本发明涉及一种鼠李糖基转移酶,具体涉及鼠李糖基转移酶sgt822及其应用。
背景技术:
1、硫肽类抗生素属于核糖体合成和翻译后修饰肽(ribosome synthesis andposttranslational modifiedpeptides,ripps),是一种由多种细菌产生的具有高度修饰的杂环肽类抗生素。由中心吡啶环、核心大环和尾部三部分组成(bagley mc,et al.j.chemrev.2005feb;105(2):685-714)。
2、诺西肽的结构如下
3、
4、诺西肽(nosiheptide,nos)属于e系列硫肽母体化合物,最初从精算链霉菌中分离出,对当代所有耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌均表现出极佳的抗菌活性,因其结构代表性而成为硫肽类抗生素研究中的主流(haste nm,etal.j.antibiot(tokyo)2012dec;65(12):593-8.)。虽然nos具有超强的抗菌活性,但是水溶性差和体内无活性的缺点限制了其成药开发和临床应用,结构改造以获得结构多样的类似物成为nos成药性改善的重要手段之一。但是,nos的结构过于复杂,改造难度极大,目前改造成功的例子较少,且多集中于脱氢丙氨酸侧链和侧环的修饰。
5、在nos的结构中,核心吡啶环羟基具有极好的反应活性,是理想的结构修饰位点。使用鼠李糖基转移酶对诺西肽吡啶环羟基进行糖基化形成鼠李糖基化诺西肽,增强其水溶性。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种鼠李糖基转移酶sgt822及其应用,鼠李糖基转移酶sgt822能够实现nos吡啶环羟基的区域选择性糖基化修饰。为实现上述目的,本发明所采用的技术方案具体如下:
2、1)所述鼠李糖基转移酶为来源于来源于streptomyces sp.147326的sgt822。
3、2)鼠李糖基转移酶sgt822,所述鼠李糖基转移酶sgt822的核苷酸序列如seqidno:1所述,高效催化诺西肽形成鼠李糖基化诺西肽。
4、3)鼠李糖基转移酶sgt822构建质粒。
5、4)鼠李糖基转移酶sgt822可独立或共表达于e.coli bl21(de3),,该异源表达宿主只是示例,不限定本发明范围,鼠李糖基转移酶也可以表达于乳酸菌、链霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌等。
6、5)本发明提供了一种鼠李糖基转移酶,该酶具有催化诺西肽转变为鼠李糖基化诺西肽的反应活性。
7、
8、本发明具有如下优点:
9、本发明发现了天然微生物来源的鼠李糖基转移酶sgt822是全新的酶,其结构未见文献报道,具有定向修饰诺西肽吡啶环羟基形成鼠李糖基化诺西肽的功能,即可以定点修饰,即nos存在两个羟基,本发明可以在nos吡啶环羟基的区域选择性糖基化修饰鼠李糖,另一个苏氨酸3位轻基不受影响。
10、改善了诺西肽的水溶性,为该系列其他化合物利用该位点的修饰以提高水溶性提供了一种新的方法。
1.一种鼠李糖基转移酶sgt822,其特征在于,所述鼠李糖基转移酶sgt822的核苷酸序列如seq id no.1所示,氨基酸序列如seq id no.2所示。
2.一种重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体包含权利要求1所述鼠李糖基转移酶sgt822的核苷酸序列。
3.一种工程化宿主细胞,其特征在于,重组菌或工程化宿主细胞系包含权利要求2所述重组表达载体。
4.根据权利要求3所述的工程化宿主细胞,其特征在于,所述的宿主细胞为大肠杆菌。
5.根据权利要求1所述的一种鼠李糖基转移酶sgt822或权利要求3或4所述的宿主细胞在糖基化修饰诺西肽合成鼠李糖基化诺西肽中的应用。