抗原短肽用于筛选治疗与HPV相关的疾病的药物中的用途及其筛选的TCR

本技术涉及医药，尤其涉及抗原短肽用于筛选治疗与hpv相关的疾病的药物中的用途及其筛选的tcr。

背景技术：

1、人类乳头瘤病毒(human papillomavirus，hpv)是一种dna病毒，属于乳头瘤病毒科乳头瘤病毒属。该类病毒感染人体的表皮与黏膜组织，目前约有170种类型的hpv被判别出来，有些时候hpv入侵人体后会引起疣甚至癌症，但大多数时候则没有任何临床症状。

2、hpv导致癌症的一个重要因素是高危型hpv的持续感染，如hpv16、hpv18等。由高风险hpv编码的e6和e7蛋白可以分别抑制抑癌基因p53和rb蛋白的活性，从而导致细胞周期异常，发生癌变。高危型hpv与90％的宫颈癌和肛门癌，40％至60％的阴道癌和阴茎癌有关，同时根据地理特性，还可能与60％的口咽癌相关。

3、宫颈癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤，全球发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，且发展中国家的宫颈癌发病率显著高于高达国家。根据2018年最新统计，中国宫颈癌发病率为15.30/10万，死亡率为4.57/10万，高于全球平均发病率(10.61/10万)和死亡率(2.98/10万)。近10年来，宫颈癌发病率呈上升趋势，40-60岁为发病高峰年龄。尽管对于早期宫颈癌，手术和放化疗治疗效果较好，但是一半以上的患者初次就诊即被诊断为局部晚期宫颈癌。30％-70％的局部晚期宫颈癌患者会出现复发及(或)远处转移，而对于局部进展期和转移性宫颈癌，传统治疗的疗效十分有限，其五年生存率仅为57.1％和17.3％。

4、特异性t细胞免疫治疗是指利用针对肿瘤抗原的特异性t细胞来杀伤肿瘤细胞的方法，是一种高度个性化的肿瘤免疫治疗方法。由于肿瘤局部免疫抑制微环境的存在，病人体内的自身t细胞杀伤肿瘤的功能有限。因此，人们试图通过对t细胞进行基因改造的方法提高其杀伤肿瘤的能力。tcr-t和car-t均为基因修饰过的细胞治疗药物，通过转入的t细胞受体(t cell receptor,tcr)或嵌合抗原受体(car)基因与相应靶点结合后，即可激活t细胞，利用t细胞释放的颗粒酶、穿孔素、细胞因子等清除肿瘤细胞；但tcr-t和car-t的显著的不同点在于：car-t的靶点是细胞表面的膜蛋白，而tcr-t的靶点则是抗原短肽-mhc复合物(peptide-major histocompatibility complex,pmhc)。

5、hpv相关蛋白是宫颈癌最理想的t细胞免疫治疗靶点。tcr识别的靶点是“抗原短肽-mhc分子复合物”。tcr同时具有mhc限制性，理论上一个tcr分子仅能够特异性识别某一特定mhc递呈的短肽。mhc具有多态性，目前已发现的人类mhc(又称为人类白细胞抗原，human leukocyte antigen,hla)等位基因数量超过15000个，且特定hla在不同人群中的出现频率有很大差异，中国人群中最常见的hla类型为hla-a1101。hlai类分子呈递的短肽长度为8-11个氨基酸，hla ii类分子呈递的短肽长度为12-24个氨基酸，这些抗原短肽的发现及鉴定是tcr-t治疗的前提。尽管短肽是否与hla结合可以通过亲和力预测、hla结合力测定等获得，但是该短肽能否被表达hpv的肿瘤细胞天然递呈，才是决定该短肽特异性的tcr能否用于肿瘤治疗的关键。

6、因此，本领域技术人员致力于寻找a1101限制性hpv抗原短肽，以及将发现的抗原短肽用于筛选可以特异性识别hpv阳性肿瘤细胞的tcr，从而使他们在t细胞免疫治疗中发挥作用。

技术实现思路

1、本技术的目的在于提供一种抗原短肽用于筛选治疗与hpv相关的疾病的药物中的用途以及所筛选的t细胞受体(tcr)，所述抗原短肽筛选特异性t细胞抗体，转录了所述tcr的t细胞能够被特异性激活并且对表达a1101和hpv的肿瘤细胞具有很强的杀伤作用。

2、本技术具体技术方案如下：

3、1.抗原短肽用于筛选治疗与hpv相关的疾病的药物中的用途，所述抗原短肽的氨基酸序列如seq id no:1所示。

4、2.根据项1所述的用途，其中，所述与hpv相关的疾病为宫颈癌、头颈癌、肛门癌、阴茎癌、阴道癌或外阴癌。

5、3.抗原短肽用于筛选治疗宫颈癌、头颈癌、肛门癌、阴茎癌、阴道癌或外阴癌的药物中的用途，所述抗原短肽的氨基酸序列如seq id no:1所示。

6、4.根据项1-3中任一项所述的用途，其中，所述药物为用于与包含所述抗原短肽的抗原短肽-hla-a1101复合物结合的t细胞受体(tcr)。

7、5.一种t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr包含含有可变区的α链和/或含有可变区的β链，α链的可变区包含氨基酸序列为如seq id no:2、seq id no:8或seq id no:14所示的互补决定区1(cdr1)；和/或

8、氨基酸序列为如seq id no:3、seq id no:9或seq id no:15所示的互补决定区2(cdr2)。

9、6.根据项5所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述β链的可变区包含氨基酸序列为如seq id no:5、seq id no:11或seq id no:17所示的互补决定区1(cdr1)；和/或

10、氨基酸序列为如seq id no:6、seq id no:12或seq id no:18所示的互补决定区2(cdr2)。

11、7.根据项5或6所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述α链的可变区包含含有氨基酸序列为如seq id no:4、seq id no:10或seq id no:16所示的互补决定区3(cdr3)；和/或

12、所述β链的可变区包含含有氨基酸序列为如seq id no:7、seq id no:13或seq idno:19所示的互补决定区3(cdr3)。

13、8.根据项5-7中任一项所述的t细胞受体(tcr)，所述α链的可变区还包括第一先导序列；和/或

14、所述β链的可变区还包括第二先导序列。

15、9.根据项5-8中任一项所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述α链可变区的氨基酸序列如seq id no:26、seq id no:28或seq id no:30所示或者与seq id no:26、seq id no:28或seq id no:30具有至少90％序列相同性的氨基酸序列，和/或所述β链的可变区的氨基酸序列如seq id no:27、seq id no:29或seq id no:31所示或者与seq id no:27、seq idno:29或seq id no:31具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。

16、10.根据项5-9中任一项所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述α链还包含α恒定区和/或所述β链还包含β恒定区，优选地，所述恒定区为小鼠恒定区或人恒定区。

17、11.根据项5-10中任一项所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr是分离的或纯化的或者是重组的。

18、12.根据项5-11中任一项所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr是人的。

19、13.根据项5-12中任一项所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr是单克隆的。

20、14.根据项5-13中任一项所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr是单链。

21、15.根据项5-14中任一项所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr包含两条链。

22、16.根据项5-15中任一项所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr为细胞结合的形式或为可溶的形式，优选为可溶的形式。

23、17.根据项5-16中任一项所述的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr与抗原短肽-hla-a1101复合物结合，优选地，所述抗原短肽的氨基酸序列如seq id no:1所示。

24、18.一种核酸分子，其中，所述核酸分子包含编码项5-17中任一项所述的tcr或者所述tcr的α链或β链。

25、19.根据项18所述的核酸分子，其中编码α链的核苷酸序列包含如seq id no:34、seq id no:36或seq id no:38所示的核苷酸序列；和/或

26、编码β链的核苷酸序列包含如seq id no:35、seq id no:37或seq id no:39所示的核苷酸序列。

27、20.一种载体，其中，所述载体包含项18或19所述的核酸分子。

28、21.根据项20所述的载体，其中，所述载体为表达载体。

29、22.根据项20或21所述的载体，其中，所述载体为病毒载体，优选为逆转录病毒载体。

30、23.根据项22所述的载体，其中，所述病毒载体为慢病毒载体。

31、24.一种工程化细胞，其包含项5-17中任一项所述的tcr、项18-19中任一项所述的核酸分子或者项20-23中任一项所述的载体。

32、25.根据项24所述的工程化细胞，其中，所述tcr对所述细胞是异源的。

33、26.根据项24或25所述的工程化细胞，其中，所述工程化细胞是细胞系。

34、27.根据项24-26中任一项所述的工程化细胞，其中，所述工程化细胞是获自受试者的原代细胞，优选地，所述受试者为哺乳动物受试者，优选为人。

35、28.根据项24-27中任一项所述的工程化细胞，其中，所述工程化细胞是t细胞或nk细胞，优选地，所述t细胞是从外周血分离的t细胞。

36、29.根据项28所述的工程化细胞，其中，所述t细胞为cd8+或cd4+。

37、30.一种生产项24-29中任一项所述的工程化细胞的方法，其包括在体外或离体地将项18-19中任一项所述的核酸分子或者项20-23中任一项所述的载体引入细胞中。

38、31.根据项30所述的方法，其中，所述载体为病毒载体，并且所述引入是通过转导进行的。

39、32.一种药物组合物，其包含项5-17中任一项所述的t细胞受体(tcr)、项18-19任一项所述的核酸分子、项20-23中任一项所述的载体或者项24-29中任一项所述的工程化细胞。

40、33.根据项32所述的药物组合物，其还包含药学上可接受的载体或佐剂。

41、34.项5-17中任一项所述的t细胞受体(tcr)、项18-19中任一项所述的核酸分子、项20-23中任一项所述的载体、项24-29中任一项所述的工程化细胞或者项32-33中任一项所述的药物组合物在制备治疗与hpv相关的疾病的药物中的用途。

42、35.根据项34所述的用途，其中，与hpv相关的疾病为hpv慢性感染、宫颈上皮内瘤样病变、宫颈癌、头颈癌、肛门癌、阴茎癌、阴道癌或外阴癌。

43、发明的效果

44、本技术所述的抗原短肽能够筛选特异性的t细胞受体(tcr)，同时转导了所述tcr的t细胞能够被特异性激活并且对表达a1101和hpv的肿瘤细胞具有很强的杀伤作用，可以用于宫颈癌等hpv阳性的肿瘤的免疫治疗。

45、并且转导了本技术所述tcr的t细胞对表达e7的细胞系有很强的激活反应，对不表达e7的细胞系没有激活反应，并且对表达e7的细胞系有很强的杀伤功能，并能够有效抑制e7阳性肿瘤的生长。