YTHDF2重编程巨噬细胞在制备抑癌药物和疗效预测标志物中的用途

本技术属于生物制药和检测领域，具体涉及ythdf2重编程巨噬细胞在制备抑制三阴性乳腺癌药物及其疗效预测标志物中的用途。

背景技术：

1、三阴性乳腺癌(简称tnbc)是一种特殊的分子亚型乳腺癌，预后较差，一旦癌症发生转移，生存期通常只有12到15个月。经研究发现tnbc免疫微环境中巨噬细胞分泌细胞因子抑制肿瘤细胞缺氧诱导因子(hif)的活性，从而抑制肿瘤细胞的糖酵解和抗凋亡能力。有研究发现hif的活性依赖性alkb同源物5(alkbh5)，alkbh5的过表达促进了乳腺癌干细胞中nanog的表达，提示rna甲基化有望成为乳腺癌治疗的新的切入点。

2、巨噬细胞是肿瘤微环境的重要组成部分，参与肿瘤的发生发展，同时也是肿瘤微环境的重要免疫细胞。巨噬细胞对肿瘤细胞增殖和免疫抑制过程以及对化疗的抵抗中发挥作用；相反，当被恰当激活后，巨噬细胞可以介导对肿瘤细胞的吞噬以及细胞毒性肿瘤细胞杀伤，并涉及与固有和适应性免疫系统成分间有效的双向互作。因此，巨噬细胞可作为肿瘤治疗的靶点。巨噬细胞通常分为两类：一是传统激活的巨噬细胞(m1型)，它是对1型辅助性t细胞反应；另一类是选择性激活的巨噬细胞(m2型)，它对2型辅助性t细胞反应，抑制免疫功能(包括较弱的抗原提呈能力、抑制t细胞和nk细胞的增殖作用)。被肿瘤招募的巨噬细胞在肿瘤内部受到肿瘤分泌的细胞因子il-4,il-10,il-13,tgfβ-1和pge2作用，转化成为tam。目前，rna甲基化与肿瘤之间的研究受到广泛关注，越来越多的证据表明，rna甲基化与肿瘤的发生发展密切相关，在不同类型的肿瘤中，rna甲基化修饰修饰状态既可以致癌因子，也可以抑癌因子。

3、本发明针对三阴性乳腺癌化疗前后不同治疗效果的巨噬细极化方向和巨噬细胞中m6a甲基化相关蛋白表达情况作进一步深入的研究，试图为tnbc患者的治疗寻求新的治疗途径。

技术实现思路

1、经本研究发现：m6a甲基化阅读蛋白ythdf2与m2型巨噬细胞标志基因表达呈正相关性与m1型巨噬细胞标志基因表达呈负相关性。ythdf2抑制巨噬细胞将肿瘤抗原递呈给免疫细胞，减弱nk细胞及cd4阳性t细胞对tnbc的抗癌作用。在tcga数据库乳腺患者数据集中，ythdf2与所有样本和年龄≥45岁亚群、年龄<80岁亚群、her2阴性亚群、女性亚群、分级stage i/ii亚群、分级stage ii/iii亚群等样本的总生存期呈负相关。rna甲基化阅读蛋白ythdf2通过重编程巨噬细胞和抑制免疫细胞减弱三阴性乳腺癌患者新辅助化疗的疗效，可以三阴性乳腺癌患者新辅助化疗疗效和预后的预测生物标志物。将ythdf2 sirna输送到巨噬细胞可以诱导m1型巨噬细胞表型，削弱巨噬细胞的m2细胞表型。

2、由此，本发明公开了以下几种可使tnbc患者获益的技术方案：

3、1.rna甲基化阅读蛋白ythdf2重编程巨噬细胞作为预测三阴性乳腺癌化疗疗效和预后标志物方面的用途；及其在制备预测三阴性乳腺癌化疗疗效和预后检测试剂盒中的应用。

4、3.rna甲基化阅读蛋白ythdf2sirna在制备抑制三阴性乳腺癌肿瘤细胞药物中的应用。

5、本发明rna甲基化阅读蛋白ythdf2sirna的序列，包括以下三种：

6、1.siythdf2-712：

7、正义链：gggauugacuucucagcautt(seq id no.1)，

8、反义链：augcugagaagucaauccctt(seq id no.2)；

9、2.siythdf2-1839：

10、正义链：ggacguucccaauagccaatt(seq id no.3)，

11、反义链：uuggcuauugggaacgucctt(seq id no.4)；

12、3.siythdf2-1459：

13、正义链：gguucuggaucuacuccuutt(seq id no.5)，

14、反义链：aaggaguagauccagaacctt(seq id no.6)。

15、4.rna甲基化阅读蛋白ythdf2sirna修饰的巨噬细胞在制备抑制三阴性乳腺癌肿瘤细胞药物中的应用。

16、相对于现有技术，本发明以rna甲基化阅读蛋白ythdf2重编程巨噬细胞作为预测三阴性乳腺癌化疗疗效和预后标志物，通过将ythdf2 sirna输送到巨噬细胞诱导m1型巨噬细胞表型，削弱巨噬细胞的m2细胞表型，激活巨噬细胞与其他自然杀伤细胞互作对肿瘤细胞的杀伤能力。有望为tnbc患者的治疗提供新的治疗方法，为其疗效及预后预测提供新方案。

技术特征：

1.rna甲基化阅读蛋白ythdf2重编程巨噬细胞作为预测三阴性乳腺癌化疗疗效和预后标志物的用途。

2.rna甲基化阅读蛋白ythdf2重编程巨噬细胞在制备预测三阴性乳腺癌化疗疗效和预后检测试剂盒中的应用。

3.rna甲基化阅读蛋白ythdf2sirna在制备抑制三阴性乳腺肿瘤细胞药物中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征于：所述的rna甲基化阅读蛋白ythdf2sirna序列如下所示：

5.rna甲基化阅读蛋白ythdf2sirna修饰的巨噬细胞在制备抑制三阴性乳腺癌肿瘤细胞药物中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征于：所述的rna甲基化阅读蛋白ythdf2sirna序列如下所示：

技术总结
本发明属于生物制药和检测领域。本发明公开了RNA甲基化阅读蛋白YTHDF2重编程巨噬细胞作为预测三阴性乳腺癌化疗疗效和预后标志物方面的用途。及RNA甲基化阅读蛋白YTHDF2siRNA经RNA甲基化阅读蛋白YTHDF2siRNA修饰的巨噬细胞在制备抑制三阴性乳腺癌肿瘤细胞药物中的应用。相对于现有技术，本发明以RNA甲基化阅读蛋白YTHDF2重编程巨噬细胞作为预测三阴性乳腺癌化疗疗效和预后标志物，通过将YTHDF2siRNA输送到巨噬细胞诱导M1型巨噬细胞表型，削弱巨噬细胞的M2细胞表型，激活巨噬细胞与其他自然杀伤细胞互作对肿瘤细胞的杀伤能力。有望为TNBC患者的治疗提供新的治疗方法，为其疗效及预后预测提供新方案。

技术研发人员：姚燕丹,靳浩,黄建东,陈玥
受保护的技术使用者：中山大学孙逸仙纪念医院
技术研发日：
技术公布日：2024/2/21