一株携带MfPV1病毒的金龟子绿僵菌菌株IPPMa818V及其应用

本发明属于生物，具体涉及一种mfpv1的金龟子绿僵菌菌株及其应用。

背景技术：

1、草地贪夜蛾(spodoptera frugiperda)是鳞翅目夜蛾科灰翅夜蛾属的一种蛾。草地贪夜蛾又叫诱蛾，伪黏虫、秋行军虫、秋粘虫、草地夜蛾等。草地贪夜蛾是杂食性害虫，可取食玉米、水稻、谷子、小麦、高粱、甘蔗以及棉花、甘薯、马铃薯、花生、甘蓝等作物或蔬菜。该害虫在玉米上造成的危害最为严重，据统计，玉米发育中后期55-100％的植株感染该害虫时产量损失可达15-73％。草地贪夜蛾对传统的有机磷类农药、有机氯类农药以及拟除虫菊酯类农药已产生了很高的抗药性，此外由于其繁殖速度快，世代重叠现象严重，适应性强，给防治工作带来巨大挑战。

2、小菜蛾(plutella xylostella l.)俗称菜蛾、吊丝虫、方块蛾、小青虫、两头尖等，属鳞翅目菜蛾科，是十字花科蔬菜的主要害虫之一。分布于世界各地，国内各省蔬菜栽培区均有发生，以南方菜区为重。寡食性，主要为害大白菜、花椰菜、萝卜、包心菜等，其次是青菜、小白菜等。其繁殖力强，世代周期短，小菜蛾成虫具有趋光性，昼伏夜出，易产生抗药性。小菜蛾对蔬菜的为害，苗期主要是为害心叶，形成秃顶苗，中后期则钻蛀叶球和心部，在留种菜上则为害嫩茎、幼荚和籽粒，对十字花科蔬菜的产量和品质带来极大的威胁。

3、昆虫病原真菌等微生物资源丰富，是自然生态系统中的重要组成，在生态防控中具有良好的应用前景。昆虫病原真菌菌剂具有对人畜无害、不污染环境、无残留、害虫不会产生抗药性等优点，在农、林和经济作物的病虫害防治中具有明显的优势。绿僵菌属于真菌门(eumycota)、球壳菌目(sphaeriales)、绿僵菌属(metarhizium)，是一种重要的生防真菌，能寄生鞘翅目、鳞翅目、半翅目等200余种昆虫，绿僵菌侵染寄主昆虫时，通过分生孢子附着在昆虫体表，孢子萌发后产生入侵菌丝，穿过体壁，在虫体内大量繁殖，最终导致寄主死亡。绿僵菌属共含12个种，分别为金龟子绿僵菌(m.anisopliae)、黄绿绿僵(m.flavoviride)、白色绿僵菌(m.ablum)、棕色绿僵菌(m.brunneum)、贵州绿僵菌(m.guizhouense)、平沙绿僵菌(m.pingshaense)、柱孢绿僵菌(m.cylindrosporum)、蝗绿僵菌(m.acridum)、大孢绿僵菌(m.majus)、耐寒绿僵菌(m.frigidum)、鳞翅目绿僵菌(m.lepidiotae)和球孢绿僵菌(m.globosum)。其中金龟子绿僵菌(metarhiziumanisopliae)做为绿僵菌中的重要种类，在蛴螬、蝼蛄、金针虫、地老虎等害虫种群的生物防治中具有重要作用。具有安全、易在害虫种群中流行、环境友好、不易产生抗药性等优点。然而，对于侵染草地贪夜蛾的金龟子绿僵菌菌株及其应用的系统研究还为数不多。

4、双分病毒(partitivirus)是属于双分病毒科(partitiviridae)双分病毒属(partitivirus)的一类真菌病毒。本发明人前期从罹病灰飞虱体内分离出一种黄绿绿僵菌(metarhizium flavoviridae)菌株，从该菌株中发现一种双分病毒，命名为黄绿绿僵菌双分病毒1(metarhizium flavoviridae partitivirus，mfpv1)，利用多序列比对和系统发育分析，证实mfpv1是双分病毒科(partitiviridae)丙型双分病毒属(gammapartitivirus)的新种。

技术实现思路

1、本发明的目的提供一株含双分病毒mfpv1的金龟子绿僵菌菌株ippma818v,即通过peg介导转化，将mfpv1转化到金龟子绿僵菌菌株中。

2、本发明还提供该菌株ippma818v的应用。室内浸叶饲喂法和浸虫法测定其对草地贪夜蛾和小菜蛾幼虫的致死效果，发现mfpv1能够使金龟子绿僵菌菌株对草地贪夜蛾和小菜蛾等昆虫宿主的致病力提高，在草地贪夜蛾和小菜蛾的生防菌剂开发中具有良好的潜力。

3、一株携带mfpv1病毒的金龟子绿僵菌菌株ippma818v，其保藏号为cgmccno.40814。

4、金龟子绿僵菌菌株ippma818v的构建方法，将mfpv1病毒通过peg介导转化至金龟子绿僵菌菌株中，得到金龟子绿僵菌菌株ippma818v。

5、所述的mfpv1病毒内生于分离自河南开封水稻田灰飞虱成虫僵虫的黄绿绿僵菌ippmf818v菌株中，病毒纯化后通过peg介导转化至金龟子绿僵菌菌株中，所述黄绿绿僵菌菌株ippmf818v的保藏号为cgmcc no.40904。

6、金龟子绿僵菌菌株ippma818v在生物防治中的应用。

7、所述的生物防治为防治草地贪夜蛾和小菜蛾。

8、本发明从罹病灰飞虱上分离的黄绿绿僵菌(metarhizium flavoviridae)ippmf818v菌株，保藏编号cgmcc no.40904。从该菌株中又鉴定出一种新的双分病毒，即黄绿绿僵菌双分病毒(metarhizium flavoviridae partitivirus 1，mfpv1)。该病毒对草地夜蛾、小菜蛾等无杀灭效果。

9、通过peg介导转化，将mfpv1转化到金龟子绿僵菌菌株，成功创制了高毒力新菌株ippma818v。通过毒力测定实验，评价含mfpv1的金龟子绿僵菌菌株ippma818v的杀虫效果，发现mfpv1能够使金龟子绿僵菌菌株的孢子产量和对草地贪夜蛾和小菜蛾等昆虫宿主的毒力显著提高，在草地贪夜蛾和小菜蛾的生防菌剂开发中具有良好的潜力。

10、本发明具有以下优点：(1)金龟子绿僵菌作为微生物源农药，具有环境友好，对人畜无害，害虫不易产生抗药性等优点。(2)内生病毒mfpv1能够使金龟子绿僵菌对昆虫宿主的毒力显著提高，具有开发成微生物菌剂增强剂的潜力。(3)分别应用5×108孢子/ml和5×107孢子/ml的ippma818v孢子悬浮液以浸叶饲喂法和浸虫法处理草地贪夜蛾和小菜蛾可以起到较好的生物防治效果。

11、金龟子绿僵菌菌株ippma818v保藏信息：

12、保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

13、菌种分类命名：金龟子绿僵菌(metarhizium anisopliae)。

14、菌种保藏号：cgmcc no.40814；

15、保藏地址：中国，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所

16、保藏日期：2023年9月1日

17、黄绿绿僵菌菌株ippmf818v保藏信息：

18、保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

19、菌种分类命名：黄绿绿僵菌(metarhizium flavoviride)。

20、菌种保藏号：cgmcc no.40904；

21、保藏地址：中国，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所

22、保藏日期：2023年10月27日