所述载体可以产生期望的表达产物。

21、根据本发明的实施例，所述构建体（比如载体或转化子）可包括可选的控制序列，所述控制序列与所述核酸分子可操作地连接。其中，所述控制序列为可指导所述核酸分子在宿主中表达的一个或多个控制序列。由此构建得到的构建体（比如载体或转化子），可有效表达上述多肽。

22、在将上述核酸分子连接到所述构建体（比如载体或转化子）上，比如表达载体上时，可以将所述核酸分子与表达载体上的控制元件直接或者间接相连，只要这些控制元件能够控制所述核酸分子的翻译和表达等即可。当然这些控制元件可以直接来自于载体本身，也可以是外源性的，即并非来自于载体本身。所述核酸分子与控制元件进行可操作地连接即可。

23、在本发明的一些实施例中，所述载体可以指克隆载体，也可以指表达载体，可以通过将所述核酸与商购的载体（如质粒或病毒载体）可操作地连接而获得。本发明中的载体不受特别限制，常用的质粒均可使用，如psetag2、pee14、pmh3等。

24、在本文中，术语“可操作地连接”是指将外源基因连接到载体上，使得载体内的控制元件，例如转录控制序列和翻译控制序列等，能够发挥其预期的调节外源基因的转录和翻译的功能。常用的载体例如可以为病毒载体、质粒、噬菌体等。

25、根据本发明的一些具体实施例的表达载体导入合适的受体细胞后，可在调控系统的介导下，有效实现前面所述的核酸分子的表达，进而实现所述核酸分子编码的多肽的体外大量获得。

26、在本发明的一些实施例中，所述载体为真核载体或原核载体。

27、在本发明的第五方面，本发明提出了一种细胞。根据本发明的实施例，所述细胞携带前述核酸分子或前述构建体；或表达前述多肽。根据本发明的实施例，所述细胞在合适条件下可高效表达上述的多肽，进一步地，获得的多肽对宫颈癌细胞具有高特异性和靶向性，能抑制宫颈癌细胞增殖，可用于预防和/或治疗宫颈癌。

28、在本发明的一些实施例中，所述细胞为原核细胞、真核细胞或噬菌体。

29、在本发明的一些实施例中，所述原核细胞为大肠杆菌、枯草杆菌、链霉菌或奇异变形菌。

30、在本发明的一些实施例中，所述真核细胞为真菌、昆虫细胞、植物细胞或哺乳动物细胞。

31、在本发明的一些实施例中，所述真菌为巴斯德毕赤酵母、酿酒酵母、裂殖酵母或木霉。

32、在本发明的一些实施例中，所述昆虫细胞为草地粘虫细胞；根据本发明的实施例，所述植物细胞是烟草植物细胞；根据本发明的实施例，所述哺乳动物细胞为bhk细胞、cho细胞、cos细胞、骨髓瘤细胞或人胚肾293细胞；且不包括动物生殖细胞、受精卵或胚胎干细胞。

33、在本发明的一些实施例中，所述细胞是哺乳动物细胞。

34、在本发明的一些实施例中，所述细胞是bhk细胞、cho细胞、cos细胞或nso细胞。

35、需要说明的是，本技术说明书中所述的“适合条件”，是指适合本技术所述多肽表达的条件。本领域技术人员容易理解的是，适合多肽的条件包括但不限于合适的转化或转染方式、合适的转化或转染条件、健康的宿主细胞状态、合适的宿主细胞密度、适宜的细胞培养环境、适宜的细胞培养时间。“适合条件”不受特别限制，本领域技术人员可根据实验室的具体环境，优化形成最适的所述多肽表达的条件。

36、在本发明的第六方面，本发明提出了一种抑制剂。根据本发明的实施例，所述抑制剂包括：前述多肽、前述缀合物、前述核酸分子、前述构建体或前述细胞。

37、根据本发明的实施例，所述抑制剂具有抑制宫颈癌细胞增殖性能，可进一步用于开发抑制宫颈癌细胞增殖的产品。

38、在本发明的一些实施例中，所述产品，包括不限于：药物、细胞培养物和试剂盒。

39、在本发明的第七方面，本发明提出了一种药物组合物。根据本发明的实施例，所述药物组合物包括：前述多肽、前述缀合物、前述核酸分子、前述构建体或前述细胞。

40、根据本发明实施例的药物组合物具有抑制宫颈癌细胞增殖的活性，可进一步用于预防和/或治疗宫颈癌的药物开发。

41、根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括药学上可接受的辅料。

42、根据本发明的实施例，所述辅料包括赋形剂、稀释剂、稳定剂和载体中的至少之一。

43、根据本发明的实施例，所述药物组合物为注射剂。

44、在本文中，术语“药物组合物”通常是指单位剂量形式，并且可以通过制药领域中熟知的方法的任何一种进行制备。所有的方法包括使活性成分与构成一种或多种附属成分的载体相结合的步骤。通常，通过均匀并充分地使活性化合物与液体载体、固体载体或这两者相结合，制备组合物。

45、在本文中，术语“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应（如毒性、刺激和变态反应）的，即具有合理的效益/风险比的物质。

46、在本文中，术语“药学上可接受的辅料”均可包括任何溶剂、固体赋形剂、稀释剂或其它液体赋形剂等，适合于特有的目标剂型。除了任何常规的辅料与本发明的化合物不相容的范围，例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的组合物的任何其它组分以有害的方式产生的相互作用，它们的用途也是本发明所考虑的范围。

47、在本发明的第八方面，本发明提出了前述多肽、前述缀合物、前述核酸分子、前述构建体、前述细胞、前述的抑制剂或前述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗宫颈癌。

48、本领域技术人员能够理解的是，前面针对多肽、缀合物、核酸分子、构建体、细胞、抑制剂或药物组合物所描述的特征和优点，同样适用于该制备药物的用途，在此不再赘述。

49、在本发明的第九方面，本发明提出了一种试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括前述多肽、前述缀合物、前述核酸分子、前述构建体、前述细胞、前述的抑制剂或前述药物组合物。根据本发明的实施例，所述试剂盒可用于抑制宫颈癌细胞增殖。

50、本领域技术人员能够理解的是，前面针对多肽、缀合物、核酸分子、构建体、细胞、抑制剂或药物组合物所描述的特征和优点，同样适用于该试剂盒，在此不再赘述。

51、在本发明的第十方面，本发明提出了前述多肽、前述缀合物、前述核酸分子、前述构建体、前述细胞、前述的抑制剂或前述药物组合物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于抑制宫颈癌细胞增殖。

52、本领域技术人员能够理解的是，前面针对多肽、缀合物、核酸分子、构建体、细胞、抑制剂或药物组合物所描述的特征和优点，同样适用于该制备试剂盒的用途，在此不再赘述。

53、在本发明的第十一方面，本发明提出了一种体外抑制宫颈癌细胞增殖的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将所述宫颈癌细胞与前述多肽、前述缀合物、前述细胞、前述的抑制剂或前述药物组合物接触。

54、需要说明的是，在本文中所使用的术语“接触”应做广义理解，其可以是任何能够使得至少两种反应物发生物化学反应的方式，例如可以是将两种反应物在适当的条件下进行混合。

55、本领域技术人员能够理解的是，前面针对多肽、缀合物、构建体、细胞、抑制剂或药物组合物所描述的特征和优点，同样适用于该方法，在此不再赘述。

56、有益效果：

57、本发明提供了氨基酸序列为arg-trp-thr-pro-arg（rwtpr）的多肽，实验证明其对宫颈癌细胞具有高特异性和靶向性，是理想的宫颈癌靶向治疗生物活性肽。本发明的多肽能抑制宫颈癌细胞增殖，可用于预防和/或治疗宫颈癌。利用本发明的多肽制得的抑制剂、药物组合物，具有抑制宫颈癌细胞增殖的生物活性，可进一步用于药物、细胞培养物或试剂盒等产品的开发。由此，本发明的多肽具有切实的临床治疗价值和广阔的市场应用价值。

58、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。