一种抗体偶联药物连接子的合成方法与流程

本发明涉及抗体偶联药物合成，特别是涉及一种抗体偶联药物连接子fmoc-val-cit-pab-pnp的合成方法。

背景技术：

1、抗体作为治疗药物的研究和临床应用由来已久。1975年，kohler和milstein在小鼠中发明了 杂交瘤技术（hybridoma technique）， 单克隆抗体疗法开始崭露头角。1986年，greg winter开创了单克隆抗体人源化技术。在此之后，数个治疗性单克隆抗体药被研发出来用于各种癌症的治疗。而随着抗体技术在过去几十年中的逐步提升，抗体偶联药物也进入了快速发展期。抗体偶联药物（antibody-drug conjugates，adc）是一类融合了抗体与小分子细胞毒素两种组分的新兴药物。其中抗体提供细胞靶向性，可以将药物比较精准的输送到靶细胞，最大限度地减少对正常组织细胞的毒性，因此在肿瘤治疗以及其他领域，如免疫、抗感染等都具有非常广阔的应用前景。 adc药物由 人源化/人源单克隆抗体（mab）、 细胞毒性荷载（cytotoxic payload或warhead）以及连接子（linker）三部分组成，抗体通过连接子与细胞毒性药物偶联，共同赋予adc细胞靶向性和杀死细胞的效力。

2、连接子（linker）是将细胞毒性荷载与单克隆抗体相连接的化学结构。连接子不仅要易于与抗体和荷载进行连接，而且建立的这种共价连接既需要在循环系统中保持稳定，又需要在靶细胞的内吞作用之后容易被水解从而释放药物有效组分。当抗体介导adc到达细胞之后，adc通过细胞内吞作用进入细胞，连接子与细胞毒性荷载的连接处通过水解等方式被切断，从而释放出细胞毒性物质以便其行使功能。按照连接子在细胞内的水解方式，可以将其分为可切割和不可切割两类。可切割连接子是通过细胞中的生理条件来释放细胞毒性物质的，依据细胞内环境的不同又可以进一步细分为酸敏感、蛋白酶敏感或谷胱甘肽敏感的可切割连接子。而不可切割的连接子只有借助细胞的溶酶体中才能被降解，因而，相比于可切割的连接子，不可切割连接子adc药物在血液中具有更长的半衰期和更低的脱靶毒性。

3、fmoc-val-cit-pab-pnp是一种可降解的多肽前体药物连接子，是抗体偶联药物(adc) 的常用连接桥，在人体血浆中有一定的稳定性。fmoc-val-cit-pab-pnp的分子式为：c40h42n6o10，结构式如下：

4、。

5、本申请发明人在实现本申请实施例中发明技术方案的过程中，发现现有fmoc-val-cit-pab-pnp在合成过程中存在收率低、成本高、杂质种类不明等问题。

技术实现思路

1、本发明通过提供一种抗体偶联药物连接子的合成方法，能够解决现有技术中存在的上述不足之处。

2、为解决上述技术问题，本发明提供了一种抗体偶联药物连接子的合成方法，包括如下步骤：

3、（1）以fmoc-val-oh为起始原料，在缩合剂的作用下，与活化试剂反应，结晶、提纯，得到化合物1，

4、

5、其中，ae为n-丁二酰亚胺基或五氟苯酚基；

6、（2）将所述化合物1在碱及缩合剂的作用下，在0～30℃下，与l-瓜氨酸进行偶联反应，萃取、提纯，得到化合物2；

7、

8、（3）将所述化合物2在缩合剂的作用下，与4-氨基苄醇反应，结晶、提纯，得到化合物3；

9、

10、（4）将所述化合物3在碱的作用下，与pnp试剂反应，结晶、提纯，得到化合物4，即为所述抗体偶联药物连接子；

11、

12、在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（1）中，所述反应的温度为20～40℃；所述活化试剂为n-羟基丁二酰亚胺或五氟苯酚。

13、在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（2）中，所述反应的温度为0～10℃；所述偶联反应的反应介质为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮或二甲基亚砜中的至少一种。

14、在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（1）～（3）中，所述缩合剂包括dic、dcc、edci、hoobt、hobt、boat、dipea、nmm、dmap、hbtu、hatu、tbtu或pybop中的任意一种；所述步骤（3）中还添加有缩合助剂hopo。

15、在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（1）、（3）和（4）中，所述结晶的方法为：向反应液中加入甲基叔丁基醚或甲基叔丁基醚与二氯甲烷的混合物，搅拌至有固体析出。所述步骤（2）中，所述萃取的方法为：调节反应液的ph值至3～4，然后加入四氢呋喃萃取，取有机相。

16、在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（4）中，所述pnp试剂包括碳酸双(4-硝基苯基)酯或氯甲酸-4-硝基苄酯中的至少一种。

17、本发明的有益效果是：本发明一种抗体偶联药物连接子的合成方法，整个合成过程条件温和，各反应步骤后处理方法简单且收率高，纯度好，产物fmoc-val-cit-pab-pnp的总收率达到58%以上，hplc纯度达到98%以上，满足医药产品的纯度要求，且适于工业化大生产。

技术特征：

1.一种抗体偶联药物连接子的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种抗体偶联药物连接子的合成方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述反应的温度为20～40℃。

3.根据权利要求1所述的一种抗体偶联药物连接子的合成方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述反应的温度为0～10℃。

4.根据权利要求1所述的一种抗体偶联药物连接子的合成方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述偶联反应的反应介质为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮或二甲基亚砜中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的一种抗体偶联药物连接子的合成方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述萃取的方法为：调节反应液的ph值至3～4，然后加入四氢呋喃萃取，取有机相，洗涤、浓缩、干燥。

6.根据权利要求1所述的一种抗体偶联药物连接子的合成方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述pnp试剂包括碳酸双(4-硝基苯基)酯或氯甲酸-4-硝基苄酯中的至少一种。

技术总结
本发明公开了一种抗体偶联药物连接子的合成方法，包括如下步骤：以Fmoc‑Val‑OH为起始原料，在缩合剂的作用下，与活化试剂反应，生成化合物1；将所述化合物1在碱及缩合剂的作用下，与L‑瓜氨酸进行偶联反应，生成化合物2；将所述化合物2在缩合剂的作用下，与4‑氨基苄醇反应，生成化合物3；将所述化合物3在碱的作用下，与PNP试剂反应，生成抗体偶联药物连接子。本发明的合成过程条件温和，各反应步骤产品的收率高，纯度好，产物Fmoc‑Val‑Cit‑PAB‑PNP的总收率达到58%以上，HPLC纯度达到98%以上，满足医药产品的纯度要求，且适于工业化大生产。

技术研发人员：徐峰,江文,唐智豪,蔡锦,马佳琪
受保护的技术使用者：瑞博（苏州）制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15