一种裂蹄木层孔菌的miR-CM4及其应用的制作方法

：本发明属于生物技术和医学领域，涉及一种来自裂蹄木层孔菌的mirna，具体为mir-cm4的分离和鉴定，以及应用。

背景技术

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背景技术：

1、皮肤是人体的第一道防线，最易受到外界环境的影响而导致皮肤受损、炎症或者老化。当出现外界刺激时，例如空气污染物等刺激源的接触、紫外线、物理损伤等，皮肤的免疫系统会启动信号，释放出各种各样的炎症因子，引起血流加快、血管的通透性增加，导致皮肤出现炎症反应，症状可能包括发红、发热、瘙痒、敏感和肿胀等。紫外线对皮肤最明显的急性作用之一是诱导炎症。uvb在皮肤中诱导细胞因子、血管活性和神经活性介质的级联反应，共同导致炎症反应并导致“晒伤”。由于经常接触不同的刺激物和过敏原，许多人都患有皮肤炎症，如果不及时治疗，可能会导致严重的健康问题。现代社会，随着人们对护肤重要性不断了解，对护肤知识不断增加，护肤已成为一种日常，且抗炎修复产品已经逐渐作为人们日常使用的化妆品之一。因此，探究和开发抗炎症的护肤品的原料和机制有着较大的现实意义。

2、脂多糖(lps)主要由脂质和多糖组成，是革兰氏阴性菌细胞壁外壁的一种成分，是一种常见的内毒素。它可以通过细胞信号转导系统激活单核巨噬细胞、内皮细胞和上皮细胞等，合成和释放多种细胞因子和炎症介质，进而引起一系列炎症反应，导致炎症的出现。利用lps诱导细胞炎症是细胞炎症造模的方法之一。此外，紫外线照射后，表皮细胞层数以及表皮厚度都会增加，形成更多的死皮，从而加重毛囊的堵塞程度，使得痘痘的炎症恶化。uv辐照可以模拟日晒刺激，构建炎症或者衰老模型。

3、裂蹄木层孔菌是一种典型的药用真菌，含有多糖，多酚，黄酮等化合物。越来越多的研究表明，裂蹄木层孔菌在抗肿瘤，保肝，减轻炎症反应，控制血糖等方面发挥着显著的调控作用。例如，从它身上分离的多糖可以抑制细胞中各种炎症因子的表达。此外，其水溶性提取物在特应性皮炎中发挥免疫调节作用。裂蹄木层孔菌提取物被列入已使用化妆品原料目录(2021年版)。目前，裂蹄木层孔菌提取物现已经被用于各种护肤品和化妆品的配方中。

4、microrna(mirna)是一类长度约为19-25nt的内源性非编码rna。mirna参与基因转录后调控，能够调节细胞和机体的生长，发育，并与人类的疾病相关。越来越多的研究表明，外源性的植物mirnas可以调节哺乳动物靶基因的表达，实现跨界调控。例如，张辰宇发现金银花中的mir2911可以被小鼠吸收，通过靶向甲流病毒而抑制病毒复制。本技术发现裂蹄木层孔菌中的mirna能够对人源的皮肤细胞进行跨界调节，发挥抵抗炎症的活性。这在抗炎护肤品的研发中有巨大的潜在应用价值。

技术实现思路

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技术实现要素：

1、本发明的目的是提供一种裂蹄木层孔菌的mirna，分别为mir-cm2、mir-cm3、mir-cm4、mir-cm5及其应用，其中mir-cm2、mir-cm3、mir-cm4、mir-cm5均可减少炎症模型中炎症因子的表达，在抗炎护肤品的开发和应用中有潜在的价值。

2、本发明提供的技术方案之一，是一种来自裂蹄木层孔菌的mirna，分别为mir-cm2、mir-cm3、mir-cm4或mir-cm5；

3、所述mir-cm2，具有seq id no.1所示的核苷酸序列；

4、所述mir-cm3，具有seq id no.2所示的核苷酸序列；

5、所述mir-cm4，具有seq id no.3所示的核苷酸序列；

6、所述mir-cm5，具有seq id no.4所示的核苷酸序列；

7、进一步地，所述mir-cm2的前体序列mir-cm2，具有seq id no.5所示的核苷酸序列；

8、进一步地，所述mir-cm3的前体序列mir-cm3，具有seq id no.6所示的核苷酸序列；

9、进一步地，所述mir-cm4的前体序列mir-cm4，具有seq id no.7所示的核苷酸序列；

10、进一步地，所述mir-cm5的前体序列mir-cm5，具有seq id no.8所示的核苷酸序列；

11、进一步地，编码所述前体序列mir-cm2的dna，具有seq id no.9所示的核苷酸序列；

12、进一步地，编码所述前体序列mir-cm3的dna，具有seq id no.10所示的核苷酸序列；

13、进一步地，编码所述前体序列mir-cm4的dna，具有seq id no.11所示的核苷酸序列；

14、进一步地，编码所述前体序列mir-cm5的dna，具有seq id no.12所示的核苷酸序列。

15、本发明提供的技术方案之二，是上述mir-cm2、mir-cm3、mir-cm4或mir-cm5的应用；

16、进一步地，所述应用是mir-cm2、mir-cm3、mir-cm4或mir-cm5在护肤品、化妆品或美妆产品中的应用，以及在制备预防或治疗光老化产品中的应用，特别是在制备抗炎产品中的应用。

17、本发明提供的技术方案之三，是含有上述mir-cm2，或mir-cm3，或mir-cm4，或mir-cm5的皮肤外用剂；

18、进一步地，所述皮肤外用剂包括但不限于护肤品、化妆品、或涂抹剂等；

19、所述涂抹剂包括但不限于油剂、水剂、膏剂或凝胶剂等；

20、进一步地，所述的mir-cm2，或mir-cm3，或mir-cm4，或mir-cm5在皮肤外用剂中的添加量为0.2％-5％(重量百分比)；

21、进一步地，所述皮肤外用剂以水、精华液、凝胶、乳液、肌底液或霜中至少一种形式存在；

22、进一步地，一种含有mir-cm2的乳液，包含如下成分(按重量百分比计)：edta二钠0.01-0.05％，甘油2-5％，黄原胶0.05-0.2％，对羟基苯乙酮0.1-0.3％，montanov l-乳化剂0.5-3％，arlacel170乳化剂0.5-3％，甘油硬脂酸酯0.1-0.5％，鲸蜡硬脂醇0.5-3％，辛酸/癸酸甘油三酯2-6％，聚二甲基硅氧烷0.5-3％，甲基丙二醇0.1-0.5％，聚乙烯亚胺-1500 0.5-3％，透明质酸钠0.5-3％，mir-cm2 0.2-5％，余量为去离子水；

23、更进一步地，上述乳液中添加的mir-cm2，可以是单链核酸分子，也可以是双链核酸分子；所述单链核酸分子是根据seq id no.1中的核苷酸序列合成的核酸分子；所述双链核酸分子是根据seq id no.1中的核苷酸序列及其互补序列合成的双链核酸分子；

24、进一步地，一种含有mir-cm3的乳液，包含如下成分(按重量百分比计)：edta二钠0.01-0.05％，甘油2-5％，黄原胶0.05-0.2％，对羟基苯乙酮0.1-0.3％，montanov l-乳化剂0.5-3％，arlacel170乳化剂0.5-3％，甘油硬脂酸酯0.1-0.5％，鲸蜡硬脂醇0.5-3％，辛酸/癸酸甘油三酯2-6％，聚二甲基硅氧烷0.5-3％，甲基丙二醇0.1-0.5％，聚乙烯亚胺-1500 0.5-3％，透明质酸钠0.5-3％，mir-cm3 0.2-5％，余量为去离子水；

25、更进一步地，上述乳液中添加的mir-cm3，可以是单链核酸分子，也可以是双链核酸分子；所述单链核酸分子是根据seq id no.2中的核苷酸序列合成的核酸分子；所述双链核酸分子是根据seq id no.2中的核苷酸序列及其互补序列合成的双链核酸分子；

26、进一步地，一种含有mir-cm4的乳液，包含如下成分(按重量百分比计)：edta二钠0.01-0.05％，甘油2-5％，黄原胶0.05-0.2％，对羟基苯乙酮0.1-0.3％，montanov l-乳化剂0.5-3％，arlacel170乳化剂0.5-3％，甘油硬脂酸酯0.1-0.5％，鲸蜡硬脂醇0.5-3％，辛酸/癸酸甘油三酯2-6％，聚二甲基硅氧烷0.5-3％，甲基丙二醇0.1-0.5％，聚乙烯亚胺-1500 0.5-3％，透明质酸钠0.5-3％，mir-cm4 0.2-5％，余量为去离子水；

27、更进一步地，上述乳液中添加的mir-cm4，可以是单链核酸分子，也可以是双链核酸分子；所述单链核酸分子是根据seq id no.3中的核苷酸序列合成的核酸分子；所述双链核酸分子是根据seq id no.3中的核苷酸序列及其互补序列合成的双链核酸分子；

28、进一步地，一种含有mir-cm5的乳液，包含如下成分(按重量百分比计)：edta二钠0.01-0.05％，甘油2-5％，黄原胶0.05-0.2％，对羟基苯乙酮0.1-0.3％，montanov l-乳化剂0.5-3％，arlacel170乳化剂0.5-3％，甘油硬脂酸酯0.1-0.5％，鲸蜡硬脂醇0.5-3％，辛酸/癸酸甘油三酯2-6％，聚二甲基硅氧烷0.5-3％，甲基丙二醇0.1-0.5％，聚乙烯亚胺-1500 0.5-3％，透明质酸钠0.5-3％，mir-cm5 0.2-5％，余量为去离子水；

29、更进一步地，上述乳液中添加的mir-cm5，可以是单链核酸分子，也可以是双链核酸分子；所述单链核酸分子是根据seq id no.4中的核苷酸序列合成的核酸分子；所述双链核酸分子是根据seq id no.4中的核苷酸序列及其互补序列合成的双链核酸分子；

30、优选地，mir-cm2(或mir-cm3或mir-cm4或mir-cm5)的添加量为0.5-1％；

31、优选地，所述含有mir-cm2(或mir-cm3或mir-cm4或mir-cm5)的乳液，包含如下成分(按重量百分比计)：edta二钠0.03％，甘油4％，黄原胶0.1％，对羟基苯乙酮0.2％，montanov l-乳化剂1％，arlacel170乳化剂1％，甘油硬脂酸酯0.3％，鲸蜡硬脂醇1％，辛酸/癸酸甘油三酯4％，聚二甲基硅氧烷1％，甲基丙二醇0.35％，聚乙烯亚胺-1500 1％，透明质酸钠1％，mir-cm2(或mir-cm3或mir-cm4或mir-cm5)0.75％，余量为去离子水。

32、本发明提供的技术方案之四，是上述含有mir-cm2，或mir-cm3，或mir-cm4，或mir-cm5的皮肤外用剂的应用，特别是上述含有mir-cm2，或mir-cm3，或mir-cm4，或mir-cm5的乳液的应用，所述乳液可以抵抗紫外线诱导的炎症，减少由于紫外辐照导致的表皮厚度的增加。

33、本发明的有益效果：

34、本发明筛选出了一种新型裂蹄木层孔菌mirna(mir-cm2、mir-cm3、mir-cm4、mir-cm5)及其前体mir-cm2，mir-cm3，mir-cm4，mir-cm5。mir-cm2/cm3/cm4/cm5有良好的抗炎活性，将mir-cm2/cm3/cm4/cm5在皮肤细胞或者组织中应用，可以抵抗脂多糖(lps)及紫外线辐照诱导的炎症反应，降低炎症因子的表达。

35、本发明提供了一种含有mir-cm2、mir-cm3、mir-cm4或mir-cm5基础护肤品的配方，且证实其具有抗炎功效。为抗炎症护肤品的开发提供新的研究方向和研发基础。

36、本发明公开的mir-cm2、mir-cm3、mir-cm4或mir-cm5，可以为裂蹄木层孔菌提取物抗炎症护肤品的研究提供机制支持，为抗炎症护肤品研发提供更广阔的空间。