本发明涉及多肽合成,尤其涉及一种精氨酸/赖氨酸多肽的制备方法及其应用。
背景技术:
1、精氨酸/赖氨酸多肽具有非常强效的肌肉松弛作用,能够提供迅速即时的抗皱效果。而且精氨酸/赖氨酸多肽提供的是有效的肌肉放松,不会完全僵硬瘫痪,可以保留肌肉5%神经肌肉电流传导,提供的是自然的回春效果。精氨酸/赖氨酸多肽是高度折叠的胜肽,强力穿透,高稳定性,目标性的针对肌肉达到放松的作用。
2、目前,精氨酸/赖氨酸多肽可以通过化学合成法、生物技术方法,或通过具有动物、真菌、或植物来源的蛋白质的控制水解来制备。精氨酸/赖氨酸多肽的氨基酸序列短,且翻译后修饰多,使得后期的分离纯化比较困难。因此,开发一种新的合成方法显得尤为重要。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种精氨酸/赖氨酸多肽的制备方法及其应用,有效合成精氨酸/赖氨酸多肽。
2、为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
3、本发明提供了一种精氨酸/赖氨酸多肽的制备方法,包括如下步骤:
4、(1)用fmoc脱保护试剂对fmoc氨基树脂进行脱保护处理,在偶联体系作用下于偶联溶剂中从c端到n端依次连接fmoc氨基酸,合成序列为:
5、x-pglu-gly-cys(a1)-cys(a2)-asn-gly-pro-lys-gly-cys(a3)-ser-ser-lys-trp-cys(a1)-arg-asp-his-ala-arg-cys(a2)-cys(a3)的二十二肽氨基树脂;
6、(2)将步骤(1)得到的二十二肽氨基树脂进行氧化,脱去a1、a2和a3,得到氧化产物;
7、(3)将氧化产物进行裂解,得到精氨酸/赖氨酸多肽。
8、作为优选,所述步骤(1)中所述合成时采用固相合成的方法。
9、作为优选,所述步骤(1)中所述fmoc脱保护试剂为哌啶,所述脱保护处理的温度为10~15℃,脱保护处理的时间为30~40min,所述fmoc氨基树脂为rinkamide mbha树脂。
10、作为优选,所述步骤(1)中所述偶联体系为hoat和dic的组合,所述偶联溶剂为nmp,所述偶联溶剂与fmoc脱保护试剂的体积比为6~8:1。
11、作为优选,所述步骤(2)中所述氧化的方法为:将二十二肽氨基树脂在反应溶液中用碘进行氧化,所述碘和二十二肽氨基树脂的摩尔比为40~50:1,所述反应溶液为二氯甲烷和甲醇的混合溶液,所述二氯甲烷和甲醇的体积比为4~6:1。
12、作为优选,所述步骤(2)中所述氧化的时间为200~240min。
13、作为优选,所述步骤(6)中所述裂解时所用的裂解液为水、三氟乙酸和dodt的混合溶液,所述水、三氟乙酸和dodt的体积比为20~30:5~15:60~80。
14、作为优选,所述步骤(3)中所述裂解的时间为4~5h。
15、本发明还提供了所述制备方法制备的精氨酸/赖氨酸多肽。
16、本发明还提供了所述的精氨酸/赖氨酸多肽在制备化妆品中的应用。
17、本发明提供了一种精氨酸/赖氨酸多肽的制备方法及其应用,包括如下步骤:(1)用fmoc脱保护试剂对fmoc氨基树脂进行脱保护处理,在偶联体系作用下于偶联溶剂中从c端到n端依次连接fmoc氨基酸,合成二十二肽氨基树脂;(2)将步骤(1)得到的二十二肽氨基树脂进行氧化,得到氧化产物;(3)将氧化产物进行裂解,得到精氨酸/赖氨酸多肽。本发明的精氨酸/赖氨酸多肽制备方法采用固相合成的方法作为基础,能够有效合成精氨酸/赖氨酸多肽,耗时短、后处理简单、副产物少、产率高、污染小,适合大规模工业化生产。
1.一种精氨酸/赖氨酸多肽的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中所述合成时采用固相合成的方法。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中所述fmoc脱保护试剂为哌啶,所述脱保护处理的温度为10~15℃,脱保护处理的时间为30~40min,所述fmoc氨基树脂为rinkamide mbha树脂。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中所述偶联体系为hoat和dic的组合,所述偶联溶剂为nmp,所述偶联溶剂与fmoc脱保护试剂的体积比为6~8:1。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中所述氧化的方法为:将二十二肽氨基树脂在反应溶液中用碘进行氧化,所述碘和二十二肽氨基树脂的摩尔比为40~50:1,所述反应溶液为二氯甲烷和甲醇的混合溶液,所述二氯甲烷和甲醇的体积比为4~6:1。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中所述氧化的时间为200~240min。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(6)中所述裂解时所用的裂解液为水、三氟乙酸和dodt的混合溶液,所述水、三氟乙酸和dodt的体积比为20~30:5~15:60~80。
8.根据权利要求1~7任意一项所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中所述裂解的时间为4~5h。
9.权利要求1~8任意一项所述制备方法制备的精氨酸/赖氨酸多肽。
10.权利要求9所述的精氨酸/赖氨酸多肽在制备化妆品中的应用。