一种提高中国被毛孢菌丝体产量的方法

本发明属于食用菌栽培领域，具体涉及一种提高冬虫夏草无性型中国被毛孢菌丝体产量的方法。

背景技术：

1、冬虫夏草(ophiocordyceps sinensis)是蝙蝠蛾幼虫被冬虫夏草菌(中国被毛孢)感染后，从无性生长到有性阶段的整个周期。冬虫夏草通过中国被毛孢子囊孢子来侵染蝙蝠蛾幼虫，之后子囊孢子在虫体内部持续生长繁殖，并进一步的增殖分化形成菌丝体，菌丝体不断生长占满整个寄主幼虫体腔，致使蝙蝠蛾幼虫成为僵死幼虫(冬虫)，来年春夏季，子座会恢复生长发育，逐渐从幼虫头部开始生长，破土而出形如小草(夏草)。

2、中国被毛孢(hirsutella sinensis)是冬虫夏草中一种优势无性型。由于冬虫夏草资源稀缺，市场需求量大，导致冬虫夏草自然资源受到威胁，因而利用中国被毛孢进行菌丝体发酵来获取次级代谢产物，从而代替天然冬虫夏草。中国被毛孢生长速度十分缓慢，且培养条件要求低温。因其菌丝体获取过程较为不易，因此主要需要通过在培养过程中加入诱导剂来促进其菌丝体生长，加快生长速度，提高菌丝体产量。

3、菌丝体得率是中国被毛孢液体培养过程中有效评价指标之一，提高菌丝体产量可有效缓解天然冬虫夏草资源紧缺问题。因此，需要研发一种利于菌丝体生长的中国被毛孢的液体培养基。

技术实现思路

1、为了克服现有真菌培养基的不足之处，本发明提供了一种中国被毛孢液体培养基及其培养方法，采用廉价易得的材料，一般菌种培养设备的实验室均可实现制作。

2、本发明是通过如下技术方案实施的：

3、本发明提供一种提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，所述方法为：将中国被毛孢种子液接种到中国被毛孢液体培养基a中第一段避光培养至od600达0.8-1.2，加入终浓度为1-3mm的诱导剂，第二段避光培养，得到中国被毛孢菌丝体；所述诱导剂为蜕皮激素或n-乙酰氨基葡萄糖中的一种或两种，优选为n-乙酰氨基葡萄糖。

4、进一步，所述中国被毛孢液体培养基a由以下终浓度的各组分组成：葡萄糖15g/l、蛋白胨10g/l、糊精5g/l、酵母粉5g/l、kh2po4 1.2g/l、无水mgso4 0.6g/l，溶剂为水。

5、在本发明的一个实施例中，所述第一段避光培养的温度为16℃，转速为100rpm。

6、在本发明的一个实施例中，所述第二段避光培养的温度为16℃，转速为100rpm。

7、在本发明的一个实施例中，所述第二段避光培养的时间为7天。

8、优选地，所述诱导剂以2mm的终浓度加入。

9、进一步，所述中国被毛孢种子液按本领域常规方法得到，具体地，所述中国被毛孢种子液按如下方法制备：将中国被毛孢菌涂布于固体pda培养基，培养至长满菌丝体，挑取大小为1cm2菌块，接种于中国被毛孢液体培养基b中培养9-11天，得到所述中国被毛孢种子液。

10、更进一步，所述固体pda培养基由以下终浓度的各组分组成：马铃薯200g/l，葡萄糖20g/l，琼脂粉15g/l，溶剂为水。

11、更进一步，所述中国被毛孢液体培养基b由以下终浓度的各组分组成：葡萄糖15g/l、蛋白胨10g/l、糊精5g/l、酵母粉5g/l、kh2po4 1.2g/l、无水mgso4 0.6g/l，溶剂为水。上述中国被毛孢液体培养基a、b只是为了区分不同阶段加入的中国被毛孢液体培养基，方便描述，无其他特殊含义。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明提供的提高中国被毛孢菌丝体的方法，能够大规模推广使用。

13、本发明与传统的培养基和培养方法相比，制作方法简易，中国被毛孢菌丝体生长更好，能高效应用于中国被毛孢菌丝体的培养。

技术特征：

1.一种提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于所述方法为：将中国被毛孢种子液接种到中国被毛孢液体培养基a中第一段避光培养至od600达0.8-1.2，加入终浓度为1-3mm的诱导剂，第二段避光培养，得到中国被毛孢菌丝体；所述诱导剂为蜕皮激素或n-乙酰氨基葡萄糖中的一种或两种。

2.如权利要求1所述的提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于：所述中国被毛孢液体培养基a由以下终浓度的各组分组成：葡萄糖15g/l、蛋白胨10g/l、糊精5g/l、酵母粉5g/l、kh2po4 1.2g/l、无水mgso4 0.6g/l，溶剂为水。

3.如权利要求1所述的提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于：所述第一段避光培养的温度为16℃，转速为100rpm。

4.如权利要求1所述的提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于：所述第二段避光培养的温度为16℃，转速为100rpm。

5.如权利要求1所述的提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于：所述第二段避光培养的时间为7天。

6.如权利要求1所述的提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于：所述诱导剂以2mm的终浓度加入。

7.如权利要求1所述的提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于：所述诱导剂为n-乙酰氨基葡萄糖。

8.如权利要求1所述的提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于所述中国被毛孢种子液按如下方法制备：将中国被毛孢菌涂布于固体pda培养基，培养至长满菌丝体，挑取大小为1cm2菌块，接种于中国被毛孢液体培养基b中培养9-11天，得到所述中国被毛孢种子液。

9.如权利要求8所述的提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于：所述固体pda培养基由以下终浓度的各组分组成：马铃薯200g/l，葡萄糖20g/l，琼脂粉15g/l，溶剂为水。

10.如权利要求8所述的提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，其特征在于所述中国被毛孢液体培养基b由以下终浓度的各组分组成：葡萄糖15g/l、蛋白胨10g/l、糊精5g/l、酵母粉5g/l、kh2po4 1.2g/l、无水mgso4 0.6g/l，溶剂为水。

技术总结
本发明公开一种提高中国被毛孢菌丝体产量的方法，所述方法为：将中国被毛孢种子液接种到中国被毛孢液体培养基A中第一段避光培养至OD600达0.8‑1.2，加入终浓度为1‑3mM的诱导剂，第二段避光培养，得到中国被毛孢菌丝体；所述诱导剂为蜕皮激素或N‑乙酰氨基葡萄糖中的一种或两种。本发明与传统的培养基和培养方法相比，制作方法简易，中国被毛孢菌丝体生长更好，能高效应用于中国被毛孢菌丝体的培养。

技术研发人员：柳志强,杨雨瑞,赵嫚,江振豪,郑裕国
受保护的技术使用者：浙江工业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/5