一种具有抗高脂血症的土鳖虫肽及其应用的制作方法

本发明属于生物活性肽领域，具体涉及一种具有抗高脂血症的土鳖虫肽及其应用。

背景技术：

1、高脂血症又称脂质代谢紊乱或异常，是心、脑等重要靶器官动脉粥样硬化的高危因素，易导致心血管疾病、血栓、脂肪肝等严重并发症。我国高脂血症呈“年轻化”趋势，如何更好地防治高脂血症，对于降低心脑血管事件发生率至关重要。目前，尽管医学对糖尿病的发病机制有了较为深入的研究，治疗高脂血症最广泛应用的药物是他汀类、贝特类及烟酸类药物，虽然疗效肯定，但是肝损害、胃肠道反应等不良反应常有报道。中医中药文化博大精深，充分发挥中医药在高脂血症治疗中的优势具有非常积极的意义。

2、高脂血症是指由各种原因导致的血浆中总胆固醇、三酰甘油及低密度脂蛋白胆固醇中一种或多种脂质水平升高或高密度脂蛋白胆固醇降低的一种代谢性疾病，主要特征是血脂指标的升高，临床表现主要是脂质在真皮内沉积所引起的黄色瘤和脂质在血管内皮沉积所引起的动脉硬化。尽管高脂血症可引起黄色瘤，但其发生率并不很高；而动脉粥样硬化的发生和发展又是一种缓慢渐进的过程。因此在通常情况下，多数患者并无明显症状和异常体征。高脂血症可分为原发性和继发性两类。原发性与先天性和遗传有关，是由于单基因缺陷或多基因缺陷，使参与脂蛋白转运和代谢的受体、酶或载脂蛋白异常所致，或由于环境因素(饮食、营养、药物)和通过未知的机制而致。继发性多发生于代谢性紊乱疾病(糖尿病、高血压、黏液性水肿、甲状腺功能低下、肥胖、肝肾疾病、肾上腺皮质功能亢进)，或与其他因素年龄、性别、季节、饮酒、吸烟、饮食、体力活动、精神紧张、情绪活动等有关。

3、目前，改善高血脂状态的已知药物制剂包括他汀类、贝特类及烟酸类药物等。他汀类药物，即3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a(hmg-coa)还原酶抑制药，作用机制是通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶hmg-coa还原酶，阻断细胞内羟甲戊酸代谢途径，使细胞内胆固醇合成减少，从而反馈性刺激细胞膜表面低密度脂蛋白(ldl)受体数量和活性增加，使血清胆固醇清除增加、水平降低临床上主要用于降低胆固醇尤其是低密度脂蛋白-胆固醇(ldl-c)，治疗动脉粥样硬化，现已成为冠心病预防和治疗的最有效药物。他汀相关性肌病临床表现包括肌痛、肌炎和横纹肌溶解，可引起急性肾衰竭与肝功能受损。贝特类(fibrates)又称苯氧酸类(fibric acid)，作用机制尚未完全明确，可能是通过激活lpl或作用于过氧化物酶体增殖物激活的受体(ppars)而发挥降脂作用。但贝特类药物可导致腹痛、腹泻、恶心等胃肠道反应，严重的会导致肌炎。烟酸类药物具有广谱的调脂作用，可作为单一或辅助治疗用药，用于高甘油三酯血症和混合性高脂血症患者，在hdl-c降低或合并甘油三酯增高时尤为适用。其可以抑制脂肪组织内的甘油酯酶活性，抑制脂肪组织的动员，从而减少肝脏vldl的合成；增强脂蛋白脂酶(lpl)的活性，促进血浆tg的水解，降低极低密度脂蛋白(vldl)浓度，使vldl向ldl的转化减少，从而降低总胆固醇和ldl-c。但以上这些药物药物的毒副作用还没有得到妥善处理，因而，有效治疗或防止高脂血症和高脂血症并发症的有效策略还有待建立。

4、土鳖虫别名地鳖虫、地乌龟、土元等。土鳖虫为鳖蠊科昆虫地鳖及中华冀土鳖的干燥雌虫体，主要成分为氨基酸、生物碱、挥发油和多种脂类成分。是传统活血化瘀类中药。土鳖虫主要成分为蛋白质,占总虫体的60％。现代研究发现,土鳖虫具有抑制血小板聚集、抑制凝血酶活性、促进纤维蛋白溶解、降低血脂等药理活性。

5、目前，已发现许多天然的降血脂有效成分，譬如：姜黄素、芍药苷、三七皂苷等。然而生物活性多肽治疗高脂血症方面的研究较少。

技术实现思路

1、本发明基于土鳖虫在高脂血症方面的治疗作用及仿生酶解工艺的应用，发现来源于土鳖虫的活性肽kypddkplgfpfdr和vaapvavaapvar具有通过调控机体内acc和hmgcr信号来降血脂的作用。

2、本发明的第一方面，提供一种具有抗高脂血症的土鳖虫肽，所述土鳖虫肽由kr-14和/或vr-13组成，所述kr-14肽结构序列kypddkplgfpfdr，如seq id no:1所示，所述vr-13肽结构序列vaapvavaapvar，如seq id no:2所示。

3、本发明的第二方面，提供上述kr-14或vr-13两个土鳖虫肽制备方法，包括以下步骤：(1)树脂处理；(2)氨基酸偶联反应；(3)三氟乙酸裂解,得固相合成肽kypddkplgfpfdr和vaapvavaapvar。

4、本发明的另一方面，提供上述两个土鳖虫肽在治疗和/或预防高脂血症中的应用。

5、本发明的另一方面，提供上述两个土鳖虫肽在抗高脂血症及其并发症药物中的应用。

6、上述高脂血症并发症，具体为高脂血症肝损伤、高脂血症性心肌病、高脂血症性肌萎缩、糖尿病性神经病变、糖尿病性冠心病。

7、本发明的另一方面，提供一种具有抗高脂血症的药物，所述药物包含kr-14和/或vr-13两个土鳖虫肽。

8、进一步的，上述药物为注射剂、颗粒剂、胶囊剂或丸剂中的一种。

9、一种药学上可接受的载体和/或添加剂，所述载体和/或添加剂包含kr-14和/或vr-13两个土鳖虫肽。

10、本发明的有益效果在于：

11、(1)本发明的土鳖虫肽纯度高，安全有效，消除了服用异蛋白等引起的免疫原反应，减小了不良反应发生率；

12、(2)现有技术中并没有公开kypddkplgfpfdr和vaapvavaapvar两个土鳖虫肽用于治疗和/或预防高脂血症的报道，本发明为研究开发一种新型的抗高脂血症及其并发症治疗药物提供参考；

13、(3)本发明首次合成了kypddkplgfpfdr和vaapvavaapvar两个土鳖虫肽，并且检测了合成多肽对高脂血症大鼠的抑制活性，所述合成多肽对高脂血症具有潜在的保护作用；

14、(4)kypddkplgfpfdr和vaapvavaapvar，上述2种肽结构是发明人在土鳖虫仿生酶解小分子肽类经精制纯化并经分析得到的高含量、高活性的小分子生物活性肽成分，此2种小分子生物活性肽成分为发明人首次发现，未见有关报道；

15、(5)本发明所述的多肽序列采用标准fmoc方案，通过树脂的筛选，合理的多肽合成方法。将目标多肽的c-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这个氨基酸的氨基作为起点，与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键。不断重复这一过程，即可以得到目标多肽产物。合成反应完成后，去除保护基，将肽链与树脂分离，即得到目标产物,多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序从c端向n端合成；

16、(6)本发明揭示了土鳖虫肽对高脂血症的改善作用，可望为以后的高脂血症及其并发症的治疗提供新的理论依据及新的药物治疗靶点，并为动物类中药多肽类成分的研究提供了参考。

技术特征：

1.一种具有抗高脂血症的土鳖虫肽，其特征在于：所述土鳖虫肽由kr-14和/或vr-13组成，所述kr-14肽结构序列kypddkplgfpfdr，如seq id no:1所示，所述vr-13肽结构序列vaapvavaapvar，如seq id no:2所示。

2.如权利要求1所述的一种具有抗高脂血症的土鳖虫肽，其特征在于：所述kr-14或vr-13两个土鳖虫肽制备方法，包括以下步骤：(1)树脂处理；(2)氨基酸偶联反应；(3)三氟乙酸裂解,得固相合成肽kypddkplgfpfdr和vaapvavaapvar。

3.如权利要求1所述的一种具有抗高脂血症的土鳖虫肽，其特征在于：kr-14和/或vr-13在治疗和/或预防高脂血症中的应用。

4.如权利要求1所述的一种具有抗高脂血症的土鳖虫肽，其特征在于：kr-14和/或vr-13在抗高脂血症及其并发症药物中的应用。

5.如权利要求4所述的一种具有抗高脂血症的土鳖虫肽，其特征在于：所述高脂血症并发症，具体为高脂血症肝损伤、高脂血症性心肌病、高脂血症性肌萎缩、糖尿病性神经病变、糖尿病性冠心病。

6.一种具有抗高脂血症的药物，所述药物包含权利要求1所述的kr-14和/或vr-13两个土鳖虫肽。

7.如权利要求6所述的药物，其特征在于：所述药物为注射剂、颗粒剂、胶囊剂或丸剂中的一种。

8.一种药学上可接受的载体和/或添加剂，其特征在于：所述载体和/或添加剂包含权利要求1所述的kr-14和/或vr-13两个土鳖虫肽。

技术总结
本发明属于生物活性肽领域，具体涉及一种具有抗高脂血症的土鳖虫肽及其应用。所述土鳖虫肽由KR‑14和/或VR‑13组成，所述KR‑14肽结构序列KYPDDKPLGFPFDR，如SEQ ID NO:1所示，所述VR‑13肽结构序列VAAPVAVAAPVAR，如SEQ ID NO:2所示。

技术研发人员：孙志强,刘国飞,刘晓美,蔺艳茹,吴冬雪,代龙
受保护的技术使用者：山东禹泽药康产业技术研究院有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12