一种三七多糖的制备方法及其产品和应用与流程

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种三七多糖的制备方法及其产品和应用。

背景技术：

1、皮肤是人体最大的器官，维持着人体的完整性和功能稳态，是抵御病原体、紫外线、和理化物质的第一道防线。皮肤的生理屏障功能主要由表皮完成，表皮位于皮肤的最外层，具有防止病原体侵害的生物屏障、机械损伤的物理屏障以及具有抗菌活性的生化屏障。其中角质层在维持皮肤屏障功能的完整性方面起着重要作用，角质层是由角质细胞分化形成并不断更新的，在整个角质化过程中，角质细胞形成富含蛋白质和脂质的外包膜，这种结构是由几种蛋白质构成的，其中丝聚蛋白(flg)及其代谢物是维持正常皮肤屏障功能的关键成分，flg和兜甲蛋白(lor)通过角蛋白与角质层相连，构成稳定的机械结构，随着角质细胞迁移过程，flg能够被酶降解，进一步解离成吡咯烷羧酸(pca)，pca是天然保湿因子(nmf)的主要成分，因此，flg在保湿、屏障完整性方面有重要作用；水通道蛋白-3(aqp3)不仅能够增加皮肤水合能力，在皮肤损伤、伤口修复上面也发挥着重要作用。除物理屏障外，角质细胞在分化过程中合成并分泌多种抗菌肽amps，amps与脂质膜相互作用并结合，当微生物与表皮接触时，能够快速消灭微生物。此外，角质细胞能够分泌相关的amps，例如β-防御素(hbd-1、hbd-2、hbd-3)及抗菌肽ll-37，当皮肤屏障受到破坏或病原体入侵时，能够快速发生免疫反应，保护皮肤免受侵害。

2、三七为五加科人参属植物三七panax notoginseng(burk.)f.h.chen的干燥根及根茎，具有散瘀止血，消肿定痛之功，药用历史悠久，且使用价值极高。目前三七的研究主要集中在皂苷类成分，具有促进血液循环、改善心肌缺血、抗心律失常、抗休克、镇静、抗衰老、抗肿瘤等方面的作用。

3、目前三七多糖方面的应用大多集中在抗肿瘤、免疫调节、保护肝损伤方面的应用，如cn109354629a提供了一种中性三七多糖在治疗骨髓抑制、免疫力低下及联合治疗肿瘤的新药和保健食品方面的应用；cn102585029b发现了一种三七多糖具有免疫调节、保肝、促进骨缺损修复、抑制肿瘤、降低血糖、抗病毒等作用。以上三七活性多糖的研究均是在药品及保健产品的应用领域，而化妆品方面的应用研究较少，cn115141289b提供了一种酸性三七多糖及其制备方法与应用，所述三七多糖具有美白、抗氧化的功效，但是该目标多糖仅为三七酸性多糖，具有低产率的缺点，且制备过程需长时间透析除盐，具有生产效率低的问题，不利于产业化。

4、综上，皮肤屏障是维持皮肤健康的重要机制，因此保护皮肤屏障是解决皮肤问题的重要手段，我们有义务寻找一种低毒且高效的活性物质来提供解决肌肤问题的答案。三七多糖作为三七药材中的活性成分之一，具有低毒性、作用显著的特点，在化妆品领域具有极大的应用潜力，但大分子多糖类成分具有溶解性差、生物利用度差、难应用的特点，这是对其开发利用亟待解决的问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种三七多糖的制备方法及其产品和应用。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种三七多糖的制备方法，所述制备方法包括：

4、(1)将三七与乙醇水溶液混合提取后得到的三七残渣用水加热回流提取，得到提取液；

5、(2)将提取液减压抽滤，再与絮凝剂混合，抽滤，收集滤液；

6、(3)将滤液与乙醇混合，离心，收集沉淀；

7、(4)将沉淀与酶混合酶解，离心，即得。

8、采用本发明所述方法进行三七多糖的制备，所得产物中三七多糖的含量较高，且酶解工艺不仅可以进一步改善三七多糖的溶解度，提高三七多糖的生物利用度，还提升了三七多糖对皮肤屏障的保护作用。

9、优选地，步骤(1)乙醇水溶液中乙醇的质量百分含量为80-90％，例如80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

10、本发明采用80-90％乙醇能够最大程度地提取出小分子药用成分后再将其药渣用水进行加热回流提取，再次开发利用，使三七药材的药用价值充分发挥，实现可持续利用，且该浓度下的乙醇能够较大程度地去除单糖、蔗糖等非活性物质。

11、优选地，所述三七残渣与水的质量比为1:(10-20)，其中(10-20)中的具体点值均可选择10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

12、优选地，所述提取的时间独立地为1-2h，例如1h、1.1h、1.2h、1.3h、1.4h、1.5h、1.6h、1.7h、1.8h、1.9h、2h等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

13、优选地，所述提取的次数为1-3次，例如1次、2次、3次等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

14、优选地，所述絮凝剂的质量为提取液质量的0.5-1％，例如0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

15、优选地，所述絮凝剂包括壳聚糖、柠檬酸、卡拉胶或明胶中的任意一种或至少两种的组合。

16、优选地，所述絮凝剂为壳聚糖和柠檬酸的组合。

17、优选地，所述絮凝剂中壳聚糖和柠檬酸的质量比为1:(1-2)，其中(1-2)中的具体点值均可选择1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

18、优选地，步骤(3)中乙醇终浓度为40-60％，例如40％、42％、45％、48％、50％、52％、55％、58％、60％等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

19、优选地，步骤(4)所述酶包括β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、果胶酶中的任意一种或至少两种的组合。

20、优选地，步骤(4)所述酶为β-葡萄糖苷酶和纤维素酶的组合。

21、优选地，所述β-葡萄糖苷酶和纤维素酶的质量比为1:(0.1-1)，其中(0.1-1)中的具体点值均可选择0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

22、优选地，步骤(4)所述酶的添加量为0.5％-2％，例如0.5％、0.6、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，再次便不再一一赘述。

23、优选地，步骤(4)所述酶解的时间为1-2h，温度为40-50℃。

24、所述酶解的时间可以选择1h、1.1h、1.2h、1.3h、1.4h、1.5h、1.6h、1.7h、1.8h、1.9h、2h等，温度可以选择40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，再次便不再一一赘述。

25、优选地，步骤(4)所述酶解的ph值为5-6，例如5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，再次便不再一一赘述。

26、优选地，步骤(4)所述酶解后还包括灭酶。

27、第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的三七多糖的制备方法制备得到的三七多糖。

28、第三方面，本发明提供一种根据第二方面所述的三七多糖在制备具有皮肤屏障保护功能化妆品方面的应用。

29、本发明首次发现，三七多糖能够上调皮肤屏障相关基因的表达，且用40％乙醇水醇沉得到的三七多糖经过酶解聚处理后能够同时调控皮肤屏障关键基因flg、lor、aqp3、hbd-1、hbd-3及ll-37的表达，可协同进行皮肤屏障的保护功能，在化妆品中具有较强应用潜力。

30、优选地，所述具有皮肤屏障保护功能化妆品中三七多糖的添加量为1-10％，例如1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、10％等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

31、优选地，所述化妆品包括乳液、膏霜、喷雾或面膜。

32、与现有技术相比，本发明有以下有益效果：

33、第一方面，本发明采用80-90％乙醇水提取，能够最大程度地提取小分子药用成分，保证三七药用成分的充分利用。除此之外，80-90％乙醇水能够除去三七中单糖、蔗糖等非活性物质，保证残渣中多糖提取物的功效发挥，最终实现可持续利用。

34、第二方面，本发明提供一种具有皮肤屏障保护功能的三七多糖的制备方法，该制备方法采用酶解聚处理，将提取出的三七多糖聚合物解聚成更小片段的聚合物，改善其溶解性，提高多糖的生物利用度，该技术可解决大分子多糖的溶解困难导致的产品应用问题。

35、第三方面，本发明提供一种根据第二方面所述的三七多糖在制备具有皮肤屏障保护功能化妆品方面的应用。本发明首次发现，三七多糖能够上调皮肤屏障相关基因的表达，且用40％乙醇水醇沉得到的三七多糖经过酶解聚处理后能够得到更高活性的多糖聚合物，可同时调控皮肤屏障关键基因flg、lor、aqp3、hbd-1、hbd-3及ll-37的表达，协同进行皮肤屏障的保护作用，在化妆品中具有较强应用潜力。