一种高活性Wnt通路抑制剂化合物的制作方法

本发明涉及一种杂环化合物，具体地涉及一种高活性的wnt通路抑制剂及其用途。

背景技术：

1、wnt/β-catenin信号转导通路是一条在生物进化中保守的通路。在正常的体细胞中，β-catenin只是作为一种细胞骨架蛋白在胞膜处与e-cadherin形成复合体对维持同型细胞的黏附、防止细胞的移动发挥作用。当wnt信号通路未被激活时，细胞质内的β-catenin被磷酸化与apc、axin和gsk3β等构成β-catenin降解复合物，启动泛素系统经蛋白酶体途径降解β-catenin，使细胞质内的β-catenin维持在较低水平。当细胞受到wnt信号刺激时，wnt蛋白与细胞膜上特异性受体frizzled蛋白结合，激活后的frizzled受体招募胞内dishevelled蛋白，抑制gsk3β等蛋白形成的β-catenin降解复合物的降解活性，稳定细胞质中游离状态的β-catenin蛋白。胞浆中稳定积累的β-catenin进入细胞核后结合lef/tcf转录因子家族，启动下游靶基因(如c-myc、c-jun，cyclin d1等)的转录。wnt/β-catenin信号通路的过渡激活与多种癌症(包括结肠癌、胃癌、乳腺癌等)的发生密切相关。例如结直肠癌中广泛存在wnt经典信号通路的异常激活和β-catenin蛋白的核内积聚现象,而通过抑制wnt信号通路活性可以抑制结肠癌增殖。85％以上的结直肠癌中均存在apc的突变，突变后的apc阻断β-catenin磷酸化降解，诱导结直肠癌的发生。此外，axin突变、β-catenin自身突变也可引起β-catenin的胞内聚集，活化wnt/β-catenin通路。

技术实现思路

1、在一个实施方式中，本发明提供了具有如下结构的化合物及药学上可接受的盐、同位素衍生物、立体异构体：

2、

3、在一个实施方式中，本发明提供了制备如上所述的化合物的方法，包括使用

4、式1i化合物作为中间体：

5、

6、在一个实施方式中，式11化合物的制备包括如下所述步骤：

7、

8、第一步：将6-(三氟甲基)吡啶-3-醇11a溶于二甲亚砜中，加入碳酸铯，室温搅拌30分钟后加入2-氟吡啶-5-甲醛11b，反应混合物继续搅拌2小时后终止反应。反应液用乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和食盐水洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化得到产物11c；第二步：将化合物11c溶于乙醇，加入盐酸羟胺，室温搅拌过夜。反应液浓缩得到粗品肟，重新溶解于醋酸中，加入锌粉，室温搅拌2小时，lcms检测反应完全。反应混合物过滤，滤液浓缩除去大部分醋酸，加乙酸乙酯稀释，然后用naoh溶液碱化至ph＝11。混合物过滤，滤液浓缩得到化合物11d，直接用于下一步反应；第三步：将化合物11d，化合物1i，pd2(dba)3，t-buona和x-phos分散于甲苯中，体系置换氮气后加热至100℃反应16小时，lcms监测反应结束，反应液浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化，得到粗品再通过制备hplc纯化得到化合物11。

9、在一个实施方式中，式13化合物的制备包括如下所述步骤：

10、

11、第一步：将4-(boc-氨甲基)吡唑13b溶于n,n-二甲基甲酰胺中，加入3-三氟甲基氯苄13a和碳酸铯，室温搅拌4小时后终止反应。反应液用乙酸乙酯稀释，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到化合物13c；第二步：将化合物13c溶于二氧六环，加入4n盐酸二氧六环溶液，反应液在室温搅拌过夜，lcms检测反应完全。反应液浓缩得到化合物13d；第三步：将化合物13d，化合物1i，pd2(dba)3，t-buona和s-phos分散于甲苯中，反应体系置换氮气后加热至100℃反应16小时。lcms监测反应结束，反应液浓缩，残余物通过制备型薄层层析纯化，得到粗品再通过制备hplc纯化得到化合物13。

12、在一个实施方式中，用4-氟氯苄替换实如上所述化合物13的制备步骤中第一步的3-三氟甲基氯苄13a，用类似的方法和反应步骤，可以得到化合物15。

13、在一个实施方式中，式130化合物的制备包括如下所述步骤：

14、

15、第一步：将三氟乙酰乙酸乙酯130a和环丙基肼盐酸盐130b溶于20ml乙醇中，80℃反应过夜。反应液浓缩，残余物加入石油醚打浆，过滤得棕色固体化合物130c；第二步：将化合物130c和化合物97b溶于10ml乙腈中，加入碳酸铯，室温反应过夜，lcms监测原料反应完全。反应液加入乙酸乙酯稀释，分别用水和饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残余物用硅胶柱层析纯化得无色油状物化合物130d；第三步：将化合物130d溶于30ml甲醇中，加入雷尼镍，氨水，氢气氛下室温反应过夜，lcms监测原料反应完全。反应液用硅藻土过滤，甲醇洗涤滤饼，滤液浓缩得浅灰色油化合物130e；第四步：将化合物1i和化合物130e溶于正丁醇中，加入一水对甲苯磺酸，微波条件下160℃反应3小时，lcms监测原料反应完全。反应液直接通过反向制备hplc纯化得白色固体化合物130。

16、在一个实施方式中，本发明提供了一种制备如上所述的式1i化合物的方法，包括以下步骤：

17、

18、第一步：将6-三氟甲基-3-吡啶甲醇1a溶于二氯甲烷中，在冰浴条件下滴加氯化亚砜，加完后反应升至室温，并在55℃条件下搅拌过夜。反应液浓缩得到粗品黄色的油状物1b；第二步：将化合物1b，化合物1c(溶于n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，加入碳酸钾，在室温条件下搅拌过夜。反应液用乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到黄色固体1d；第三步：将化合物1d和盐酸羟胺溶于乙醇中，在室温条件下搅拌过夜。向反应液中加入锌粉和醋酸加热至70℃反应过夜。反应结束后，减压蒸掉大部分的溶剂，残余物用2n的氢氧化钠调节ph值为11-12，过滤。滤液用二氯甲烷萃取三次，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到黄色油状物1e；第四步：将2,4-二氯吡啶并[3,2-d]嘧啶1f和(s)-2-(甲基氨基)丙酸甲酯盐酸盐1g溶解于四氢呋喃中，加入三乙胺，在室温条件下搅拌过夜。lcms监测反应结束，反应液浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化，得到黄色油状物1h；第五步：将化合物1h溶解于四氢呋喃中，加入盐酸水溶液和二氧化铂，反应体系用氢气球置换氢气，在室温氢气球压力下搅拌48小时，lcms监测反应结束。反应液用甲醇稀释，过滤，滤液浓缩后通过硅胶柱层析纯化，得到白色固体1i。

19、本发明还提供了药物组合物，包括如上所述的化合物11、化合物13、化合物15、化合物130以及药学上可接受的盐、同位素衍生物、立体异构体。

20、本发明还提供了如上所述的化合物11、化合物13、化合物15、化合物130以及药学上可接受的盐、同位素衍生物、立体异构体以及药物组合物用于预防和/或治疗癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病或免疫介导性疾病的药物中的用途。

21、特别注意的是，在本文中，当提及具有特定结构式的“化合物”时，一般地还涵盖其立体异构体、非对映异构体、对映异构体、外消旋混合物和同位素衍生物。

22、本领域技术人员公知，一种化合物的盐、溶剂合物、水合物是化合物的替代性存在形式，它们都可以在一定条件下转化为所述化合物，因此，特别注意的是在本文中当提到一种化合物时，一般地还包括它的可药用盐，进而还包括其溶剂合物和水合物。

23、相似地，在本文中当提到一种化合物时，一般地还包括其前药、代谢产物和氮氧化物。

24、本发明所述的可药用盐可使用例如以下的无机酸或有机酸而形成：“可药用盐”是指这样的盐，在合理的医学判断范围内，其适用于接触人和较低等动物的组织，而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等，称得上合理的受益/风险比。可以在本发明化合物的最终分离和纯化期间原位制备所述盐，或单独通过将游离碱或游离酸与合适的试剂反应制备所述盐，如下概述。例如，游离碱功能可以与合适的酸反应。此外，当本发明的化合物带有酸性部分，其合适的可药用盐可包括金属盐，例如碱金属盐(如钠盐或钾盐)；和碱土金属盐(如钙盐或镁盐)。可药用的无毒酸加成盐的示例是氨基与无机酸(例如，盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或有机酸(例如，醋酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用现有技术中的其他方法如离子交换形成的盐。

25、本发明的可药用盐可通过常规方法制备，例如通过将本发明的化合物溶解于与水可混溶的有机溶剂(例如丙酮、甲醇、乙醇和乙腈)，向其中添加过量的有机酸或无机酸水溶液，以使得盐从所得混合物中沉淀，从中除去溶剂和剩余的游离酸，然后分离所沉淀的盐。

26、本发明所述的前体或代谢物可以本领域公知的前体或代谢物，只要所述的前体或代谢物通过体内代谢转化形成化合物即可。例如“前药”是指本发明化合物的那些前药，在合理的医学判断范围内，其适用于接触人和更低等动物的组织，而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等，称得上合理的受益/风险比并且对其预期用途有效。术语“前药”是指在体内迅速经转化产生上述式的母体化合物的化合物，例如通过在体内代谢，或本发明化合物的n-去甲基化。

27、本发明所述的“溶剂合物”意指本发明化合物与一个或多个溶剂分子(无论有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情形中，例如当一个或多个溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够被分离。溶剂化物中的溶剂分子可按规则排列和/或无序排列存在。溶剂合物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂合物”涵盖溶液相和可分离的溶剂合物。示例性溶剂合物包括但不限于水合物、乙醇合物、甲醇合物和异丙醇合物。溶剂化方法是本领域公知的。

28、本发明所述的“立体异构”分为构象异构和构型异构，构型异构还可分为顺反异构和旋光异构(即光学异构)，构象异构是指具有一定构型的有机物分子由于碳、碳单键的旋转或扭曲而使得分子各原子或原子团在空间产生不同的排列方式的一种立体异构现象，常见的有烷烃和环烷烃类化合物的结构，如环己烷结构中出现的椅式构象和船式构象。“立体异构体”是指当本发明化合物含有一个或多个不对称中心，因而可作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体。本发明化合物有不对称中心，每个不对称中心会产生两个光学异构体，本发明的范围包括所有可能的光学异构体和非对映异构体混合物和纯的或部分纯的化合物。本发明所述的化合物可以以互变异构体形式存在，其通过一个或多个双键位移而具有不同的氢的连接点。例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。各互变异构体及其混合物都包括在本发明的化合物中。所有式(i)化合物的对映异构体、非对映异构体、外消旋体、内消旋体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物等，均包括在本发明范围中。

29、本发明的“同位素衍生物”是指在本专利中化合物被同位素标记的分子。通常用作同位素标记的同位素是：氢同位素，2h和3h；碳同位素：11c,13c和14c；氯同位素：35cl和37cl；氟同位素：18f；碘同位素：123i和125i；氮同位素：13n和15n；氧同位素：15o,17o和18o和硫同位素35s。这些同位素标记化合物可以用来研究药用分子在组织中的分布情况。尤其是氘3h和碳13c，由于它们容易标记且方便检测，运用更为广泛。某些重同位素，比如重氢(2h)，的取代能增强代谢的稳定性，延长半衰期从而达到减少剂量的目而提供疗效优势的。同位素标记的化合物一般从已被标记的起始物开始，用已知的合成技术象合成非同位素标记的化合物一样来完成其合成。

30、本发明还提供了本发明化合物在制备用于预防和/或治疗癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病或免疫介导性疾病的药物中的用途。

31、此外，本发明提供了用于预防和/或治疗癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病、神经退行性疾病、注意力相关疾病或免疫介导性疾病的药物组合物，其包含本发明化合物作为活性成分。

32、此外，本发明提供了一种用于预防和/或治疗癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病、神经退行性疾病、注意力相关疾病或免疫介导性疾病的方法，其包括向有此需要的哺乳动物施用本发明化合物。

33、当将本发明化合物或其可药用盐与另外的用于治疗癌症或肿瘤的抗癌剂或免疫检查点抑制剂组合施用时，本发明化合物或其可药用盐可提供增强的抗癌作用。

34、当将本发明化合物或其可药用盐与另外的用于治疗炎症性疾病、自身免疫性疾病和免疫介导性疾病的治疗剂组合施用时，本发明化合物或其可药用盐可提供增强的治疗作用。

35、本发明的化合物或其可药用盐可作为活性成分通过口服或肠胃外施用。活性成分的剂量可根据多个相关因素(例如待治疗对象的情况、疾病类型和严重性、施用速率和医生意见)进行调整。在某些情况下，小于以上剂量的量可能是合适的。如果不引起有害的副作用则可使用大于以上剂量的量并且该量可以每天以分次剂量施用。

36、除此之外，本发明还提供了一种预防和/或治疗肿瘤、癌症、病毒感染、器官移植排斥、神经退行性疾病、注意力相关疾病或自身免疫性疾病的方法，其包括向有此需要的哺乳动物施用本发明的化合物或本发明的药物组合物。

37、可根据常规方法中的任何一种将本发明药物组合物配制成用于口服施用或肠胃外施用(包括肌内、静脉内和皮下途径、瘤内注射)的剂型，例如片剂、颗粒、粉末、胶囊、糖浆、乳剂、微乳剂、溶液或混悬液。

38、本发明描述示例性实施方案的过程中，本发明的其它特征将变得显而易见，给出所述实施方案用于说明本发明而不意欲成为其限制，以下实施例使用本发明所公开的方法制备、分离和表征。

39、可以用有机合成领域的技术人员已知的多种方式来制备本发明的化合物，可使用下述方法以及有机合成化学领域中已知的合成方法或通过本领域技术人员所了解的其变化形式来合成本发明化合物。优选方法包括但不限于下文所述的这些。在适用于所使用试剂盒材料和适用于所实现转变的溶剂或溶剂混合物中实施反应。有机合成领域的技术人员将理解，分子上存在的官能性与所提出的转变一致。这有时需要加以判断改变合成步骤的顺序或原料以获得期望的本发明化合物。