一种抗人CD28工程抗体及应用的制作方法

本发明属于生物医药领域，尤其是涉及一种抗人cd28工程抗体及应用。

背景技术：

1、cd28分子是由二硫键合的44 kda亚基组成的同源二聚体糖蛋白。每个cd28单体含有134个细胞外氨基酸，具有单个跨膜结构域和短细胞质尾。cd28的细胞外结构域与免疫球蛋白可变区域结构域显示其同源性。cd28分子的编码基因由四个外显子组成，每个外显子分别定义其蛋白质的功能结构域。

2、cd28蛋白的激活对细胞可以产生重要的影响。以t细胞为例，t细胞受体（tcr）活化可以诱导cd28附近局部ca2+浓度增加，ca2+直接可以促进cd28的开放和信号传导。tcr，ca2+和cd28一起形成正向反馈，显著放大t细胞信号传导，从而提高t细胞对抗原的敏感性。tcr和cd28信号的传导主要通过cd28的细胞质内41个氨基酸胞质区来发挥作用。胞质区包含富含酪氨酸为基础的活性结合域，这些结合域可以和蛋白激酶或者结合蛋白反应影响t细胞的活动。

3、t细胞表面的cd28与其天然配基b7（cd80）结合后，可发挥共刺激作用，作为第二信号介导t细胞的激活，促进t细胞的活化、增殖、抗凋亡基因的合成和促炎症反应，诱发t细胞分泌il-4、il-10等细胞因子并释放颗粒酶b。t淋巴细胞是人体攻击病原体的最主要的效应细胞，特异性t淋巴细胞的数量和活性决定人体抗病原体免疫的效果。细胞因子诱导的杀伤细胞( cytokine-induced killer cells，以下简称 cik 细胞)是一群具有多种细胞分型的t淋巴细胞，具有增殖能力高、细胞毒性强等优点，在肿瘤的生物治疗中具有极大的应用价值。cik 细胞由外周血单个核细胞经多种细胞因子如 il-2、ifn-γ等刺激而获得。目前临床研究的初步结果显示，cik 细胞对肺癌、乳腺癌、食管癌、肾癌等多种恶性肿瘤均有良好的疗效。

4、抗cd28单抗能促进cik 细胞增殖并分泌ifn-γ、tnf-α和il-2等杀伤因子，从而提高cik细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。cd28抗体在肿瘤免疫、自身免疫性疾病的及抗移植排斥反应的免疫干预中也表现出良好的应用价值。无论是抗肿瘤免疫治疗还是器官移植后免疫抑制治疗，以及机会性感染的控制，共刺激分子cd28都不失为一个有用的敏感靶点。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种抗人cd28工程抗体及应用。

2、为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

3、本发明提供了一种抗人cd28工程抗体，该工程抗体包括重链可变区与轻链可变区；

4、所述的重链可变区的互补决定区包括cdr1、cdr2与cdr3；所述的重链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示；所述的重链可变区的cdr2的氨基酸序列如seq idno.2所示；所述的重链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no.3所示；

5、所述的轻链可变区的互补决定区包括cdr1、cdr2与cdr3；所述的轻链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述的轻链可变区的cdr2的氨基酸序列如seq idno.5所示；所述的轻链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no.6所示。

6、进一步，所述的重链可变区的骨架区包括fr1、fr2、fr3和fr4；所述的重链可变区的fr1的氨基酸序列如seq id no.7所示；所述的重链可变区的fr2的氨基酸序列如seq idno.8所示；所述的重链可变区的fr3的氨基酸序列如seq id no.9所示；所述的重链可变区的fr4的氨基酸序列如seq id no.10所示；

7、所述的轻链可变区的骨架区包括fr1、fr2、fr3和fr4；所述的轻链可变区的fr1的氨基酸序列如seq id no.11所示；所述的轻链可变区的fr2的氨基酸序列如seq id no.12所示；所述的轻链可变区的fr3的氨基酸序列如seq id no.13所示；所述的轻链可变区的fr4的氨基酸序列如seq id no.14所示。

8、进一步，所述的工程抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.15所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.16所示。

9、本发明还提供了一种核酸分子，该核酸分子编码所述的抗人cd28工程抗体。

10、进一步，所述的核酸分子编码所述的抗人cd28工程抗体的重链可变区的核苷酸序列如seq id no:17所示，编码轻链可变区的核苷酸序列如seq id no:18所示。

11、本发明还提供了一种表达载体，其特征在于：该表达载体包含所述的核酸分子。

12、本发明还提供了一种抗人cd28工程抗体的应用，所述的抗人cd28工程抗体在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

13、进一步，所述的肿瘤为肺癌、乳腺癌、食管癌或肾癌中的至少一种。

14、本发明还提供了一种免疫检测试剂盒，该试剂盒含有所述的抗人cd28工程抗体和/或所述的表达载体。

15、相对于现有技术，本发明具有以下优势：

16、本发明所述的抗人cd28工程抗体通过促进cik 细胞的增殖来杀伤肿瘤细胞，可用于治疗肺癌、乳腺癌、食管癌、肾癌。

17、本发明所述的抗人cd28单克隆抗体的轻链可变区基因和重链可变区基因及其表达产物，两者重组后表达产生的抗cd28抗体，能够特异性结合人cd28分子。

技术特征：

1.一种抗人cd28工程抗体，其特征在于：该工程抗体包括重链可变区与轻链可变区；

2.根据权利要求1所述的抗人cd28工程抗体，其特征在于：所述的重链可变区的骨架区包括fr1、fr2、fr3和fr4；所述的重链可变区的fr1的氨基酸序列如seq id no.7所示；所述的重链可变区的fr2的氨基酸序列如seq id no.8所示；所述的重链可变区的fr3的氨基酸序列如seq id no.9所示；所述的重链可变区的fr4的氨基酸序列如seq id no.10所示；

3.根据权利要求1所述的抗人cd28工程抗体，其特征在于：所述的工程抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.15所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.16所示。

4.一种核酸分子，其特征在于：该核酸分子编码权利要求1-3中任一项所述的抗人cd28工程抗体。

5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于：所述的核酸分子编码所述的抗人cd28工程抗体的重链可变区的核苷酸序列如seq id no:17所示，编码轻链可变区的核苷酸序列如seq id no:18所示。

6.一种表达载体，其特征在于：该表达载体包含权利要求4或5所述的核酸分子。

7.权利要求1-3中任一项所述的抗人cd28工程抗体的应用，其特征在于：所述的抗人cd28工程抗体在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的抗人cd28工程抗体的应用，其特征在于：所述的肿瘤为肺癌、乳腺癌、食管癌或肾癌中的至少一种。

9.一种免疫检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有权利要求1-3中任一项所述的抗人cd28工程抗体和/或权利要求6所述的表达载体。

技术总结
本发明提供了一种抗人CD28工程抗体及应用，重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明所述的抗人CD28单克隆抗体的轻链可变区基因和重链可变区基因及其表达产物，两者重组后表达产生的抗CD28抗体，能够特异性结合人CD28分子。

技术研发人员：李原,郭蕤,崔东旭,李子旸,李靖宇,郝军凤,刘红芹,屈浩,廖晓龙,刘照关
受保护的技术使用者：苏州为度生物技术有限公司天津分公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15