与白菜型油菜有限花序基因Brdt1紧密连锁的SSR分子标记引物及其应用

本发明涉及一种与有限花序基因紧密连锁的ssr分子标记，具体涉及一种与白菜型油菜有限花序基因brdt1紧密连锁的ssr分子标记引物及其应用。

背景技术：

1、油菜是全世界非常重要的油料作物，栽培种有甘蓝型油菜(brassica napus，aacc，2n＝38)、芥菜型油菜(brassica juncea，aabb，2n＝36)和白菜型油菜(brassicarapa，aa，2n＝20)。由于长期的自然和栽培条件的选择，白菜型油菜具有许多优良特性，如耐瘠薄、耐干旱、抗寒性等，特别是其生育期短的特点。

2、高等植物的花序一般可分为无限花序和有限花序，白菜型油菜正常花序是无限花序，其在生产上存在一些缺陷，如：易倒伏、整齐度不好、熟期不一致、无效角果多等。未来机械化生产将是提高油菜经济效益的重要途径，实现油菜从无限花序向有限花序转变，克服无限花序的不足，为选育适合机械化的油菜品种提供了新思路。

3、目前还没有关于白菜型油菜有限花序习性的研究，可用于白菜型油菜有限花序材料分子标记辅助选择育种的分子标记也未见报道。

4、株型的改良对农作物产量提高具有重要的作用。将矮杆性状基因引入小麦、水稻中，最终降低了植株的株高，掀起了水稻和小麦的绿色革命，使其在世界范围内的产量得到了大幅度的提升。株高被认为是影响油菜产量最重要的株型性状，降低油菜品种的株高，提高油菜的抗倒伏能力，使油菜更适合机械化收割。目前在蚕豆、芝麻、甘蓝型油菜和芥菜型油菜等植物中研究表明，植物有限花序性状具有降低株高、抗倒伏、生育期提前、成熟一致性好、对产量无负面影响等特性。因此，为了将有限花序性状应用于白菜型油菜育种中，需要提供控制白菜型油菜有限花序性状的基因位点，并利用白菜型油菜基因组数据库，开发与白菜型油菜有限花序基因紧密连锁的ssr分子标记，其可用作图位克隆以及有限花序性状的分子标记辅助选择育种。

5、目前未见有白菜型油菜有限花序性状的报道，要想获得白菜型油菜有限花序性状只能通过种间杂交(白菜型油菜与甘蓝型油菜或芥菜型油菜杂交)将甘蓝型油菜或芥菜型油菜有限花序现状转育到白菜型油菜中。

6、目前选育有限花序品系的方法如下：将具有有限花序性状的品系作为供体亲本，通过杂交和回交，经多代表型鉴定后转育到其他性状优良的品系中。

7、但是，传统转育有限花序性状过程中主要存在以下缺点：

8、1、表型鉴定工作量较大：传统转育过程中需要较大的分离群体；

9、2、选择效率较低：在转育有限花序性状过程中每杂交或回交一次，需要自交产生有限花序性状植株，避免有限花序基因丢失；这会造成费时费力，极大的延缓了育种进程。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种与白菜型油菜有限花序基因brdt1紧密连锁的ssr分子标记引物及其应用，解决了传统选育有限花序品系选择效率较低的问题，能够实现辅助白菜型油菜有限花序材料的育种，加快育种速度。

2、为了达到上述目的，本发明提供了与白菜型油菜有限花序基因brdt1紧密连锁的ssr分子标记引物，该引物的核苷酸序列如seq id no.n～n+1所示，n为1～24之间的奇数。

3、本发明的另一目的是提供鉴定白菜型油菜有限花序基因brdt1的试剂盒，该试剂盒中的引物为所述的引物。

4、本发明的另一目的是提供所述的引物在白菜型油菜的有限花序性状鉴定、种质资源多样性分析、亲缘关系分析和构建指纹图谱，以及分子育种具有有限花序性状的白菜型油菜中的应用。

5、优选地，以待测油菜、纯合无限花序和纯合有限花序油菜材料基因组分别为模板，采用核苷酸序列如seq id no.5～6所示的引物进行pcr扩增，产物进行电泳，根据电泳条带判断：若产物仅出现和纯合无限花序油菜材料相同的电泳条带，则待测油菜为纯合无限花序油菜材料；若产物仅出现和纯合有限花序油菜材料相同的电泳条带，则待测油菜为纯合有限花序油菜材料；若产物出现和纯合无限花序油菜材料及纯合有限花序油菜材料相同的电泳条带，则待测油菜为杂合无限花序油菜材料。

6、优选地，扩增体系包含：模板、10×buffer、dntps、taq e、引物和ddh2o。

7、优选地，扩增程序为：94℃变性3min；94℃变性30s，59℃退火45s，72℃延伸45s，每次循环退火温度降低0.5℃，10个循环；94℃变性30s，54℃退火45s，72℃延伸45s，20个循环；前10个循环每循环退火温度降低0.5℃，降到54℃后，再进行后面的20个循环；72℃延伸5min；4℃保存。

8、本发明的与白菜型油菜有限花序基因brdt1紧密连锁的ssr分子标记引物及其应用，解决了传统选育有限花序品系选择效率较低的问题，具有以下优点：

9、由于有限花序性状在白菜型油菜育种中具有重要作用，本发明提供了与白菜型油菜有限花序基因brdt1紧密连锁的ssr分子标记引物，以实现辅助白菜型油菜有限花序材料的育种，加快育种速度。通过近等基因系农艺性状比较，有限花序株高比无限花序降低20cm左右，有限花序基因brdt1位点能有效降低白菜型油菜的株高，使之呈现出适合机械化生产的矮杆株型结构，为白菜型油菜株型改良提供了新途径。

技术特征：

1.与白菜型油菜有限花序基因brdt1紧密连锁的ssr分子标记引物，其特征在于，该引物的核苷酸序列如seq id no.n～n+1所示，n为1～24之间的奇数。

2.鉴定白菜型油菜有限花序基因brdt1的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中的引物为如权利要求1所述的引物。

3.如权利要求1所述的引物在白菜型油菜的有限花序性状鉴定、种质资源多样性分析、亲缘关系分析和构建指纹图谱，以及分子育种具有有限花序性状的白菜型油菜中的应用。

4.根据权利要求3中的应用，其特征在于，以待测油菜、纯合无限花序和纯合有限花序油菜材料基因组分别为模板，采用核苷酸序列如seq id no.5～6所示的引物进行pcr扩增，产物进行电泳，根据电泳条带判断：

5.根据权利要求4中的应用，其特征在于，扩增体系包含：模板、10×buffer、dntps、taqe、引物和ddh2o。

6.根据权利要求4中的应用，其特征在于，扩增程序为：94℃变性3min；

技术总结
本发明公开了一种与白菜型油菜有限花序基因Brdt1紧密连锁的SSR分子标记引物及其应用，该SSR分子标记的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.n～n+1所示，n为1～24之间的奇数。本发明提供了与白菜型油菜有限花序基因Brdt1紧密连锁的SSR分子标记，以实现辅助白菜型油菜有限花序材料的育种，加快育种速度。有限花序基因Brdt1位点能有效降低白菜型油菜的株高，使之呈现出适合机械化生产的矮杆株型结构，为白菜型油菜株型改良提供了新途径。

技术研发人员：陈翠萍,李开祥,赵志,刘洋
受保护的技术使用者：青海省农林科学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15