一种利用莱鲍迪苷D的废母液回收高纯度莱鲍迪苷O和莱鲍迪苷N的工艺方法与流程

本发明涉及糖苷类产品领域，尤其涉及一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法。

背景技术：

1、甜菊糖苷是从多年生灌木甜叶菊(stevia rebaudiana)中分离和提取的天然甜味剂，已有研究表明甜菊糖苷类物质有莱鲍迪苷a(rebaudios ide a，ra)、rb、rc、rd、rm等多种化合物。其中甜菊苷(st)和莱鲍迪苷a(ra)所占比例最大(一般在90％以上)，莱鲍迪苷c(rc)、杜尔克苷a(da)、甜菊双糖苷的含量较少。尽管莱鲍迪甙a对人类健康具有潜在的积极益处，而且这种甜菊糖苷相对容易获得，但其挥之不去的涩味使其作为甜味剂不太理想。

2、目前大多数企业主要以甜叶菊为原料，经过提取、分离操作得到高含量的莱鲍迪苷d、莱鲍迪苷a或者莱鲍迪苷c产品，但是莱鲍迪苷d生产中会产生大量的废糖母液，这些母液中还含有莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n成分，如果直接将废糖母液丢弃，势必造成原料浪费。因此针对上述技术问题，有必要开发一种利用莱鲍迪苷d生产中的废糖母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法，利用该工艺方法可以得到高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n，避免了资源浪费。

2、为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

3、一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法，所述工艺方法包括以下步骤：

4、(1)取收集的废糖母液，加入纯化水稀释后进入树脂柱中，先采用第一解吸剂洗脱树脂柱，收集第一解吸液；然后再采用第二解吸剂洗脱树脂柱，收集第二解吸液；

5、(2)取步骤(1)中的第一解吸液，经过浓缩、干燥得到的第一干燥物收集备用；取步骤(1)中第二解吸液，浓缩、干燥得到的第二干燥物收集备用；

6、(3)取步骤(2)中的第一干燥物，加入乙醇溶解后进入正相中低压色谱柱中，采用90％-95％v/v、80％-90％v/v以及70％-80％v/v的乙醇对所述色谱柱进行梯度解吸，分别收集上述浓度的乙醇解吸色谱柱的解吸液；

7、(4)取步骤(3)中80％-90％v/v的乙醇解吸所述色谱柱时的解吸液，浓缩、干燥得到的干燥物备用；

8、(5)取步骤(4)中所述干燥物，加入甲醇溶解后进入反相高压色谱柱中，采用40-70％v/v的甲醇进行解吸，根据图谱分别收集第一段解吸液和第二段解吸液；

9、(6)取步骤(5)中所述第一段解吸液，经过浓缩、干燥得到莱鲍迪苷o产品；

10、(7)取步骤(5)中所述第二段解吸液，经过浓缩、干燥得到莱鲍迪苷n产品。

11、作为一种改进的技术方案，步骤(1)中纯化水的加入量为所述废糖母液的5-10倍；稀释后的废糖母液按照10-30ml/min的流速进入所述树脂柱中；所述第一解吸剂为纯化水，所述纯化水按照20-40ml/min的流速洗脱所述树脂柱；所述第二解吸剂为50％-70％v/v的甲醇，所述甲醇按照50-100ml/min的流速洗脱所述树脂柱。

12、作为一种改进的技术方案，步骤(1)中所述树脂柱中的树脂为大孔吸附树脂，所述大孔吸附树脂的型号为lx-t28、d001、t81、d354、spd-009。

13、作为一种改进的技术方案，步骤(3)中第一干燥物按照质量体积比1:3-5的比例加入80-90％v/v乙醇中搅拌溶解，再按照20-40ml/min的流速进入正相中低压色谱柱中，所述正相中低压色谱柱的填料是粒径在40-60μm的正相填料silica(硅胶)或nh2(氨基)。

14、作为一种改进的技术方案，步骤(3)中70％-80％v/v、80％-90％v/v以及90％-95％v/v的乙醇分别按照50-100ml/min的流速解吸所述色谱柱，且每个乙醇浓度按色谱柱填料体积1-4bv的用量解吸。

15、作为一种改进的技术方案，步骤(5)中的干燥物按照质量体积比1:8-12的比例加入50％-70％v/v的甲醇中搅拌溶解，按照40-60ml/min的流速进入反相高压色谱柱中，所述反相高压色谱柱的填料为粒径10-20μm的硅胶键合的c18填料或c8(mos)。

16、作为一种改进的技术方案，步骤(5)中所述40-70％v/v的甲醇按照40-60ml/min的流速解吸所述色谱柱。

17、采用了上述技术方案后，本发明的有益效果是：

18、本发明以莱鲍迪苷d的废母液为原料，经过稀释后进入树脂柱，采用纯化水进行解吸，收集的第一解吸液经过浓缩、干燥后得到的第一干燥物加入乙醇溶解后，再进入正相中低压色谱中，采用乙醇进行梯度洗脱，收集80％-90％v/v的乙醇解吸色谱柱时的解吸液，经过浓缩干燥得到的干燥物，加入甲醇溶解后进入反相高压色谱柱中，采用甲醇进行解吸，收集第一段解吸液和第二段解吸液，第一段解吸液经过浓缩、干燥得到莱鲍迪苷o产品；第二段解吸液经过浓缩干燥后的干燥物中加入甲醇，降温结晶、过滤，收集的滤饼加入甲醇搅拌、降温结晶、过滤，收集的滤饼经过干燥得到莱鲍迪苷n产品。上述工艺方法，可以将废母液中的莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n进行回收，并且得到了高纯度、产量的莱鲍迪苷n和莱鲍迪苷o。

技术特征：

1.一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法，其特征在于，所述工艺方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法，其特征在于，步骤(1)中纯化水的加入量为所述废糖母液的5-10倍；稀释后的废糖母液按照10-30ml/min的流速进入所述树脂柱中；所述第一解吸剂为纯化水，所述纯化水按照20-40ml/min的流速洗脱所述树脂柱；所述第二解吸剂为50％-70％v/v的甲醇，所述甲醇按照50-100ml/min的流速洗脱所述树脂柱。

3.根据权利要求1所述的一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法，其特征在于，步骤(1)中所述树脂柱中的树脂为大孔吸附树脂，所述大孔吸附树脂的型号为lx-t28、d001、t81、d354、spd-009。

4.根据权利要求1所述的一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法，其特征在于，步骤(3)中第一干燥物按照质量体积比1:3-5的比例加入80-90％v/v乙醇中搅拌溶解，再按照20-40ml/min的流速进入正相中低压色谱柱中，所述正相中低压色谱柱的填料是粒径在40-60μm的正相填料silica(硅胶)或nh2(氨基)。

5.根据权利要求1所述的一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法，其特征在于，步骤(3)中70％-80％v/v、80％-90％v/v以及90％-95％v/v的乙醇分别按照50-100ml/min的流速解吸所述色谱柱，且每个乙醇浓度按色谱柱填料体积1-4bv的用量解吸。

6.根据权利要求1所述的一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法，其特征在于，步骤(5)中的干燥物按照质量体积比1:8-12的比例加入50％-70％v/v的甲醇中搅拌溶解，按照40-60ml/min的流速进入反相高压色谱柱中，所述反相高压色谱柱的填料为粒径10-20μm的硅胶键合的c18填料或c8(mos)。

7.根据权利要求1所述的一种利用莱鲍迪苷d的废母液回收高纯度莱鲍迪苷o和莱鲍迪苷n的工艺方法，其特征在于，步骤(5)中所述40-70％v/v的甲醇按照40-60ml/min的流速解吸所述色谱柱。

技术总结
本发明涉及糖苷类产品领域，尤其涉及一种利用莱鲍迪苷D的废母液回收高纯度莱鲍迪苷O和莱鲍迪苷N的工艺方法，包括以下步骤：(1)取废糖母液，稀释后进入树脂柱中，先采用第一、第二解吸剂洗脱，收集第一、第二解吸液；(2)取第一解吸液，经过浓缩、干燥得到第一干燥物加入乙醇溶解后进入正相中低压色谱柱，采用乙醇进行梯度解吸，收集的解吸液浓缩、干燥加入甲醇溶解后进入反相高压色谱柱中，采用甲醇进行解吸，分别收集第一段、第二段解吸液；(3)取第一段解吸液，经过浓缩、干燥得到莱鲍迪苷O产品；(4)取第二段解吸液，经过浓缩、干燥得到莱鲍迪苷N产品。上述工艺方法，可以将废母液中的莱鲍迪苷O和莱鲍迪苷N进行回收。

技术研发人员：朱理平,郭晓杰,何冬生,刘浩,鞠敏,曹欣欣
受保护的技术使用者：东台市浩瑞生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1