一种大豆蛋白来源的多肽、制备方法及其应用

本发明属于多肽，尤其涉及一种大豆蛋白来源的多肽、制备方法及其应用。

背景技术：

1、糖尿病(diabetes mellitus，dm)是一种危害性极大的代谢性疾病，以高血糖为主要表征。胰岛素分泌缺陷或其生物功能受损是造成高血糖的主要原因，长期高血糖容易造成眼、肾、肝脏、血管及神经慢性损伤，引起功能障碍，严重时可危及生命。

2、有研究表明，较高的血糖水平可以诱导非酶糖基化蛋白质的形成，从而导致糖尿病慢性并发症的产生，如冠心病、高血压、脑血管病等。因此，应该注意糖尿病患者餐后血糖含量的控制，对于治疗糖尿病和减少一系列糖尿病伴随的慢性并发症至关重要。降低人体餐后高血糖的治疗方法关键是降低餐后碳水化合物的吸收。人体一般只吸收单糖等小分子，淀粉等多糖一般要经过水解才可以被人体吸收，而α-葡萄糖苷酶可以将多糖水解为单糖等小分子，是人体糖代谢中最重要的酶组成。因此，防治t2dm的一种潜在有效方法是调节进入循环系统的葡萄糖释放，可通过采用药理手段阻碍α-葡萄糖苷酶的活性来实现。α-葡萄糖苷酶抑制剂可通过与低聚糖竞争葡萄糖苷酶结合位点，延缓低聚糖的消化和吸收速度，从而延长碳水化合物的消化过程，减少和延缓葡萄糖的吸收，达到维持血糖平衡的目的。

3、目前许多降糖药物已被批准用于商业用途，如阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。然而，服用这些药物可能会导致不良反应，从而大大限制了它们的使用。

4、大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白中蛋白质含量在90％以上，氨基酸种类有近20种，并含有人体必需氨基酸。其营养丰富，不含胆固醇，是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一。

技术实现思路

1、鉴于现有技术所存在的问题，本发明提供一种大豆蛋白来源的多肽、制备方法及其应用。本发明提供的多肽分离自大豆分离蛋白碱性蛋白酶水解产物，对α-葡萄糖苷酶具有抑制作用，可以用于制备降糖药物，用于防治糖尿病，且溶解性好、无毒性。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

3、本发明提供一种大豆蛋白来源的多肽，选自p1、p2和p3中的一种或几种；p1的氨基酸序列包括：damdgwfr；p2的氨基酸序列包括：pdfknpigw；p3的氨基酸序列包括：kdpgqdpftf。

4、采取上述技术方案的有益效果包括：本发明筛选获得的多肽，以大豆分离蛋白为原料制备获得，无毒性，溶解性好；经α-糖苷酶抑制活性检测，结果表明，对α-葡萄糖苷酶抑制活性的ic50值为0.15-0.24mg/ml，具有明显的α-葡萄糖苷酶抑制作用。

5、本发明提供一种大豆蛋白来源的多肽的制备方法，包括以下步骤：

6、(1)将大豆分离蛋白采用碱性蛋白酶水解；

7、(2)超滤，选择分子量小于3kda的组分；

8、(3)采用蛋白纯化色谱法对分子量小于3kda的组分进行分离，根据洗脱液体积由小到大对应的出峰情况，分别命名为组分f1至组分f4组分，选择组分f3；

9、(4)筛选组分f3含有的多肽。

10、采取上述技术方案的有益效果包括：本发明经过研究发现，大豆蛋白的酶解产物可以释放出具有良好抗糖尿病特性的活性肽。本发明检测了并证实了碱性蛋白酶处理后的大豆分离蛋白酶解物具有有效的α-糖苷酶抑制能力，进一步采用超滤结合fplc(快速蛋白液相色谱)两步纯化方法，结合计算机辅助筛选技术从大豆分离蛋白碱性蛋白酶酶解液中筛选具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的活性多肽，并通过体外α-葡萄糖苷酶抑制实验进行验证。经实验证明，本发明筛选的多肽相比未纯化的大豆蛋白的酶解产物对α-葡萄糖苷酶抑制作用明显增强。

11、进一步，步骤(1)中，水解条件包括：ph 9.0,水解温度为55℃，水解时间为4h。

12、进一步，步骤(3)中，流动相a为0.1％三氟乙酸水溶液，溶剂b为0.1％三氟乙酸乙腈溶液；洗脱程序包括：0-30min内使用100％的溶剂b进行洗脱，30-90min内使用100％-60％的溶剂b进行线性梯度洗脱，流速为1ml/min；在214nm处监测洗脱峰。

13、进一步，步骤(4)中，筛选方法包括以下步骤：针对组分f3含有的多肽，使用peptideranker预测生物活性概率，选择评分≥0.8的肽序列进行筛选；使用peptideproperty calculator评估肽序列的溶解度，通过toxinpred对肽序列进行毒性预测。

14、采取上述技术方案的有益效果包括：采用上述方法获得的多肽对α-葡萄糖苷酶抑制效果更好，溶解性好且无毒性。

15、本发明提供上述大豆蛋白来源的多肽在作为或制备α-葡萄糖苷酶抑制剂(包括α-葡萄糖苷酶抑制肽等)中的应用。

16、本发明提供上述大豆蛋白来源的多肽在制备降糖药物、食品、保健品中的一种或几种中的应用。

17、本发明提供上述大豆蛋白来源的多肽在制备防治糖尿病药物、食品、保健品中的一种或几种中的应用。

18、采取上述技术方案的有益效果包括：本发明经实验验证，本发明提供的大豆蛋白来源的多肽具有很好的α-葡萄糖苷酶抑制作用，并且溶解性好、无毒性，可以用于食品、药品、保健品等领域。

技术特征：

1.一种大豆蛋白来源的多肽，其特征在于，选自p1、p2和p3中的一种或几种；p1的氨基酸序列包括：damdgwfr；p2的氨基酸序列包括：pdfknpigw；p3的氨基酸序列包括：kdpgqdpftf。

2.一种权利要求1所述大豆蛋白来源的多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述大豆蛋白来源的多肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，水解条件包括：ph 9.0,水解温度为55℃，水解时间为4 h。

4.根据权利要求2或3所述大豆蛋白来源的多肽的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，流动相a为0.1%三氟乙酸水溶液，溶剂b为0.1%三氟乙酸乙腈溶液；洗脱程序包括：0-30min内使用100%的溶剂b进行洗脱，30-90min内使用100%-60%的溶剂b进行线性梯度洗脱，流速为1 ml/min；在214 nm处监测洗脱峰。

5.根据权利要求2或3所述大豆蛋白来源的多肽的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，筛选方法包括以下步骤：针对组分f3含有的多肽，使用peptideranker预测生物活性概率，选择评分≥0.8的肽序列进行筛选；使用peptide property calculator评估肽序列的溶解度，通过toxinpred对肽序列进行毒性预测。

6.权利要求1所述大豆蛋白来源的多肽在作为或制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。

7.权利要求1所述大豆蛋白来源的多肽在制备降糖药物、食品、保健品中的一种或几种的应用。

8.权利要求1所述大豆蛋白来源的多肽在制备防治糖尿病药物、食品、保健品中的一种或几种中的应用。

技术总结
本发明涉及一种大豆蛋白来源的多肽、制备方法及其应用。本发明提供的大豆蛋白来源的多肽，选自P1、P2和P3中的一种或几种；P1的氨基酸序列包括：DAMDGWFR；P2的氨基酸序列包括：PDFKNPIGW；P3的氨基酸序列包括：KDPGQDPFTF。该多肽分离自大豆分离蛋白碱性蛋白酶水解产物，对α‑葡萄糖苷酶具有抑制作用，可以用于制备降糖药物，用于防治糖尿病，且溶解性好、无毒性。

技术研发人员：张娜,徐悦,杨杨,马春敏,王冰,边鑫,张光,刘晓飞,贺殷媛,王艳
受保护的技术使用者：哈尔滨商业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/21