本发明涉及抗体,尤其是涉及一种抗地高辛抗体或其抗原结合片段及其应用。
背景技术:
1、地高辛是强心苷类药物中使用最广泛的药物,迄今为止临床应用已有200多年的历史,对心脏具有高亲和力和选择性。治疗剂量下可轻微抑制na+/k+-atp酶,破坏钠在心肌细胞膜上的主动转运,使细胞内na+浓度增加,k+浓度降低。随后通过na+和ca2+双向交换机制,导致细胞内ca2+浓度增加,心肌收缩力加强,产生正性肌力作用,用于治疗充血性心力衰竭和某些心律失常。
2、地高辛,是一种强心苷类药物,提取自毛花洋地黄的叶中,又称异羟基洋地黄毒苷。地高辛的分子式为c41h64o14,相对分子质量780.95,是由甾体母核c17上的5元不饱和内酯环与3个d-洋地黄毒糖的c3位通过脱水缩合而成。地高辛在结构上比洋地黄毒苷多了一个羟基,羟基数目的增加,使地高辛的极性增大而亲脂性减弱,相应的,地高辛的口服吸收较洋地黄毒苷低。地高辛为白色结晶或结晶状粉末,味苦,易溶于吡啶,不溶于水和乙醚,在酸性或碱性状态下易发生水解,而在密封避光状态下能够保持稳定。
3、地高辛主要用于治疗各种伴有心力衰竭的心脏疾病,对伴有水肿的充血性心力衰竭、早搏及心房纤维性颤动、室上性心动过速等尤为有效。伴随地高辛在临床上的广泛应用,其治疗安全指数和毒性一直是被重视的问题。地高辛的治疗安全范围小,有效血药浓度范围为0.8~2.0μg·l-1,一旦用药剂量过大,导致心脏内ca2+超载,可发生明显的心脏毒性反应。此外,在联合用药普遍化和常规化的治疗环境下,药物的相互作用对地高辛血药浓度的影响也成为了不可忽视的问题。
4、地高辛可以采用基于免疫学原理的检测方法进行检测,例如免疫荧光法、酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析技术等方法。抗体是免疫检测方法中的主要试剂,提供更多的与地高辛结合的高质量抗体能够为基于免疫学原理的检测方法提供稳定可靠的原料来源,降低国产商品对进口原料的依赖,降低产品成本。同时提高地高辛快速诊断商品如金标试纸条、elisa试剂盒等的检出率及灵敏度,降低假阳率,提高自产商品的竞争力。
5、有鉴于此,特提出本发明。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种抗地高辛抗体或其抗原结合片段,通过以地高辛为抗原筛选获得一株单克隆抗体,通过克隆、鉴定与基因结构的分析,确定了其cdr区序列,本发明的另一目的是提供关于该抗体或其抗原结合片段的生物材料和它们的应用。
2、为解决上述技术问题,本发明特采用如下技术方案:
3、第一方面,提供了一种抗地高辛抗体或其抗原结合片段,该抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区;重链可变区包含seq id no.1所示氨基酸序列n末端第17~24位氨基酸残基的vhcdr1、第42~49位氨基酸残基的vhcdr2和第88~98位氨基酸残基的vhcdr3;
4、轻链可变区包含seq id no.2所示氨基酸序列n末端第27~37位氨基酸残基的vlcdr1、第55~57位氨基酸残基的vlcdr2和第94~102位氨基酸残基的vlcdr3。
5、第二方面,提供了一种生物材料,该生物材料选自(ⅰ)~(ⅲ)中任一项:
6、(ⅰ)多核苷酸,包括编码上述的抗地高辛抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列;
7、(ⅱ)载体,所述载体携带前述(ⅰ)多核苷酸。
8、(ⅲ)细胞,所述细胞携带(ⅰ)中多核苷酸,或含有(ⅱ)中载体,或表达前述抗地高辛抗体或其抗原结合片段。
9、第三方面,提供了提供了上述抗地高辛抗体或其抗原结合片段,或上述生物材料在非诊断和治疗目的的检测地高辛,或制备用于检测地高辛的产品中的应用。
10、第四方面,提供了一种用于检测地高辛的试剂或试剂盒,该试剂或试剂盒包含上述抗地高辛抗体或其抗原结合片段。
11、与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
12、本发明运用地高辛免疫balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过特异性的高通量筛选得到具有高度特异性的杂交瘤细胞,通过培养和再免疫获得大量小鼠腹水,再经多步分离及纯化获得高纯度、高灵敏度和高特异性的抗地高辛的单克隆抗体anti-dgx-mab1,为开发检测地高辛的免疫试纸条提供了所需的原料。本发明的抗地高辛的单克隆抗体anti-dgx-mab1可用于免疫印迹、免疫荧光等免疫学检测,所获抗体经验证具有良好的特异性结合能力。
1.抗地高辛抗体或其抗原结合片段,其特征在于,包括重链可变区和轻链可变区;重链可变区包含seq id no.1所示氨基酸序列n末端第17~24位氨基酸残基的vhcdr1、第42~49位氨基酸残基的vhcdr2和第88~98位氨基酸残基的vhcdr3;
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,重链可变区中vhfr1的氨基酸序列如seq id no.3所示,和/或vhfr2的氨基酸序列如seq id no.4所示,和/或vhfr3的氨基酸序列如seq id no.5所示,和/或vhfr4的氨基酸序列如seq id no.6所示;
3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,重链可变区的氨基酸序列如seq in no.1所示;和/或,轻链可变区的氨基酸序列如seq in no.2所示。
4.根据权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段还包含igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige或igd任何其中之一的部分或全部恒定区的序列;
5.生物材料,其特征在于,所述生物材料选自(ⅰ)~(ⅲ)中任一项:
6.权利要求1~4任一项所述的抗地高辛抗体或其抗原结合片段,或权利要求5所述的生物材料在非诊断和治疗目的的检测地高辛,或制备用于检测地高辛的产品中的应用。
7.用于检测地高辛的试剂或试剂盒,其特征在于,包含权利要求1~4任一项所述的抗地高辛抗体或其抗原结合片段。
8.根据权利要求7所述的试剂或试剂盒,其特征在于,还包括标记物,所述标记物包括酶、荧光分子标记、荧光微球、彩色微球、胶体金、生物素或链霉亲和素中的一种或多种。
9.根据权利要求8所述的试剂或试剂盒,其特征在于,所述试剂或试剂盒包括用于免疫检测的试剂或试剂盒;
10.根据权利要求9所述的试剂或试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括免疫层析试纸,所述免疫层析试纸为竞争免疫层析试纸;