一种罗汉果籽提取物的制备方法与流程

本发明属于植物提取物领域，特别涉及一种罗汉果籽提取物的制备方法。

背景技术：

1、罗汉果是葫芦科(cucurbitaceae)植物罗汉果(momordica grosvenori swingle)的成熟果实，是一种药食同源的植物，其中研究最多的是其甜苷类成分，提取完甜苷的废渣通常被用作饲料、肥料等低价值用途中，没有进行深加工。干果蛋白质含量为8.67％～13.3％。罗汉果果实中籽数量较大，每个果实中约有种籽50颗，种籽由种壳和种仁组成，种壳坚硬，约占种籽总重量的70％，有研究表明种籽中含油量为7％，种仁中含有约48％的油脂，油脂中含有大量的不饱和脂肪酸，并含有大量的角鲨烯，是一种应用前景较好的植物油脂，罗汉果籽中蛋白含量可达13％，其蛋白的组成以清蛋白、醇溶蛋白及谷蛋白为主。

2、目前油脂的制备方法主要油机械法、浸出法、水代法、酶法、超临界萃取法等，酶法由于其条件温和，在提高油脂品质、提取率及获取高质量副产品等方面存在一定的优势。但是由于酶法的应用限制因素较多，比如不同植物所用的酶及参数差异较大，需根据具体的原料优化参数，水相酶解有机溶剂萃取法在罗汉果籽油的提取上已有研究，但是水相酶解水提油法在罗汉果籽中还未见报道。制备植物蛋白的方法有很多种，常见的方法主要有酶提取法、盐溶剂提取法、碱溶酸沉法、有机溶剂提取法、萃取法、超声波提取法等。其中碱溶酸沉的方法是提取植物蛋白时最常使用的方法。此方法的优点是植物蛋白的提取率和蛋白纯度都较高，且操作简单，成本较低，膜分离法在蛋白质制备工艺中也越来越常见。

3、相关技术中公开了一种从罗汉果提取渣中分离提纯罗汉果籽油的工艺，具体公开了采用冷榨的方式制备，分别通过冷榨得到粗油后，依次经脱胶除酸、脱色等步骤后得到罗汉果籽油，该方法虽然使用冷榨法可以保证油的品质，但是由于罗汉果籽中油脂含量较低，籽壳占罗汉果籽重量的70％，因此该法收率低，对残渣的利用率较低。

4、相关技术中还公开了一种从罗汉果籽中提取罗汉果籽油的方法，该法使用分离出的种仁进行提取，采用酶解-溶剂提取-大孔树脂和活性炭复合脱色-脱臭塔脱臭相结合的工艺制备罗汉果籽油，该方法工艺复杂，使用有机溶剂提取容易造成产品中有机溶剂残留影响产品品质，而且成本较高，不易于工艺化生产。

5、相关技术中还公开了从罗汉果提取渣中提取罗汉果籽油及β-谷甾醇的方法，具体为采用有机溶剂回流提取-上柱除杂-脱色-超滤浓缩得到罗汉果籽油精品，该法采用水-有机溶剂同时提取，对设备要求严格，操作难度大，很难工业化放大生产。

6、相关技术中还公开了一种罗汉果籽生物油的制备方法，采用高压反应釜水提后有机溶剂萃取制备而成，该方法需要使用特定的容器，加热介质为熔融盐，设备要求较高，成本较高。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种罗汉果渣提取物的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题和缺陷的至少一个方面。

2、具体如下，本发明公开了一种罗汉果籽提取物的制备方法，包括以下步骤：

3、s1、将罗汉果籽、第一乙醇水溶液和酶混合后提取，提取完成后灭酶；固液分离，收集第一固相和第一液相；

4、将第一液相浓缩后离心，制得第一油层、乳化层、第一水相和第二固相；

5、s2、将步骤s1制得的乳化层进行破乳处理，制得第二油层；合并第一油层和第二油层，制得罗汉果籽油；

6、s3、将第一固相、碱性蛋白酶和水混合后提取，提取完成后灭酶；固液分离；收集第二水相和第三固相；

7、将第一水相和第二水相合并后依次通过微滤膜和超滤膜；收集超滤膜截留液干燥，制得第一蛋白质；

8、s4、将第二固相与第二乙醇水溶液混合，固液分离，收集第二液相；

9、将第二液相浓缩干燥制得第二蛋白质；

10、步骤s1中所述酶包括纤维素酶或半纤维素酶中的至少一种；

11、所述第一乙醇水溶液中乙醇的体积分数为10％～20％。

12、根据本发明制备方法技术方案中的一种技术方案，至少具备如下有益效果：

13、本发明采用优化后的水相酶解提取油脂，两步酶解法提取蛋白质，得到优质的罗汉果籽油和罗汉果籽蛋白。水提油工艺的优势是所用温度较低，油料中的蛋白质变性少，该工艺可以有效利用罗汉果提取渣来制备高品质的罗汉果油和罗汉果籽蛋白。

14、本发明以罗汉果提取渣分离出罗汉果籽为原料，采用改进后的水相酶解水提油技术与两步酶解法同时制备罗汉果籽油和罗汉果籽蛋白，产品安全性高，不存在溶剂残留问题。

15、本发明使用改进后的水相酶解水提油技术提取罗汉果籽中的油脂类成分，同时通过对第一乙醇水溶液的可以减少乳化液形成的体积，减少去乳化的次数，不仅提高罗汉果籽油的收率和回收率，还能提高罗汉果籽油的品质(减少反复加热调节ph去乳化的次数)。

16、本发明使用两步酶法提取罗汉果籽中的蛋白质，可以提高蛋白质的提取率，结合超滤膜分离，可以制备高纯度的醇溶蛋白及含有其他蛋白的罗汉果籽蛋白质粉，避免传统的碱提酸沉法消耗大量的酸碱所带来的溶剂处理问题。

17、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中罗汉果籽从罗汉果渣分离得到。

18、根据本发明的一些实施方式，所述罗汉果渣在50℃～60℃烘干后，分离出罗汉果籽。

19、罗汉果提取渣风干的温度为50℃～60℃；温度越高对其中不饱和脂肪酸的破坏越大，碘值低。

20、根据本发明的一些实施方式，所述罗汉果籽粉碎至30目～60目。

21、根据本发明的一些实施方式，所述

22、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述酶还包括果胶酶、木聚糖酶和淀粉酶中的至少一种。

23、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述提取的温度为45℃～55℃。

24、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述酶与所述罗汉果籽的质量比为1～2.5:100。

25、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述提取的时间为3h～6h。

26、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述提取过程中加入ph调节剂，ph调节剂包括柠檬酸或碳酸氢盐中的至少一种。

27、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中选用的酶由第一酶组和第二酶组组成。

28、根据本发明的一些实施方式，所述第一酶组包括纤维素酶和半纤维素酶中的至少一种。

29、根据本发明的一些实施方式，所述第二酶组包括果胶酶、木聚糖酶和淀粉酶中的至少一种。

30、根据本发明的一些实施方式，所述第一酶组和第二酶组的质量比为2～2.5:3～3.5。

31、根据本发明的一些实施方式，所述罗汉果籽粉与所述第一乙醇水溶液的质量体积比为1g：5ml～8ml。

32、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述提取的振荡频率为100r/min～150r/min。

33、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述灭酶的温度为80℃～90℃。

34、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述灭酶的时间为10min～20min。

35、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述离心的转速为3000r/min～6000r/min。

36、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述离心的时间为10min～30min。

37、根据本发明的一些实施方式，步骤s2中所述破乳处理加入体积分数为90％～95％的乙醇水溶液。

38、根据本发明的一些实施方式，所述乳化层与所述体积分数为90％～95％的乙醇水溶液的体积比为1000：1～3。

39、根据本发明的一些实施方式，步骤s3中所述碱性蛋白酶与所述罗汉果籽的质量比为2～5:1000。

40、根据本发明的一些实施方式，步骤s3中所述提取过程中加入ph调节剂，ph调节剂包括碳酸钠或碳酸钾中的至少一种。

41、根据本发明的一些实施方式，步骤s3中所述第一固相和水的质量比为2g～4g；1l。

42、根据本发明的一些实施方式，步骤s3中所述提取的振荡频率为100r/min～150r/min。

43、根据本发明的一些实施方式，步骤s3中所述提取的温度为40℃～55℃。

44、根据本发明的一些实施方式，步骤s3中所述提取的ph为9～10。

45、根据本发明的一些实施方式，所述微滤膜的孔径为1μm～10μm。

46、根据本发明的一些实施方式，所述超滤膜的截留分子量为20kd～65kd。

47、根据本发明的一些实施方式，所述第二固相和第二乙醇水溶液的质量体积比为1g：3ml～5ml。

48、根据本发明的一些实施方式，所述第二乙醇水溶液中乙醇的体积分数为70％～85％。