嵌合抗原受体及其应用的制作方法

本发明涉及生物，具体地，本发明涉及一种嵌合抗原受体及其应用，更具体地，本发明涉及一种可同时识别两种抗原配体的嵌合抗原受体及对应核酸构建体、表达载体、转基因免疫细胞、药物组合物及其用途。

背景技术：

1、嵌合抗原受体t(chimeric antigen receptor t，car-t)细胞在血液恶性肿瘤治疗中取得了令人瞩目的效果。car分子的抗原识别区通常采用来自抗体的scfv序列，该序列通常来自鼠、兔、羊驼等种属，具有较强的免疫原性。即使对其序列进行人源化改造，仍然存在一定的免疫原性，产生抗药物抗体(ada)，削弱car-t细胞在体内的持久性。近年来，有许多新技术应用于解决该问题，例如采用天然受体蛋白序列作为感受器，以降低免疫原性。

2、nkp30受体是一种天然的nk细胞活化性受体，在nk细胞上高表达，可识别b7h6分子，进而介导细胞毒性作用。b7h6是b7家族中的一员，b7h6分子通常在多种原发肿瘤细胞上高表达，包括白血病、淋巴瘤、结直肠癌、胃癌和胰腺癌等，而在正常组织细胞上几乎不表达。目前，以nkp30胞外段作为b7h6识别的感受器，以此为基础构建的car-t细胞的功能已经在研究中得到验证。

3、nkg2d受体是另一种天然的nk细胞表面受体，主要表达于nk、cd8+t、γδt、nkt以及活化巨噬细胞表面，识别由病毒感染或细胞恶性转化而表达的应激蛋白，如mhc-i类相关蛋白、mica和micb以及巨细胞病毒ul-16结合蛋白ulbp1-5。cn109400713a专利中，将nkg2d作为胞内信号传导结构域，以此为基础构建的cart细胞在血液肿瘤和实体肿瘤杀伤试验中，明显加强了car t细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，在临床应用中展现出良好的安全性和抗肿瘤活性。

4、基于以上研究和开发现状，有待于进一步研究杀伤活性高、疗效好的嵌合转换受体，以进一步提高嵌合抗原受体免疫细胞疗法的疗效。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提供了可同时识别两种抗原配体的嵌合抗原受体及对应核酸构建体、表达载体、转基因免疫细胞、药物组合物及其用途，本发明的嵌合抗原受体同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体，表达本发明嵌合抗原受体的转基因免疫细胞，可有效识别表达nkp30受体配体和/或表达nkg2d受体配体的肿瘤细胞，即对于单一表达nkp30受体配体或nkg2d受体配体或同时表达两种受体配体的肿瘤细胞均可发挥有效的杀伤作用，尤其是可有效识别丢失nkp30或nkg2d其中一种受体配体的肿瘤细胞，防止肿瘤的免疫逃逸。由此，本发明的转基因免疫细胞肿瘤细胞杀伤活性高，识别谱广，体内抑瘤活性强，细胞输注剂量低，疗效好。

2、在本发明的第一方面，本发明提出了一种嵌合抗原受体。所述嵌合抗原受体包括：

3、胞外区，所述胞外区包括第一结合片段和第二结合片段，所述第一结合片段和第二结合片段相连，所述第一结合片段为nkp30胞外段或其片段，所述第二结合片段为nkg2d胞外段或其片段；

4、跨膜区，所述跨膜区的n端与所述胞外区的c端相连；

5、胞内区，所述胞内区的n端与所述跨膜区的c端相连。

6、需要说明的是，本发明涉及的氨基酸序列均按照n端至c端的方式示出。

7、根据本发明实施例的嵌合抗原受体同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体，表达本发明嵌合抗原受体的转基因免疫细胞可有效识别表达nkp30受体配体和/或表达nkg2d受体配体的肿瘤细胞，即对于单一表达nkp30受体配体或nkg2d受体配体或同时表达两种受体配体的肿瘤细胞均可发挥有效的杀伤作用，尤其是可有效识别丢失nkp30或nkg2d其中一种受体配体的肿瘤细胞，防止肿瘤的免疫逃逸。由此，表达本发明嵌合抗原受体的转基因免疫细胞肿瘤细胞杀伤活性高，肿瘤识别谱广，体内抑瘤活性强，细胞输注剂量低，疗效好。

8、根据本发明的实施例，所述第一结合片段具有如seq id no：1所示的氨基酸序列或其保守修饰形式的氨基酸序列，所述第二结合片段具有如seq id no：3所示的氨基酸序列或其保守修饰形式的氨基酸序列。由此，本发明的嵌合抗原受体可同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体。

9、根据本发明的实施例，所述第一结合片段具有如seq id no：1所示的氨基酸序列，所述第二结合片段具有如seq id no：3所示的氨基酸序列。由此，本发明的嵌合抗原受体同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体。

10、在本文中，术语“保守修饰形式的氨基酸序列”指这样的氨基酸修饰，所述修饰不显著影响或改变包含该氨基酸序列的受体的配体结合特性，该修饰包括氨基酸置换、增加和缺失。修饰可通过例如定点诱变和pcr介导的诱变等标准技术引入本发明的受体中。保守氨基酸置换系其中的氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换的置换。在本领域中已经确定具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，具有酸性侧链的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)，具有不带电的极性侧链的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，具有非极性侧链的氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)，具有β-支化侧链的氨基酸(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、和具有芳香侧链的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。

11、根据本发明的实施例，所述第一结合片段的c端与第二结合片段的n端相连接，或者所述第一结合片段的n端与第二结合片段的c端相连接。

12、根据本发明的实施例，所述胞外区进一步包括第一连接肽，所述第一结合片段和第二结合片段通过所述第一连接肽相连。由此，进一步提高本发明嵌合抗原受体与nkp30受体配体和nkg2d受体配体的结合能力。

13、根据本发明的实施例，所述第一结合片段的c端与所述第一连接肽的n端相连接，所述第一连接肽的c端与所述第二结合片段的n端相连接；或所述第二结合片段的c端与所述第一连接肽的n端相连接，所述第一连接肽的c端与所述第一结合片段的n端相连接。由此，得到的本发明嵌合抗原受体同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体。

14、根据本发明的实施例，所述第一连接肽选自(g4s)n或氨基酸序列如seq id no：5、34～39所示的连接肽的至少之一，n为不为零的整数。

15、根据本发明的实施例，所述第一连接肽为(g4s)n，n为2～6之间的任意整数。

16、根据本发明的实施例，所述第一连接肽是(g4s)3。由此，得到与nkp30受体配体和nkg2d受体配体结合能力较佳的本发明嵌合抗原受体。

17、根据本发明的实施例，所述胞外区进一步包括铰链区。由此，进一步提高本发明嵌合抗原受体与nkp30受体配体和nkg2d受体配体的结合能力。

18、根据本发明的实施例，所述第一结合片段的c端与所述第一连接肽的n端相连接，所述第一连接肽的c端与所述第二结合片段的n端相连接，所述第二结合片段的c端与所述铰链区的n端相连；或所述第二结合片段的c端与所述第一连接肽的n端相连接，所述第一连接肽的c端与所述第一结合片段的n端相连接，所述第一结合片段的c端与所述铰链区的n端相连。由此，得到的本发明嵌合抗原受体同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体。

19、根据本发明的实施例，所述铰链区具有如seq id no：9所示的氨基酸序列或其保守修饰形式的氨基酸序列。

20、根据本发明的实施例，所述铰链区具有如seq id no：9所示的氨基酸序列。

21、根据本发明的实施例，所述胞外区进一步包括第二连接肽。

22、根据本发明的实施例，所述第一结合片段的c端与所述第一连接肽的n端相连接，所述第一连接肽的c端与所述第二结合片段的n端相连接，所述第二结合片段的c端与所述第二连接肽的n端相连，所述第二连接肽的c端与所述铰链区的n端相连；或

23、所述第二结合片段的c端与所述第一连接肽的n端相连接，所述第一连接肽的c端与所述第一结合片段的n端相连接，所述第一结合片段的c端与所述第二连接肽的n端相连，所述第二连接肽的c端与所述铰链区的n端相连。

24、由此，进一步提高本发明嵌合抗原受体与nkp30受体配体和nkg2d受体配体的结合能力。

25、根据本发明的实施例，所述第二连接肽选自(g4s)n或氨基酸序列如seq id no：5、34～39所示的连接肽的至少之一，n为不为零的整数。

26、根据本发明的实施例，所述第二连接肽的氨基酸序列如seq id no：5所示。由此，得到与nkp30受体配体和nkg2d受体配体结合能力较佳的本发明嵌合抗原受体。

27、根据本发明的实施例，所述跨膜区包括cd8a分子跨膜段或其片段。

28、根据本发明的实施例，所述cd8a分子跨膜段具有如seq id no：11所示的氨基酸序列。

29、根据本发明的实施例，所述胞内区包括共刺激结构域和胞内信号传导结构域。

30、根据本发明的实施例，所述共刺激因子结构域的c端与所述胞内信号传导结构域的n端相连。

31、根据本发明的实施例，所述共刺激结构域选自cd28分子胞内段或其片段、4-1bb分子胞内段或其片段、2b4分子胞内段或其片段、dap10分子胞内段或其片段、dap12分子胞内段或其片段、cd27分子胞内段或其片段、cd40分子胞内段或其片段、ox40分子胞内段或其片段、icos分子胞内段或其片段中的至少之一。

32、根据本发明的实施例，所述共刺激结构域为4-1bb分子胞内段或其片段。由此，可进一步增强经本发明嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞的肿瘤杀伤活性。

33、根据本发明的实施例，所述4-1bb分子胞内段或其片段具有如seq id no：13所示的氨基酸序列。

34、根据本发明的实施例，所述胞内信号传导结构域为cd3ζ分子胞内段或其片段。由此，可进一步增强经本发明嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞的肿瘤杀伤活性。

35、根据本发明的实施例，所述cd3ζ分子胞内段具有如seq id no：15所示的氨基酸序列。

36、根据本发明的实施例，所述嵌合抗原受体具有如seq id no：19或21所示的氨基酸序列。由此，经本发明嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞具有显著增强的肿瘤细胞杀伤活性高和体内抑瘤活性。

37、在本发明的第二方面，本发明提出了一种核酸构建体。所述核酸构建体包括：第一核酸分子，所述第一核酸分子编码前述的嵌合抗原受体。

38、根据本发明实施例的核酸构建体可编码同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体的前述嵌合抗原受体。

39、根据本发明的实施例，所述第一核酸分子具有如seq id no：20或22所示的核苷酸序列。由此，进一步提高本发明嵌合抗原受体在免疫细胞上的表达水平。

40、根据本发明的实施例，所述核酸构建体进一步包括第二核酸分子，所述第二核酸分子和第一核酸分子相连，所述第二核酸分子编码第一融合蛋白或第二融合蛋白，所述第一融合蛋白包括il-15、cd8a分子铰链区和cd8a分子跨膜区；所述第二融合蛋白包括il-15rα和il-15。由此，进一步促进表达前述嵌合抗原受体的免疫细胞的活化和增殖，维持免疫细胞在肿瘤局部微环境中的数量和活性，进一步提高肿瘤细胞杀伤活性和体内抑瘤活性强。

41、根据本发明的实施例，所述第一融合蛋白的所述il-15的c端与所述cd8a分子铰链区的n端相连，所述cd8a分子铰链区的c端与所述cd8a分子跨膜区的n端相连。

42、根据本发明的实施例，所述cd8a分子铰链区具有如seq id no：27所示的氨基酸序列。由此，促进第一融合蛋白在免疫细胞表面形成较佳构型。

43、根据本发明的实施例，所述cd8a分子跨膜区具有如seq id no：11所示的氨基酸序列。由此，第一融合蛋白在免疫细胞膜表达。

44、根据本发明的实施例，所述第一融合蛋白具有如seq id no：28所示的氨基酸序列。由此，得到在同时表达前述嵌合抗原受体和第一融合蛋白的免疫细胞。

45、根据本发明的实施例，所述第二核酸分子具有如seq id no：29所示的核苷酸序列。由此，进一步提高本发明嵌合抗原受体和第一融合蛋白在免疫细胞上的表达水平。

46、根据本发明的实施例，所述第二融合蛋白的il-15rα的c端与所述il-15的n端相连接，或者所述il-15rα的n端与所述il-15的c端相连接。

47、在本文中，术语“第二融合蛋白”等同于“mbil15rf”、“超级il15”，指il-15rα和il-15的融合蛋白。

48、根据本发明的实施例，所述第二融合蛋白进一步包括第三连接肽；所述il-15rα的c端与所述第三连接肽的n端相连接，所述第三连接肽的c端与所述il-15的n端相连接；或所述il-15的c端与所述第三连接肽的n端相连接，所述第三连接肽的c端与所述il-15rα的n端相连接。由此，得到细胞膜表达的第二融合蛋白。

49、根据本发明的实施例，所述第三连接肽选自(g4s)n或氨基酸序列如seq id no：5、34～39所示的连接肽的至少之一，n为不为零的整数。

50、根据本发明的实施例，所述第三连接肽选自(g4s)n，n为2～6之间的任意整数。

51、根据本发明的实施例，所述第三连接肽是(g4s)3。由此，第二融合蛋白在免疫细胞表面形成较佳构型。

52、根据本发明的实施例，所述il-15rα具有如seq id no：25所示的氨基酸序列。

53、根据本发明的实施例，所述il-15具有如seq id no：26所示的氨基酸序列。

54、根据本发明的实施例，所述第二融合蛋白具有如seq id no：23所示的氨基酸序列。由此，得到在同时表达前述嵌合抗原受体和第二融合蛋白的免疫细胞。

55、根据本发明的实施例，所述第二核酸分子具有如seq id no：24所示的核苷酸序列。由此，进一步提高本发明嵌合抗原受体和第二融合蛋白在免疫细胞上的表达水平。

56、根据本发明的实施例，所述核酸构建体还包括第三核酸分子，所述第三核酸分子编码第一连接子，所述第一核酸分子和第二核酸分子通过所述第三核酸分子相连。

57、根据本发明的实施例，所述第一连接子选自p2a、t2a、e2a和f2a中的至少之一。由此，可得到细胞膜上较均一表达嵌合抗原受体和第一融合蛋白或第二融合蛋白的免疫细胞。

58、根据本发明的实施例，所述第一连接子为p2a。由此，可进一步促进嵌合抗原受体和第一融合蛋白或第二融合蛋白在细胞膜表面均一表达。

59、根据本发明的实施例，所述第一连接子具有如seq id no：30所示的氨基酸序列。由此，得到细胞膜上均一表达嵌合抗原受体和第一融合蛋白或第二融合蛋白的免疫细胞。

60、根据本发明的实施例，所述第三核酸分子具有如seq id no：31所示的核苷酸序列。由此，进一步提高本发明嵌合抗原受体和第一融合蛋白或第二融合蛋白在免疫细胞上的表达水平。

61、根据本发明的实施例，所述核酸构建体具有如seq id no：32或33所示的核苷酸序列。由此，进一步提高本发明嵌合抗原受体和第一融合蛋白或第二融合蛋白在免疫细胞上的表达水平。

62、在本发明的第三方面，本发明提出了一种表达载体。所述表达载体携带前述的核酸构建体。

63、根据本发明的实施例，所述表达载体是非致病性病毒载体。

64、根据本发明的实施例，所述非致病性病毒任选自反转录病毒、慢性毒和腺病毒相关病毒之一。

65、根据本发明的实施例，所述非致病性病毒是慢病毒。由此，构建得到的表达载体可在宿主细胞中表达本发明的嵌合抗原受体和/或前述第一融合蛋白或第二融合蛋白。

66、在将上述核酸分子连接到表达载体上时，可以将所述核酸分子与表达载体上的控制元件直接或者间接相连，只要这些控制元件能够控制所述核酸分子的翻译和表达等即可。当然这些控制元件可以直接来自于载体本身，也可以是外源性的，即并非来自于载体本身。当然，所述核酸分子与控制元件进行可操作地连接即可。根据本发明的实施例，所述表达载体是非致病性病毒载体。

67、在本文中，术语“载体”通常是指能够插入在合适的宿主中自我复制的核酸分子，其将插入的核酸分子转移到宿主细胞中和/或宿主细胞之间。所述载体可包括主要用于将dna或rna插入细胞中的载体、主要用于复制dna或rna的载体，以及主要用于dna或rna的转录和/或翻译的表达的载体。所述载体还包括具有多种上述功能的载体。所述载体可以是当引入合适的宿主细胞时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。通常，通过培养包含所述载体的合适的宿主细胞，所述载体可以产生期望的表达产物。

68、根据本发明的实施例，可以通过将所述核酸与商购的载体(如质粒或病毒载体)可操作地连接而获得。本发明中的载体不受特别限制，常用的质粒均可使用，如psetag2、pee14、pmh3等。

69、在本文中，术语“可操作地连接”是指将外源基因连接到载体上，使得载体内的控制元件，例如转录控制序列和翻译控制序列等等，能够发挥其预期的调节外源基因的转录和翻译的功能。常用的载体例如可以为病毒载体、质粒、噬菌体等等。根据本发明的一些具体实施例的表达载体导入合适的免疫细胞后，可在调控系统的介导下，有效实现前面所述的核酸分子的表达，进而实现所述核酸分子编码的蛋白质在细胞膜的大量表达，由此获得转基因免疫细胞。

70、根据本发明的实施例，所述表达载体为真核载体或原核载体。

71、根据本发明的实施例，所述表达载体是非致病性病毒载体。

72、根据本发明的实施例，所述非致病性病毒任选自反转录病毒、慢病毒和腺病毒相关病毒之一。

73、根据本发明的实施例，所述病毒是慢病毒。

74、在本发明的第四方面，本发明提出了一种转基因免疫细胞。所述转基因免疫细胞表达前述的嵌合抗原受体；或者携带前述的核酸构建体、前述的表达载体。

75、根据本发明实施例的免疫细胞是通过转染或者转化所述载体或转化子获得的，所述细胞在合适条件下可高效表达前述嵌合抗原受体或前述嵌合抗原受体和第一融合蛋白或第二融合蛋白。

76、根据本发明的实施例，所述转基因免疫细胞选自t细胞、nk细胞、nkt细胞、γδt细胞、巨噬细胞、外周血nk细胞、脐带血nk细胞、nk-92细胞和ipsc来源的上述任意一种免疫细胞的至少之一。本发明的前述嵌合抗原受体、第一融合蛋白或第二融合蛋白可通过表达载体(比如慢病毒载体)对t、nk、nkt、γδt、巨噬细胞、ipsc等免疫细胞转导，从而表达在这些免疫细胞表面。

77、根据本发明的实施例，所述转基因免疫细胞是nk细胞。

78、本发明对nk细胞的来源不做严格限制，可以是外周血nk细胞、脐带血nk细胞、ipsc或nk-92等来源的nk细胞。

79、在本发明的第四方面，本发明提出了一种药物组合物。所述药物组合物包括：

80、前述的嵌合抗原受体、前述的核酸构建体、前述的表达载体或前述的转基因免疫细胞。

81、根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括：药学上可接受的辅料。

82、在本文中，术语“药物组合物”通常是指单位剂量形式，并且可以通过制药领域中熟知的方法的任何一种进行制备。所有的方法包括使活性成分与构成一种或多种附属成分的载体相结合的步骤。通常，通过均匀并充分地使活性化合物与液体载体、固体载体或这两者相结合，制备组合物。

83、在本文中，术语“药学上可接受的辅料”可包括任何溶剂、固体赋形剂、稀释剂或其他液体赋形剂等等，适合于特有的目标剂型。除了任何常规的辅料与本发明的嵌合抗原受体、核酸、表达载体或转基因免疫细胞不相容的范围，例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的组合物的任何其他组分以有害的方式产生的相互作用，它们的用途也是本发明所考虑的范围。

84、本领域技术人员能够理解的是，前面针对嵌合抗原受体、核酸构建体、表达载体和转基因免疫细胞所描述的特征和优点，同样适用于该药物组合物，在此不再赘述。

85、在本发明的第五方面，本发明提出了前述的嵌合抗原受体、前述的核酸构建体、前述的表达载体、前述的转基因免疫细胞或前述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗肿瘤或癌症。

86、根据本发明的实施例，所述肿瘤为实体瘤或血液瘤。

87、在本发明的一些具体的实施方案中，所述癌症选自白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、肝癌、胆管癌、食管癌、肺癌、头颈癌、甲状腺癌、脑胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、胃癌、胃肉瘤、骨肉瘤、乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、结直肠癌、肾癌和前列腺癌之一。

88、在本发明的一个具体的实施方案中，所述癌症为结直肠癌。

89、本领域技术人员能够理解的是，前面针对嵌合抗原受体、核酸构建体、表达载体和转基因免疫细胞所描述的特征和优点，同样适用于该用途，在此不再赘述。

90、在本发明的另一方面，本发明还提出了一种预防和/或治疗肿瘤或癌症的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：向受试者施用药学上可接受量的上述转基因免疫细胞或上述药物组合物。

91、根据本发明的实施例，所述肿瘤为实体瘤或血液瘤。

92、在本发明的一些具体的实施方案中，所述癌症选自白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、肝癌、胆管癌、食管癌、肺癌、头颈癌、甲状腺癌、脑胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、胃癌、胃肉瘤、骨肉瘤、乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、结直肠癌、肾癌和前列腺癌之一。

93、在本发明的一个具体的实施方案中，所述癌症为结直肠癌。

94、在本文中，术语“给药”指将预定量的物质通过某种适合的方式引入病人。本发明的转基因免疫细胞或药物组合物可以通过任何常见的途径被给药，只要它可以到达预期的组织。给药的各种方式是可以预期的，包括腹膜、静脉注射、肌肉注射、皮下注射等等，但是本发明不限于这些已举例的给药方式。优选地，本发明的组合物采用静脉注射方式被给药。

95、在本文中，术语“治疗”是指用于获得期望的药理学和/或生理学效果。所述效果就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或疾病导致的不良作用而言可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖哺乳动物、特别是人的疾病，包括：(a)在容易患病但是尚未确诊得病的个体中预防疾病或病症发生；(b)抑制疾病，例如阻滞疾病发展；或(c)缓解疾病，例如减轻与疾病相关的症状。本文使用的“治疗”涵盖将药物或转基因免疫细胞给予个体以治疗、治愈、缓解、改善、减轻或抑制个体的疾病的任何用药，包括但不限于将含本文所述含有嵌合抗原受体的细胞的药物给予有需要的个体。

96、本发明所述的转基因免疫细胞和药物组合物的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选地，有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于：所述的活性成分的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。

97、如本文所用，术语“有效量”或“有效剂量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。

98、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。