本发明涉及生物工程，具体涉及一种表达毒素和抗毒素的重组质粒及其构建方法和应用。
背景技术：
1、嗜盐微生物(halophiles)是一类生长于高盐环境下的微生物，广泛分布在盐湖、盐矿、盐碱土壤以及高盐制品中。长期以来，嗜盐微生物以其独特的适应机理吸引着人们的研究兴趣。嗜盐微生物生活的环境具有较高的盐浓度，其他微生物很难在这些环境下存活及生长，如果将其应用于pha的发酵生产可以避免大部分杂菌的污染，减少生产的环节，具有较强的成本优势。嗜盐微生物在高盐污水处理和生态修复上也拥有巨大优势，由于嗜盐微生物拥有丰富的代谢资源库，在含有各类营养源的高盐污水及高盐土壤中均可找到嗜盐微生物的存在。一些嗜盐微生物对碱性环境及重金属离子的耐受性较强，在高盐有机废水及油田土壤等富含重金属离子的环境下中具有较强的生物修复潜力。嗜盐微生物正逐渐成为生物可降解材料、生物燃料、酶制剂、制药领域等新型生物化工产业以及污染治理和污水处理等领域的新兴力量。
2、以盐单胞菌为代表的嗜盐微生物作为生产可降解生物塑料pha及其他高附加值化学品的平台，也具有极高的应用潜力。研究者们开发了多种相应的基因组编辑技术以实现对工程菌的代谢调控，然而随着改造需求日益提升，多次编辑常导致基因组稳定性下降，进而影响工程菌的生长和生产，编辑过程繁琐、周期长成本高等问题也日益凸显。
3、因此，需要开发一种适用于嗜盐微生物的染色体外表达系统，可以稳定且高效表达目的基因。
技术实现思路
1、本技术的发明人通过多年对嗜盐微生物基因组的研究，阐明了来源于嗜盐微生物的毒素-抗毒素是维持内源质粒稳定传代的关键元件，并构建了表达毒素-抗毒素的重组稳定质粒，用于携带目的基因，可以在嗜盐微生物中稳定、高效表达。
2、第一方面，提供了一种重组质粒，所述的重组质粒表达毒素和抗毒素，所述的毒素和抗毒素来源于嗜盐微生物。
3、优选的，毒素和抗毒素来源于嗜盐微生物。优选的，所述的毒素和抗毒素来源于相同或不同的嗜盐微生物。
4、优选的，所述的毒素和抗毒素来源于嗜盐微生物的内源质粒。
5、优选的，所述的重组质粒还包括表达毒素和抗毒素所需的调控元件。例如启动子，所述的启动子可以为现有技术公开的任一启动子，只要可以调控毒素和抗毒素表达即可。优选可以为组成型启动子或诱导性启动子。
6、在本发明的一个具体实施方式中，可以为来源于嗜盐微生物的启动子。
7、在一个具体实施方式中，所述的启动子为hbpb/hbpc启动子。
8、所述的毒素与抗毒素在同一操纵子上，受同一启动子调控。
9、优选的，所述的调控元件还包括rbs序列。
10、优选的，所述的启动子与rbs序列调控毒素与抗毒素基因表达的起始和表达的程度，进一步优选的，所述的启动子为毒素与抗毒素共用的启动子。
11、优选的，所述的启动子及rbs序列包含seq id no：5、11、30或35或者包含与seq idno：5、11、30或35具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的核苷酸序列。
12、优选的，所述的重组质粒还包括复制起始位点和/或复制起始蛋白编码序列，其中，复制起始位点和/或复制起始蛋白可以为现有技术公开的任一的复制起始位点和/或复制起始蛋白，只要保证使质粒具有一定拷贝数即可，优选高拷贝数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70以上个拷贝数。在本发明的一个具体实施方式中，所述的复制起始位点和/或复制起始蛋白来源于嗜盐微生物，优选来源于嗜盐微生物的内源质粒。
13、优选的，所述的重组质粒包括一个或两个以上复制起始位点。
14、在一个具体实施方式中，所述的复制起始位点为phbcp ori或pro1600 oriv。
15、优选的，所述的复制起始位点包含seq id no：6或12或者包含与seq id no：6或12具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的核苷酸序列。
16、优选的，所述的重组质粒包括一个或两个以上复制起始蛋白编码序列。
17、在一个具体实施方式中，所述的复制起始蛋白为repb蛋白。
18、优选的，repb基因包含seq id no：7或者包含与seq id no：7具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的核苷酸序列。
19、在一个具体实施方式中，所述的复制起始蛋白为pro1600 rep蛋白。
20、优选的，pro1600rep基因包含seq id no：13或者包含与seq id no：13具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的核苷酸序列。
21、优选的，复制起始蛋白pro1600 rep包含seq id no：24或者包含与seq id no：24具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的氨基酸序列。
22、优选的，所述的复制起始位点和复制起始蛋白编码序列为质粒在嗜盐微生物中留存与复制的必需元件。
23、优选的，所述的重组质粒包含一个或两个以上的毒素和抗毒素表达系统，所述的毒素和抗毒素表达系统包括毒素编码基因、抗毒素编码基因以及表达毒素和抗毒素所需的调控元件。
24、优选的，所述的重组质粒可以表达抗性蛋白也可以不表达抗性蛋白。进一步优选的，所述的抗性蛋白包括氨苄青霉素、新霉素、氯霉素、四环素、卡那霉素、安普霉素或壮观霉素中的一种或两种以上。
25、优选的，所述的重组质粒为接合性质粒或非接合性质粒。
26、优选的，所述的重组质粒还包括用于接合转化所需元件，例如复制起始位点和质粒转移的起始位点。对于接合转化所需元件可以为现有技术公开的任一元件，只要保证可以进行接合转化即可。所述的接合转化所需元件可以保证在大肠杆菌中使用。优选复制和/或转移。
27、在本发明的一个具体实施方式中，接合转化所需元件来源于大肠杆菌。
28、优选的，所述的接合转化元件选自puc质粒、pet质粒、pgex质粒、pro质粒的复制起始位点和质粒转移的起始位点。
29、在本发明的一个具体实施方式中，所述的接合转化所需元件来自puc系列质粒的优化的复制起始位点pmb1 ori。
30、在本发明的一个具体实施方式中，所述的接合转化所需元件包括复制起始位点pro1600 oriⅴ，优选的，所述的复制起始位点pro1600 oriⅴ如seq id no：12所示。
31、优选的，所述的嗜盐微生物为细菌。
32、优选的，所述的嗜盐微生物包括但不限于色盐杆菌属(chromohalobacter)、盐单胞菌属(halomonas)、盐弧菌属(halovibrio)、弧菌属(vibrio)、科贝特氏菌属(cobetia)、克锡勒氏菌属(kushneria)、salicola、halotalea或carnimonas。
33、优选的，所述的色盐杆菌属包括但不限于chromohalobacter marismortui、chromohalobacter salexigens或chromohalobacter beijerinckii；所述的盐单胞菌属包括但不限于halomonas bluephagenesis、halomonas campaniensis、halomonasdesiderata、halomonas venusta或halomonas alkaliantarctica；所述的盐弧菌属包括但不限于halovibrio denitrificans、halovibrio mesolongii或halovibrio variabilis；所述的弧菌属包括但不限于vibrio natriegens；所述的salicola属包括但不限于salicola marasensis或salicola salis；所述的科贝特氏菌属包括但不限于cobetiamarina或cobetia crustatorum；所述的克锡勒氏菌属包括但不限于kushneria aurantia或kushneria indalinina；所述的halotalea属包括但不限于halotalea alkalilenta；所述的carnimonas属包括但不限于carnimonas nigrificans。
34、优选的，所述的嗜盐微生物包括轻度嗜盐菌、中度嗜盐菌或极端嗜盐菌。进一步优选为中度嗜盐菌。
35、优选的，所述的嗜盐微生物为在含0.5mol/l-2.5mol/l盐浓度的条件下可以生长，优选稳定生长或生长最好的嗜盐微生物。
36、所述的抗毒素的氨基酸序列包含seq id no：3、28或33或者包含与seq id no：3、28或33具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的氨基酸序列。优选的，所述的抗毒素基因为hbpb。
37、所述的毒素的氨基酸序列包含seq id no：4、29或34或者包含与seq id no：4、29或34具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的氨基酸序列。优选的，所述的毒素基因为hbpc。
38、在一个具体实施方式中，所述的hbpb基因的序列包含seq id no：1、26或31或者包含与seq id no：1、26或31具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的核苷酸序列。
39、在一个具体实施方式中，所述的hbpc基因的序列包含seq id no：2、27或32或者包含与seq id no：2、27或32具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的核苷酸序列。
40、优选的，所述的重组质粒上还包括目的基因，进一步优选还包括目的基因进行复制、转录和/或表达所需的调控元件和/或调控蛋白，例如启动子、终止子和rbs序列等。
41、优选的，所述的重组质粒包括毒素和抗毒素表达系统、目的基因表达系统和辅助序列。
42、优选的，所述的重组质粒包括毒素和抗毒素表达系统、复制起始位点、复制起始蛋白编码序列、目的基因表达系统和辅助序列。
43、所述的目的基因表达系统包括目的基因以及目的基因进行复制、转录和/或表达所需的调控元件和/或调控蛋白。
44、所述的毒素和抗毒素表达系统为包括毒素和抗毒素以及表达毒素和抗毒素所需的调控元件的系统。
45、在本发明的一个具体实施方式中，所述的重组质粒由毒素和抗毒素表达系统和目的基因表达系统组成。
46、在本发明的一个具体实施方式中，所述的重组质粒由毒素和抗毒素表达系统、复制起始位点、复制起始蛋白编码序列和目的基因表达系统组成。
47、在本发明的一个具体实施方式中，所述的重组质粒由毒素和抗毒素表达系统、目的基因表达系统和辅助序列组成。
48、在本发明的一个具体实施方式中，所述的重组质粒由毒素和抗毒素表达系统、复制起始位点、复制起始蛋白编码序列、目的基因表达系统和辅助序列组成。
49、所述的辅助序列可以为保证或提高质粒的自我复制功能和/或表达功能的元件，或者，所述的辅助序列可以为连接各元件所需的位点。
50、例如酶切位点；筛选或标记基因；促进目的基因复制、转录和表达的序列；促进毒素和/或抗毒素复制、转录和表达的序列；有助于质粒稳定的序列；间隔序列；连接序列；调控蛋白；多克隆位点等等。
51、优选的，所述的重组质粒为线型质粒或环状质粒。
52、优选的，所述的重组质粒为dna或rna。
53、在一个具体实施方式中，所述的重组质粒为环状质粒，所述的重组质粒按照顺时针方向包括毒素和抗毒素表达系统、复制起始蛋白编码序列和复制起始位点、目的基因表达系统。
54、在一个具体实施方式中，所述的重组质粒为环状质粒，所述的重组质粒按照顺时针方向包括毒素和抗毒素表达系统、复制起始蛋白编码序列和复制起始位点、目的基因表达系统、用于接合转化的起始位点、质粒转移的起始位点。
55、在一个具体实施方式中，所述的重组质粒为环状质粒，所述的重组质粒按照顺时针方向包括：毒素与抗毒素共用的启动子、抗毒素编码序列、毒素编码序列、复制起始蛋白编码序列和复制起始位点、目的基因及其调控元件、用于接合转化的起始位点和质粒转移的起始位点。
56、第二方面，提供了一种毒素-抗毒素系统，所述的毒素-抗毒素系统来源于嗜盐微生物。
57、优选的，所述的毒素和抗毒素来源于相同或不同的嗜盐微生物。
58、优选的，所述的抗毒素的氨基酸序列包含seq id no：3、28或33或者包含与seq idno：3、28或33具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的氨基酸序列。优选的，所述的抗毒素基因为hbpb。
59、优选的，所述的毒素的氨基酸序列包含seq id no：4、29或34或者包含与seq idno：4、29或34具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的氨基酸序列。优选的，所述的毒素基因为hbpc。
60、在一个具体实施方式中，所述的hbpb基因的序列包含seq id no：1、26或31或者包含与seq id no：1、26或31具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的核苷酸序列。
61、在一个具体实施方式中，所述的hbpc基因的序列包含seq id no：2、27或32或者包含与seq id no：2、27或32具有80％以上同源性且具有相同或相似的活性的核苷酸序列。
62、优选的，所述的嗜盐微生物为细菌。
63、优选的，所述的嗜盐微生物包括但不限于色盐杆菌属(chromohalobacter)、盐单胞菌属(halomonas)、盐弧菌属(halovibrio)、弧菌属(vibrio)、科贝特氏菌属(cobetia)、克锡勒氏菌属(kushneria)、salicola、halotalea或carnimonas。
64、优选的，所述的色盐杆菌属包括但不限于chromohalobacter marismortui、chromohalobacter salexigens或chromohalobacter beijerinckii；所述的盐单胞菌属包括但不限于halomonas bluephagenesis、halomonas campaniensis、halomonasdesiderata、halomonas venusta或halomonas alkaliantarctica；所述的盐弧菌属包括但不限于halovibrio denitrificans、halovibrio mesolongii或halovibrio variabilis；所述的弧菌属包括但不限于vibrio natriegens；所述的salicola属包括但不限于salicola marasensis或salicola salis；所述的科贝特氏菌属包括但不限于cobetiamarina或cobetia crustatorum；所述的克锡勒氏菌属包括但不限于kushneria aurantia或kushneria indalinina；所述的halotalea属包括但不限于halotalea alkalilenta；所述的carnimonas属包括但不限于carnimonas nigrificans。
65、优选的，所述的嗜盐微生物包括轻度嗜盐菌、中度嗜盐菌或极端嗜盐菌。进一步优选为中度嗜盐菌。
66、优选的，所述的嗜盐微生物为在含0.5mol/l-2.5mol/l盐浓度的条件下可以生长，优选稳定生长或生长最好的嗜盐微生物。
67、所述的毒素与抗毒素在同一操纵子上，受同一启动子调控。
68、优选的，在毒素-抗毒素系统中hbpc对细胞有致死毒性，hbpb可以抑制hbpc的毒性，保护细胞维持正常生长，毒素-抗毒素系统可以维持重组质粒的稳定性。
69、第三方面，提供了一种毒素-抗毒素系统在制备载体骨架、重组质粒和/或在维持嗜盐微生物中重组质粒稳定中的应用。
70、其中，毒素和抗毒素来源于嗜盐微生物。优选的，所述的毒素和抗毒素来源于相同或不同的嗜盐微生物。
71、第四方面，提供一种编码上述重组质粒或上述毒素-抗毒素系统的核酸。
72、第五方面，提供一种上述重组质粒的构建方法，所述的构建方法包括将毒素和抗毒素表达系统和辅助序列连接获得。
73、优选还包括连接目的基因表达系统。
74、优选包括复制起始位点、复制起始蛋白编码序列连接上的步骤。
75、优选还包括将抗性蛋白表达系统连接上的步骤。
76、优选的，所述的抗性蛋白表达系统包括编码抗性蛋白的基因、编码抗性蛋白的基因进行复制、转录和/或表达所需的调控元件和/或调控蛋白。
77、优选的，所述的调控元件包括调控表达抗性蛋白的启动子。
78、优选的，所述的抗性蛋白包括氨苄青霉素、新霉素、氯霉素、四环素、卡那霉素、安普霉素或壮观霉素。所述的抗性蛋白仅用于质粒筛选，不提供基因表达的选择压力。
79、第六方面，提供了一种重组质粒的构建方法，包括将毒素和抗毒素表达系统连接至传统质粒上。
80、其中，所述的传统质粒为满足在生物体中复制、表达目的基因的质粒，例如puc质粒、pet质粒、pgex质粒、pro质粒。
81、第七方面，提供了一种载体骨架，所述的载体骨架包括毒素和抗毒素表达系统。
82、所述的毒素和抗毒素表达系统包括启动子、毒素编码基因和抗毒素编码基因。其中，所述的毒素与抗毒素在同一操纵子上，受同一启动子调控。
83、所述的启动子可以为现有技术公开的任一启动子，只要可以调控毒素和抗毒素表达即可。优选可以为组成型启动子或诱导性启动子。
84、在本发明的一个具体实施方式中，可以为来源于嗜盐微生物的启动子。
85、在一个具体实施方式中，所述的启动子为hbpb/hbpc启动子。
86、优选还包括复制起始位点和/或复制起始蛋白编码序列，其中，复制起始位点和/或复制起始蛋白可以为现有技术公开的任一的复制起始位点和/或复制起始蛋白，只要保证使质粒具有一定拷贝数即可，优选高拷贝数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70以上个拷贝数。在本发明的一个具体实施方式中，所述的复制起始位点和/或复制起始蛋白来源于嗜盐微生物，优选来源于嗜盐微生物的内源质粒。
87、优选还包括接合转化所需元件。
88、优选还包括辅助序列。
89、第八方面，提供了一种目的基因的表达方法，所述的表达方法包括使用上述的重组质粒。
90、优选的，所述的表达方法包括：
91、1)在微生物中敲除或敲低内源质粒，或使得内源质粒不具有功能；
92、2)将重组质粒导入1)中获得的微生物并进行培养。
93、优选的，所述的敲除或敲低方法包括在微生物中过表达hbpb的同时敲除或敲低hbpc。
94、优选的，步骤1)中获得的微生物不包含内源质粒及敲除或敲低过程中可能引入的质粒。
95、优选的，所述的导入方法包括化学转化、电穿孔转化以及接合转化法。
96、在一个具体实施方式中，所述的导入方法为接合转化法。
97、优选的，所述的嗜盐微生物为细菌。
98、优选的，所述的嗜盐微生物包括但不限于色盐杆菌属(chromohalobacter)、盐单胞菌属(halomonas)、盐弧菌属(halovibrio)、弧菌属(vibrio)、科贝特氏菌属(cobetia)、克锡勒氏菌属(kushneria)、salicola、halotalea或carnimonas。
99、优选的，所述的色盐杆菌属包括但不限于chromohalobacter marismortui、chromohalobacter salexigens或chromohalobacter beijerinckii；所述的盐单胞菌属包括但不限于halomonas bluephagenesis、halomonas campaniensis、halomonasdesiderata、halomonas venusta或halomonas alkaliantarctica；所述的盐弧菌属包括但不限于halovibrio denitrificans、halovibrio mesolongii或halovibrio variabilis；所述的弧菌属包括但不限于vibrio natriegens；所述的salicola属包括但不限于salicola marasensis或salicola salis；所述的科贝特氏菌属包括但不限于cobetiamarina或cobetia crustatorum；所述的克锡勒氏菌属包括但不限于kushneria aurantia或kushneria indalinina；所述的halotalea属包括但不限于halotalea alkalilenta；所述的carnimonas属包括但不限于carnimonas nigrificans。
100、优选的，所述的嗜盐微生物包括轻度嗜盐菌、中度嗜盐菌或极端嗜盐菌。进一步优选为中度嗜盐菌。
101、优选的，所述的嗜盐微生物为在含0.5mol/l-2.5mol/l盐浓度的条件下可以生长，优选稳定生长或生长最好的嗜盐微生物。
102、优选的，所述的表达方法包括加入抗生素或不加入抗生素等选择压力。
103、第八方面，提供了一种工程菌，所述的工程菌包含上述的重组质粒、上述的毒素-抗毒素系统或上述的核酸。
104、优选的，所述的工程菌中敲除或敲低内源质粒，或使得内源质粒不具有功能。
105、优选的，所述的敲除或敲低方法包括过表达hbpb的同时敲除或敲低hbpc。
106、优选的，所述的工程菌包括嗜盐微生物；
107、优选的，所述的嗜盐微生物为细菌。
108、优选的，所述的嗜盐微生物包括但不限于色盐杆菌属(chromohalobacter)、盐单胞菌属(halomonas)、盐弧菌属(halovibrio)、弧菌属(vibrio)、科贝特氏菌属(cobetia)、克锡勒氏菌属(kushneria)、salicola、halotalea或carnimonas。
109、优选的，所述的色盐杆菌属包括但不限于chromohalobacter marismortui、chromohalobacter salexigens或chromohalobacter beijerinckii；所述的盐单胞菌属包括但不限于halomonas bluephagenesis、halomonas campaniensis、halomonasdesiderata、halomonas venusta或halomonas alkaliantarctica；所述的盐弧菌属包括但不限于halovibrio denitrificans、halovibrio mesolongii或halovibrio variabilis；所述的弧菌属包括但不限于vibrio natriegens；所述的salicola属包括但不限于salicola marasensis或salicola salis；所述的科贝特氏菌属包括但不限于cobetiamarina或cobetia crustatorum；所述的克锡勒氏菌属包括但不限于kushneria aurantia或kushneria indalinina；所述的halotalea属包括但不限于halotalea alkalilenta；所述的carnimonas属包括但不限于carnimonas nigrificans。
110、优选的，所述的嗜盐微生物包括轻度嗜盐菌、中度嗜盐菌或极端嗜盐菌。进一步优选为中度嗜盐菌。
111、优选的，所述的嗜盐微生物为在含0.5mol/l-2.5mol/l盐浓度的条件下可以生长，优选稳定生长或生长最好的嗜盐微生物。
112、第九方面，提供一种上述工程菌的制备方法，所述的制备方法包括将重组质粒导入工程菌中。
113、优选的，所述的导入为化学转化、电穿孔转化或接合转化。
114、第十方面，提供一种上述重组质粒、上述载体骨架、上述毒素-抗毒素系统、上述核酸或上述工程菌在基因编辑或生物合成中的应用。
115、所述的基因编辑为嗜盐微生物基因编辑。
116、优选的，所述生物合成的产物包含但不限于pha、四氢嘧啶、氨基酸、肌醇、1,3-丙二醇、3-羟基丙酸、1，5-戊二胺、5-氨基乙酰丙酸、脂肪酶、淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、纤维素酶、酯酶、葡聚糖酶、果胶酶、磷酯酶、明胶酶、核酸酶、微管蛋白ftsz、细胞骨架蛋白mreb、细胞分裂调控因子mincd、乳糖操纵子遏制蛋白laci、四环素操纵子阻遏蛋白tetr、crispri/crispra中使用的sgrna或番茄红素中的一种或两种以上。
117、优选的，所述的pha选自3-羟基丁酸均聚物phb，3-羟基丁酸和4-羟基丁酸二元共聚物p3hb4hb，3-羟基丁酸、4-羟基丁酸和3-羟基戊酸三元共聚物phbv4hb，3-羟基丁酸和3-羟基己酸二元共聚物phbhhx，3-羟基丙酸的均聚物或共聚物，所述的3-羟基丙酸的均聚物为p3hp，所述的3-羟基丙酸的共聚物为p(3hb-co-3hp)或phbhp。
118、第十一方面，提供了一种发酵方法，所述的发酵方法包括发酵培养上述工程菌。
119、第十二方面，提供了一种产物生物合成的方法，所述的方法包括培养上述工程菌。
120、所述培养不加入抗生素。
121、通过上述技术方案，本发明具有如下所述的优点：
122、本成果通过对嗜盐微生物内源毒素-抗毒素系统的发现与机制研究，搭建了适用于嗜盐微生物的染色体外表达系统，在无需外加抗生素等选择压力的条件下实现了稳定且高效的外源目的基因表达。
123、本发明所述的“包含”或“包括”为开放式写法，当用于描述蛋白质或核酸的序列时，所述蛋白质或核酸可以是由所述序列组成，或者在所述蛋白质或核酸的一端或两端可以具有额外的氨基酸或核苷酸，但仍然具有与原序列相同或相似的活性。
124、本发明所述“同源性”，是指在使用蛋白序列或核苷酸序列的方面，本领域技术人员可以根据实际工作需要对序列进行调整，使使用序列与现有技术获得的序列相比，具有(包括但不限于)1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％，40％，41％，42％，43％，44％，45％，46％，47％，48％，49％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，70％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.1％，99.2％，99.3％，99.4％，99.5％，99.6％，99.7％，99.8％，99.9％的同一性。
125、本发明所述的“嗜盐微生物”是生长的最适盐浓度大于0.2mol/l的微生物。根据微生物对盐的需要可分为非嗜盐微生物、弱嗜盐微生物、中度嗜盐微生物、极端嗜盐微生物。
126、本发明所述的“轻度嗜盐菌”为在保证菌种的除盐浓度外的其他培养条件一致的情况下，在含0.2mol/l-0.5mol/l盐浓度的条件下可以生长，优选稳定生长或生长最好；
127、“中度嗜盐菌”为在保证菌种的除盐浓度外的其他培养条件一致的情况下，在含0.5mol/l-2.5mol/l盐浓度的条件下可以生长，优选稳定生长或生长最好；
128、“极端嗜盐菌”为在保证菌种的除盐浓度外的其他培养条件一致的情况下，在含2.5mol/l-5.2mol/l盐浓度的条件下可以生长，优选稳定生长或生长最好。
129、其中，所述的“盐”可以为现有技术常见的用于微生物培养的盐，所述的盐为无机盐，所述的无机盐用于维持所述微生物所需的渗透压。例如钾盐和/或钠盐等。所述钾盐包括但不限于氯化钾、硫酸钾、磷酸钾、柠檬酸钾、乙酸钾、葡萄糖酸钾、硝酸钾、碳酸钾、碳酸氢钾或磷酸二氢钾中的一种或两种以上。所述的钠盐包括但不限于氯化钠、硫酸钠、磷酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、葡萄糖酸钠、硝酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠或磷酸二氢中的一种或两种以上。