本发明属于细菌裂解,具体涉及肽聚糖水解酶lyszw5及其应用。
背景技术:
1、抗生素曾被认为是治疗细菌感染性疾病最有力的武器,然而随着抗生素的滥用现象日益严重,细菌耐药性问题日益加剧,新抗生素研发的速度远低于耐药菌产生的速度。可作为替代的新抗生素又为数极少,且费用昂贵,造成临床上大量耐药菌感染者因无药可医而死亡,在这样严峻的抗生素耐药形式作用下,作为可替代抗生素成为新型抗菌制剂的噬菌体,引起国内外学者的重视。
2、噬菌体是一类以微生物(细菌、真菌、放线菌或螺旋体)为宿主的病毒,没有细胞结构,仅由衣壳蛋白和其内部的遗传物质组成,必须依赖宿主进行复制和增殖。噬菌体作为细菌的天然杀手,广泛存在于自然界中,是地球上最丰富多样的生物体,它们的数量大约是细菌的10倍。近一个多世纪以来,噬菌体治疗的安全性和有效性已经在大量动物试验中得到了证实。裂解性噬菌体在感染宿主细菌细胞后即立即启动自身早期基因的表达,通过这些早期基因表达产物降解宿主dna,从而终止宿主的基因表达,夺取宿主的dna复制机器大量合成自身核酸;当产生足够的噬菌体后,这些核酸被当作模板产生大量的噬菌体结构蛋白,这些结构蛋白对噬菌体基因组进行加工和包装,产生下一代噬菌体颗粒。一旦噬菌体调控蛋白积累到一定水平,即启动噬菌体的穿孔素大量表达,穿孔素在宿主细胞内形成孔洞,导致噬菌体裂解酶穿过内膜并接近细胞壁,将细胞壁裂解,从而达到裂解细菌的目的。
3、除了完整的噬菌体颗粒可以作为抗菌剂外,噬菌体编码的肽聚糖水解酶—裂解酶(lysin)也是一类极具开发潜力的新型抗菌分子。裂解酶是双链dna噬菌体在感染宿主的后期编码的一类水解酶,可以水解细菌细胞壁肽聚糖,导致细菌裂解并释放子代噬菌体。革兰氏阳性细菌裂解酶有比较系统和成熟的研究,众多天然裂解酶和嵌合裂解酶在动物感染模型中被证实安全有效,其中抗耐药金黄色葡萄球菌感染的多个裂解酶已进入到临床试验阶段。裂解酶的高效性、特异性、低耐药性以及与现有抗生素的协同作用等优势使其成为新的、极具前景的抗菌药物。
4、目前,对革兰氏阴性菌和革兰氏阴性菌具有裂解活性的噬菌体裂解酶研究较少。因此,有必要开发新的、对革兰氏阴性菌具有高效裂解活性的噬菌体裂解酶。
技术实现思路
1、本发明提出一种肽聚糖水解酶lyszw5,实现对革兰氏阳性菌和阴性菌具均有高效裂解活性。
2、基于此,本发明的方案如下:
3、本发明的第一个方面,提出肽聚糖水解酶lyszw5在细菌裂解中的应用,所述肽聚糖水解酶lyszw5的氨基酸序列如seq id no:1所示。
4、可选地,所述肽聚糖水解酶lyszw5的核苷酸序列如seq id no:2所示。
5、可选地,所述细菌包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。
6、作为优选,所述细菌包括鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、猪链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、化脓链球菌和肺炎链球菌中的一种或多种。
7、可选地,所述细菌为革兰氏阴性菌。
8、作为优选,所述细菌包括肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌和大肠杆菌中的一种或多种。
9、本发明的第二个方面,提出肽聚糖水解酶lyszw5在制备灭菌产品中的应用,所述肽聚糖水解酶lyszw5的氨基酸序列如seq id no:1所示;所述灭菌产品包括抗感染药物或饲料添加剂。
10、可选地,所述灭菌产品中还添加有浓度为25mm以下的nacl,更优选10mm的nacl。
11、本发明的第三个方面,提出肽聚糖水解酶lyszw5的制备方法,包括构建核苷酸序列如seq id no:2所示的基因重组表达载体、重组表达载体转化及诱导表达、产物分离纯化的步骤。
12、可选地,所述重组表达载体构建过程基于全序列合成并克隆到原核表达载体;和/或,所述转化过程将重组表达载体转入大肠杆菌。
13、相比现有技术,本发明的有益效果在于:
14、本发明提出的肽聚糖水解酶lyszw5在体内和体外对鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、猪链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、化脓链球菌和肺炎链球菌具有较好的裂解效果,能广谱裂解革兰氏阴性菌和阳性菌,在抗感染类药物以及饲料添加剂的研发中具有较好的应用前景。
1.肽聚糖水解酶lyszw5在细菌裂解中的应用,其特征在于,所述肽聚糖水解酶lyszw5的氨基酸序列如seq id no:1所示。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述肽聚糖水解酶lyszw5的核苷酸序列如seq id no:2所示。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述细菌包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述细菌包括鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、猪链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、化脓链球菌和肺炎链球菌中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述细菌为革兰氏阴性菌。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述细菌包括肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌和大肠杆菌中的一种或多种。
7.肽聚糖水解酶lyszw5在制备灭菌产品中的应用,其特征在于,所述肽聚糖水解酶lyszw5的氨基酸序列如seq id no:1所示;所述灭菌产品包括抗感染药物或饲料添加剂。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述灭菌产品中还添加有浓度为25mm以下的nacl。
9.肽聚糖水解酶lyszw5的制备方法,其特征在于,包括构建核苷酸序列如seq id no:2所示的基因重组表达载体、重组表达载体转化及诱导表达、产物分离纯化的步骤。
10.根据权利要求9所述的制备方法,其特征在于,所述重组表达载体构建过程基于全序列合成并克隆到原核表达载体;和/或,所述转化过程将重组表达载体转入大肠杆菌。