胰岛素样生长因子I的变体的制作方法

本发明属于体外检测，具体涉及一种胰岛素样生长因子i的变体。

背景技术：

1、胰岛素样生长因子i(insulin like growth factor i，igf-1)又名somatomedinc，是肝脏合成并分泌到外周血中的一种分泌蛋白，其成熟蛋白由70个氨基酸组成，其中6个半胱氨酸相互形成了维持其空间结构的3对二硫键，因其结构与胰岛素类似而被命名。igf-1是一种活性蛋白多肽物质，它是人体内肝细胞、肾细胞、脾细胞等十几种细胞自分泌和旁分泌的产物。其具有降血糖、降血脂、舒张血管、促生长、促细胞分化、创伤修复等作用。精准检测igf-1有助于疾病分析和确诊后用药指导。

2、本领域虽然公开了igf-1的变体之一igf-1lr3，但该变体是外源合成的，是由原始的70个氨基酸链在其n端额外添加了13个氨基酸，总共83个氨基酸。该igf-1变体仍对人体组织中的igf-1受体显示其原始活性。但目前极少报道发现igf-1在体内会产生变体，进而也没有意识到个别样本线性关系不好，是由于igf-1被分解成变体导致的。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提供了一种胰岛素样生长因子i的变体，该变体可应用于胰岛素样生长因子i的变体的检测中，进而为igf-1的疾病分析提供精细化数据，便于临床进一步诊断。

2、在本发明的第一方面，本发明提出了一种胰岛素样生长因子i的变体。根据本发明的实施方案，所述胰岛素样生长因子i的变体包括具有单电荷质荷比7500-7520或双电荷质荷比3746-3766或三电荷质荷比2494-2514的des-r igf-1变体；

3、具有单电荷的质荷比7343-7363或双电荷质荷比3667-3687或三电荷质荷比2442-2462的des-rr igf-1变体。

4、发明人利用maldi-tof ms检测胰岛素样生长因子i时，发现含有胰岛素样生长因子i的样品检测结果显示还有单电荷质荷比7500～7520和单电荷质荷比7343～7363的峰，经过进一步的实验验证，确定了这两个峰分别对应胰岛素样生长因子i的des-r igf-1变体和des-rr igf-1变体。

5、根据本发明的实施方案，所述des-r igf-1变体的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述des-rr igf-1变体的氨基酸序列如seq id no:2所示。

6、seq id no:1所示氨基酸序列如下：

7、gpetlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrrapqtgivdeccfrscdlr-lemycaplkpaksa

8、seq id no:2所示氨基酸序列如下：

9、gpetlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrrapqtgivdeccfrscdl—lemycaplkpaksa

10、本发明第二方面提供一种分离的多核苷酸。根据本发明的实施方案，所述多核苷酸编码第一方面所述的胰岛素样生长因子i的变体。

11、本发明第三方面提供一种表达载体。根据本发明的实施方案，携带第二方面所述的分离的多核苷酸。

12、本发明第四方面提供一种细胞。根据本发明的实施方案，所述细胞携带第二方面所述的多核苷酸或第三方面所述的表达载体或者能够表达第一方面所述的胰岛素样生长因子i的变体。

13、本发明第五方面提供第一方面所述的胰岛素样生长因子i的变体、第二方面所述的分离的多核苷酸、第三方面所述的表达载体、第四方面所述的细胞在检测胰岛素样生长因子i的变体中的用途。

14、根据本发明的实施方案，在检测胰岛素样生长因子i的变体时，第一方面所述的胰岛素样生长因子i的变体，

15、或者第二方面所述的分离的多核苷酸、第三方面所述的表达载体、第四方面所述的细胞表达的变体作为检测方法中所用的标准品或者内标。

16、在进行胰岛素样生长因子i的变体的检测时，利用含有本发明前面所述的胰岛素样生长因子i的变体，或者前面所述的多核苷酸、表达载体、细胞表达的变体的试剂作为标准品或者内标，能够提升检测结果的准确度，标准品可用于标准曲线的绘制。

17、本发明第六方面提供一种用于检测胰岛素样生长因子i的变体的标准品或内标，根据本发明的实施方案，所述标准品或内标含有第一方面所述的胰岛素样生长因子i的变体。

18、目前，igf1的临床检测方法以化学发光免疫分析技术为主，化学发光免疫分析技术通过测量与待测物特异性结合的二抗上发光物质发出的光强度来间接地实现对待测物的定量，但是该技术的稳定性受到了抗体特异性、非特性吸附、嗜异性抗体、干扰物等多种因素的干扰，导致定量结果的波动性较大。

19、化学发光法检测胰岛素样生长因子i，仅能够检测igf1的量，不具有区分度，无法识别与igf1具有不同氨基酸数目的变体。本发明的发明人发现了igf1存在两种变体形式，分别为具有单电荷质荷比7500～7520的des-r igf-1变体和单电荷质荷比7343～7363的des-rr igf-1变体，通过检测igf1以及des-r igf-1变体和des-rr igf-1变体，利于为igf1的疾病分析提供精细化数据。

20、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

技术特征：

1.胰岛素样生长因子i的变体，其特征在于，包括具有单电荷质荷比7500-7520或双电荷质荷比3746-3766或三电荷质荷比2494-2514的des-r igf-1变体；

2.根据权利要求1所述的变体，其特征在于，所述des-r igf-1变体的氨基酸序列如seqid no:1所示，所述des-rr igf-1变体的氨基酸序列如seq id no:2所示。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1或2所述的胰岛素样生长因子i的变体。

4.一种表达载体，其特征在于，携带权利要求3所述的分离的多核苷酸。

5.一种细胞，其特征在于，携带权利要求3所述的多核苷酸或权利要求4所述的表达载体或者能够表达权利要求1或2所述的胰岛素样生长因子i的变体。

6.权利要求1或2所述的胰岛素样生长因子i的变体、权利要求3所述的多核苷酸、权利要求4所述的表达载体、权利要求5所述的细胞在检测胰岛素样生长因子i的变体中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，在检测胰岛素样生长因子i的变体时，权利要求1或2所述的胰岛素样生长因子i的变体，或者权利要求3所述的多核苷酸、权利要求4所述的表达载体、权利要求5所述的细胞表达的变体作为检测方法中所用的标准品或者内标。

8.一种用于检测胰岛素样生长因子i的变体的标准品或内标，其特征在于，含有权利要求1或2所述的胰岛素样生长因子i的变体。

技术总结
本发明属于体外检测技术领域，具体涉及一种胰岛素样生长因子I的变体。本发明的发明人发现了IGF1存在两种变体形式，分别为具有单电荷质荷比7500～7520的des‑R IGF‑1变体和单电荷质荷比7343～7363的des‑RR IGF‑1变体，并且通过采用本发明的胰岛素样生长因子I的变体的检测方法，特别是创造性的发现进行检测时，将IGF1抗体键合在Epoxy磁珠上，使得该检测方法能够准确检测出des‑RIGF‑1变体和des‑RR IGF‑1变体，从而为IGF‑1的疾病分析提供精细化数据。

技术研发人员：马雪婷,陈宏敏,黄改荣,周晓光,李运涛,王蕾
受保护的技术使用者：融智生物科技（青岛）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15