一种抗大豆凝集素纳米抗体及其应用

本发明属于食品安全技术检测领域，具体涉及一种抗大豆凝集素纳米抗体及其应用。

背景技术：

1、大豆营养物质含量丰富，平均含有40％左右的蛋白质，属于优质植物蛋白，一直以来，大豆和大豆加工副产品都在人类膳食结构中占重要地位，同时也是畜禽饲料中蛋白质的主要来源。但大豆中也含有多种抗营养因子及致敏蛋白，包括大豆凝集素(soybeanagglutinin，sba)、胰蛋白酶抑制剂等，对人体和动物造成潜在威胁。已有研究证明，sba对哺乳动物器官和代谢有毒性作用，包括诱导小肠和胰腺生长、胴体脂质耗竭、脾肾萎缩和循环胰岛素减少；最终表现为抑制机体生长，影响营养代谢和肠道环境，以及引发过敏反应等。因此，对大豆及其制品中的大豆凝集素进行快速检测具有重要的现实意义。

2、目前，大豆凝集素的检测方法主要包括凝集活性检测、酶联免疫吸附法(enzymelinked immunosorbent assay，elisa)、聚合酶链式反应、电化学生物传感器及质谱法等。其中elisa是检测和量化样本中免疫活性物质的经典方法，也是目前大豆凝集素检测的标准方法。elisa建立的前提和关键是特异性抗体的制备，然而传统抗体的制备存在过程繁琐、成本高、批间差异大等问题。

3、纳米抗体又称vhh抗体，是通过克隆驼源重链抗体可变区得到的只由一个可变区组成的单域抗体，是目前已知最小的功能性抗体片段。相较于传统抗体，纳米抗体具有亲和力高、稳定性高、易于规模化制备等优点，在elisa应用中具有一定优势。然而，目前暂未见抗大豆凝集素纳米抗体及相应elisa方法的报道；本发明提供一种高特异性的抗体，能够运用elisa方法检测。

技术实现思路

1、为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种抗大豆凝集素纳米抗体及其应用，本发明的纳米抗体能特异性识别大豆凝集素，可以竞争免疫检测大豆凝集素，制备简单、成本低、特异性好。

2、为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

3、一种抗大豆凝集素纳米抗体，纳米抗体包括：互补决定区cdr1、cdr2、cdr3；互补决定区包括与其同源性不低于90％的序列：1)互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.6所示；互补决定区cdr2的氨基酸序列如seq id no.7所示；互补决定区cdr3的氨基酸序列如seq id no.8所示。

4、前述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，同源性不低于90％的序列由cdr1、cdr2和/或cdr3经氨基酸替换得到，任意的氨基酸替换选自以下一种或多种：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、脯氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、苏氨酸或色氨酸。

5、前述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，纳米抗体的氨基酸序列包括：框架区fr1、fr2、fr3、fr4。

6、前述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，氨基酸序列框架区fr1的氨基酸序列如seqid no.2所示；框架区fr2的氨基酸序列如seq id no.3所示；框架区fr3的氨基酸序列如seqid no.4所示；框架区fr4的如seq id no.5所示。

7、前述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，纳米抗体的氨基酸序列如seq id no.1所示。

8、前述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，核苷酸序列如seq id no.9所示。

9、一种重组表达载体或重组工程菌，含有前述的核苷酸。

10、一种检测试剂盒，包括前述任意一项抗体。

11、一种抗大豆凝集素纳米抗体在制备检测大豆凝集素产品中的应用，抗大豆凝集素纳米抗体用于检测大豆及其制品中的大豆凝集素。

12、本发明的有益之处在于：

13、本发明提供一种全新的纳米抗体，能特异性识别大豆凝集素，应用于大豆凝集素的竞争免疫检测；

14、本发明使用纳米抗体和elisa配合实现大豆凝集素的高特异性检测，具有制备简单、成本低、特异性好的特点。

技术特征：

1.一种抗大豆凝集素纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括：互补决定区cdr1、cdr2、cdr3；所述互补决定区包括以下任一组合或与其同源性不低于90％的序列：1)互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.6所示；互补决定区cdr2的氨基酸序列如seq id no.7所示；互补决定区cdr3的氨基酸序列如seq id no.8所示。

2.根据权利要求1所述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，其特征在于，所述同源性不低于90％的序列由所述cdr1、cdr2和/或cdr3经氨基酸替换得到，任意的氨基酸替换选自以下一种或多种：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、脯氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、苏氨酸或色氨酸。

3.根据权利要求1所述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列包括：框架区fr1、fr2、fr3、fr4。

4.根据权利要求3所述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，其特征在于，所述氨基酸序列框架区fr1的氨基酸序列如seq id no.2所示；框架区fr2的氨基酸序列如seq id no.3所示；框架区fr3的氨基酸序列如seq id no.4所示；框架区fr4的如seq id no.5所示。

5.根据权利要求1所述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如seq id no.1所示。

6.根据权利要求1所述的一种抗大豆凝集素纳米抗体，其特征在于，所述核苷酸序列如seq

7.一种重组表达载体或重组工程菌，其特征在于，含有如权利要求6所述的核苷酸。

8.一种检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-6中任意一项所述的抗体。

9.一种抗大豆凝集素纳米抗体在制备检测大豆凝集素产品中的应用，其特征在于，所述抗大豆凝集素纳米抗体用于检测大豆及其制品中的大豆凝集素。

技术总结
本发明公开了一种抗大豆凝集素纳米抗体及其应用，该纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该氨基酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；本发明提供的纳米抗体，能特异性识别大豆凝集素，应用于大豆凝集素的竞争免疫检测，应用于制备检测大豆中的致敏蛋白的试剂盒，具有制备简单、成本低、特异性好等特点。

技术研发人员：邱雨楼,张梦晗,俞晓平,叶子弘,付贤树,张彪,游阿娟,宋斯怡,杨芹
受保护的技术使用者：中国计量大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25