抗氯氮平单克隆抗体及其应用和产品的制作方法

本发明涉及生物，尤其是涉及一种抗氯氮平单克隆抗体及其应用和产品。

背景技术：

1、氯氮平(clozapine)是临床常用的抗精神药物，属于二苯并二氮杂卓衍生物类化合物，可通过阻断中脑边缘多巴胺通路上da1受体来改善精神分裂症患者的阳性症状，且可通过阻断脑内5-羟色胺受体，促使多巴胺脱抑制性释放，进而降低其阴性症状。氯氮平又称8-氯-11(4-甲基-1-哌嗪基)-5h-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓，密度：1.31g/cm3，熔点：182-185℃，分子式：c18h19cln4。外观为淡黄色结晶性粉末，无臭，无味。在三氯甲烷中易溶，在乙醇中溶解，在水中几乎不溶，其化学结构式如图1所示。

2、口服氯氮平吸收快而完全，食物对其吸收速率和程度无影响，吸收后迅速广泛分布到各组织，生物利用度个体差异较大，平均约50％～60％，有肝脏首过效应。服药后3.2小时(1～4小时)达血浆峰浓度，消除半衰期(t1/2β)平均9小时(3.6～14.3小时)，表观分布容积(vd)4.04～13.78l/kg，组织结合率高。经肝脏代谢，80％以代谢物形式出现在尿和粪中，主要代谢产物有n-去甲基氯氮平、氯氮平的n-氧化物等。在同等剂量与体重一定的情况下，女性病人的血清药物浓度明显高于男性病人，吸烟可加速本品的代谢，肾清除率及代谢在老年人中明显减低。本品可从乳汁中分泌且可通过血脑屏障。

3、临床试验表明，氯氮平具有很强的抗精神病作用。此外，它还有缓解疼痛、抑制肾上腺素与去甲肾上腺素导致的升压等作用，且锥体外系副反应极少，可用于治疗急慢性精神分裂症、癫痫或智能发育不全所产生的兴奋躁动状态。然而一部分使用氯氮平治疗的精神病人会患有一种名为“粒细胞减少症”的白血病，严重者可在服药3个月后死亡。尽管如此，氯氮平仍然因其低廉的价格及良好的疗效占据我国精神病治疗药的部分市场。氯氮平的使用者多为精神病患者，其自控能力较差，意外过量服用导致中毒死亡的事件时有发生。此外，在麻醉抢劫、强奸案件中涉及氯氮平的案例也越来越多。更有甚者，罪犯利用氯氮平投毒的案例亦有报道。

4、目前，对氯氮平的检测主要包括液相色谱与质谱联用法(hplc-ms)，气相色谱与质谱联用法(gc-ms)、光谱分析法、毛细管电泳和电化学分析等方法。大部分仅局限于实验室的检测，而直接用于现场检测的较少。实现对氯氮平的现场检测，将对氯氮平血药浓度的医学监测以及自杀、投毒等刑事案件的侦破具有重大的意义，因此建立快速、灵敏、准确的检测技术是很有必要的。

5、为了解决现场大规模应用的问题，免疫学法由于其检测速度快，成本低，通量高，部分免疫学检测方法(胶体金纸层析法)还具有操作简单，不需要额外设备等优点，倍受重视。因此，开发出优良的氯氮平诊断用的抗体成为了决定免疫学法应用前景的关键。

6、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的第一目的在于提供一种抗氯氮平单克隆抗体，旨在为基于免疫学原理的检测氯氮平胶体金免疫层析技术等方法提供稳定可靠的原料来源，降低产品对外购原料的依赖，降低产品成本；同时提高氯氮平快速诊断商品如金标试纸条、elisa试剂盒等的检出率及灵敏度，降低假阳率，提高自产商品的竞争力。

2、本发明的第二目的在于提供一种生物材料。

3、本发明的第三目的在于提供上述抗氯氮平单克隆抗体在非诊断和治疗目的的抗氯氮检测中的应用。

4、本发明的第四目的在于提供一种氯氮平标记物。

5、本发明的第五目的在于提供一种用于氯氮平检测的试剂盒。

6、第一方面，本发明提供了一种抗氯氮平单克隆抗体，所述抗氯氮平单克隆抗体的可变区包括：具有如seq id no.1所示氨基酸序列的互补决定区cdr1-vh、具有如seq idno.2所示氨基酸序列的互补决定区cdr2-vh、具有如seq id no.3所示氨基酸序列的互补决定区cdr3-vh、具有如seq id no.4所示氨基酸序列的互补决定区cdr1-vl、具有如seq idno.5所示氨基酸序列的互补决定区cdr2-vl和具有如seq id no.6所示氨基酸序列的互补决定区cdr3-vl。

7、作为进一步技术方案，所述可变区包括具有如seq id no.7所示氨基酸序列的重链可变区vh。

8、作为进一步技术方案，所述可变区包括具有如seq id no.8所示氨基酸序列的轻链可变区vl。

9、作为进一步技术方案，所述抗氯氮平单克隆抗体为igg抗体。

10、第二方面，本发明提供了一种生物材料，所述生物材料选自a-c中的任一项：

11、a.核苷酸，所述核苷酸包括编码上述抗氯氮平单克隆抗体的核苷酸序列；

12、b.载体，所述载体携带所述a中的核苷酸；

13、c.细胞，所述细胞携带所述a中核苷酸，或者含有所述b中载体，或者表达上述抗氯氮平单克隆抗体。

14、第三方面，本发明提供了上述抗氯氮平单克隆抗体在非诊断和治疗目的的氯氮平检测中的应用。

15、第四方面，本发明提供了一种氯氮平标记物，包括上述抗氯氮平单克隆抗体和标记物；

16、所述抗氯氮平单克隆抗体和标记物偶联。

17、作为进一步技术方案，所述标记物包括酶、荧光分子标记、荧光微球、彩色微球、胶体金、生物素或链霉亲或素。

18、第五方面，本发明提供了一种用于氯氮平检测的试剂盒，所述试剂盒包括上述抗氯氮平单克隆抗体或者氯氮平标记物。

19、作为进一步技术方案，所述试剂盒包括免疫层析检测试剂盒、elisa检测试剂盒、免疫磁微粒检测试剂盒、免疫荧光检测试剂盒或免疫印记检测试剂盒。

20、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

21、本发明运用氯氮平免疫balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过特异性的高通量筛选得到具有高度特异性的杂交瘤细胞，通过培养和再免疫获得大量小鼠腹水，再经多步分离及纯化获得高纯度、高灵敏度和高特异性的抗氯氮平的单克隆抗体anti-clozapine-mab1，为开发检测氯氮平的免疫试纸条提供了所需的原料。本发明提供的抗氯氮平的单克隆抗体anti-clozapine-mab1可用于免疫印迹、免疫荧光等免疫学检测，所获抗体经验证具有良好的特异性结合能力。

技术特征：

1.一种抗氯氮平单克隆抗体，其特征在于，所述抗氯氮平单克隆抗体的可变区包括：具有如seq id no.1所示氨基酸序列的互补决定区cdr1-vh、具有如seq id no.2所示氨基酸序列的互补决定区cdr2-vh、具有如seq id no.3所示氨基酸序列的互补决定区cdr3-vh、具有如seq id no.4所示氨基酸序列的互补决定区cdr1-vl、具有如seq id no.5所示氨基酸序列的互补决定区cdr2-vl和具有如seq id no.6所示氨基酸序列的互补决定区cdr3-vl。

2.根据权利要求1所述的抗氯氮平单克隆抗体，其特征在于，所述可变区包括具有如seq id no.7所示氨基酸序列的重链可变区vh。

3.根据权利要求1所述的抗氯氮平单克隆抗体，其特征在于，所述可变区包括具有如seq id no.8所示氨基酸序列的轻链可变区vl。

4.根据权利要求1所述的抗氯氮平单克隆抗体，其特征在于，所述抗氯氮平单克隆抗体为igg抗体。

5.生物材料，其特征在于，所述生物材料选自a-c中的任一项：

6.权利要求1-4任一项所述的抗氯氮平单克隆抗体在非诊断和治疗目的的氯氮平检测中的应用。

7.一种氯氮平标记物，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的抗氯氮平单克隆抗体和标记物；

8.根据权利要求7所述的氯氮平标记物，其特征在于，所述标记物包括酶、荧光分子标记、荧光微球、彩色微球、胶体金、生物素或链霉亲或素。

9.一种用于氯氮平检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-4任一项所述的抗氯氮平单克隆抗体或者权利要求7或8所述的氯氮平标记物。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括免疫层析检测试剂盒、elisa检测试剂盒、免疫磁微粒检测试剂盒、免疫荧光检测试剂盒或免疫印记检测试剂盒。

技术总结
本发明提供了一种抗氯氮平单克隆抗体及其应用和产品，涉及生物技术领域。本发明提供的抗氯氮平单克隆抗体，其可变区包括：具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1‑VH、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2‑VH、具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3‑VH、具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的互补决定区CDR1‑VL、具有如SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的互补决定区CDR2‑VL和具有如SEQ ID NO.6所示氨基酸序列的互补决定区CDR3‑VL。该抗体对氯氮平具有良好的特异性结合能力。

技术研发人员：魏文涛,陈媛,成含锋,魏昕洋
受保护的技术使用者：杭州旭科生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16