1.一种宫颈癌血管化类器官的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种宫颈癌血管化类器官的制备方法,其特征在于,在步骤(1)中,将宫颈癌组织标本置于预冷的dmem/f12培养基中,然后用剪刀剪碎宫颈癌组织,然后放置于胶原酶i溶液中消化,在37°c的摇床上振荡后继续用玻璃吸管对悬浮液进行机械剪切;通过70μm尼龙细胞滤网过滤细胞,1000~1500 rpm离心收集细胞并用类器官培养基洗涤;再采用红细胞裂解液裂解后用类器官培养基重悬细胞,将细胞悬液加入已提前预热的基底膜提取物的培养板中,去除未贴壁细胞,即得到宫颈癌类器官。
3.根据权利要求1所述的一种宫颈癌血管化类器官的制备方法,其特征在于,在步骤(2)中,将2~5mg/ml的胶原蛋白i溶液加入falcon管中,再添加在冰上解冻的基质胶;在细胞培养板中添加胶原蛋白i-基质胶溶液,旋转均匀后在37℃培养使其凝固,放置从宫颈癌组织中提取的肿瘤相关成纤维细胞与人脐静脉内皮细胞混合细胞,细胞数为1:1,加入stempro-34 sfm完全培养基培养以构建caf-huvec球。
4.根据权利要求1所述的一种宫颈癌血管化类器官的制备方法,其特征在于,在步骤(3)中,在8~12mg/ml胶原蛋白i溶液中加入宫颈癌类器官与caf-huvec球并将混合体系移入ep管中;宫颈癌类器官与caf-huvec球的个数比为1:1,添加stempro-34 sfm完全培养基清洗;吸取培养基,将宫颈癌类器官与caf-huvec球混合体系悬浮于胶原蛋白i-基质胶溶液中,放于冰上;在细胞培养板中添加胶原蛋白i-基质胶溶液,均匀旋转后将板在37℃下孵育使其凝固,取出带有胶原蛋白i-基质胶的细胞培养板,然后将宫颈癌类器官-caf-huvec球-胶原蛋白i-基质胶溶液加入细胞培养板中;摇动板使混合体系均匀分布在孔中,在37℃培养使凝胶固化;添加预热stempro-34 sfm完全培养基诱导血管分化;3天后更换培养基,之后每隔一天更换一次培养基,得到宫颈癌血管化类器官。