一种基于磁珠法的核酸提取方法与流程

本申请涉及核酸提取，具体涉及一种基于磁珠法的核酸提取方法。

背景技术：

1、磁珠法提取是利用裂解液释放样本中的核酸并结合到磁珠上。裂解液通常含有高浓度的蛋白变性试剂(如胍盐)、表面活性剂及其他试剂。对后续的实验(如pcr)有强烈抑制作用。因此，裂解后需要进行洗涤。洗涤一方面是进一步去除样本中的蛋白质等杂质，另一方面是去除残留的裂解液。洗涤液通常为70％左右的乙醇水溶液。不仅可以溶解稀释磁珠残留的裂解液，也可以溶解蛋白质等杂质。最后，乙醇经自然挥发后，用洗脱液将核酸从磁珠上洗脱下来。该方法已经是现阶段标准的磁珠法核酸提取的操作流程。

2、然而在实际操作过程中，需要使用洗涤液重复进行多次洗涤操作，不仅会花费大量的时间，还会增加样品暴露污染的风险。

技术实现思路

1、本申请的目的在于提供一种基于磁珠法的核酸提取方法，其使用疏水液形成的疏水相来将结合有核酸的磁珠从裂解液中分离出来，无需使用洗涤液进行多次洗涤也能够起到去除杂质和残留的裂解液的效果；其简化了核酸提取方法步骤，有助于提升工作效率，同时也能够降低暴露污染的风险。

2、本申请的技术方案如下：

3、本申请实施例提供了一种基于磁珠法的核酸提取方法，其包括如下步骤：

4、样品裂解：向第一容器中加入裂解液和疏水液，静置分层形成位于容器底部的裂解层和位于裂解层上方的疏水层；将样品加入至裂解层中充分混合进行裂解；

5、磁珠吸附：向裂解层中加入磁珠悬浮液并充分混合；然后插入磁棒，将磁珠吸附至磁棒上，将磁棒连同磁珠一起从裂解层提升至疏水层，并进一步提升至外，转移至第二容器中；

6、磁珠洗脱：向第二容器中加入洗脱液对磁珠进行洗脱，然后将第二容器转移至磁性支架上进行磁分离，然后吸取上清液以供检测使用。

7、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述第一容器和上述第二容器均为1.5ml的ep离心管。

8、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述样品裂解步骤中，所加入的疏水液的体积为50～500μl。

9、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述样品裂解步骤中，上述疏水液为矿物油、直链烷烃、硅油、食用油、全氟己烷、正丁醇以及辛醇中的任意一种。

10、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述矿物油为石蜡油，上述直链烷烃为月桂烷。

11、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述样品裂解步骤中，所加入的裂解液的体积为500μl；所加入的样品体积为100μl。

12、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述样品裂解步骤中，将样品加入至裂解层中混合5min进行裂解。

13、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述磁珠吸附步骤中，所加入的磁珠悬浮液的体积为50μl。

14、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述磁珠吸附步骤中，向裂解层中加入磁珠悬浮液，混合1～2min，然后插入磁棒。

15、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述磁珠洗脱步骤中，所加入的洗脱液的体积为100μl。

16、进一步的，在本申请的一些实施例中，上述磁珠洗脱步骤中，将第二容器转移至磁性支架上静置1～2min进行磁分离。

17、相对于现有技术，本申请的实施例至少具有如下优点或有益效果：

18、针对上述方面，本申请实施例提供了一种基于磁珠法的核酸提取方法，其首先向容器(离心管)中加入裂解液和疏水液，由于疏水性液体基本上密度要低于水，在密度差的作用下，通过静置分层能够在容器内形成位于底部的裂解层和位于裂解层上方的疏水层。然后将待裂解的样品(如经过培养的细胞样品)加入至裂解层中进行裂解，再进一步加入磁珠悬浮液，充分混匀进行磁珠吸附，将裂解出来的核酸物质吸附在磁珠之上。插入磁棒，将附着有核酸物质的磁珠吸附在磁棒之上，然后将磁棒连同磁珠一起向外抽出；在此过程中，磁珠会经过疏水层，由于疏水液体对水溶液的排斥作用，能够使磁珠表面残留的裂解液被疏水层阻挡，连带其他杂质一并从磁珠上分离脱落出来，从而实现类似于常规洗涤液洗涤的效果，且无需进行重复操作，通过对吸附有磁珠的磁棒进行一次提拉操作后，即可继续进行后续洗脱步骤。使用洗脱液对磁珠进行洗脱，将附着的核酸物质洗脱出来，再利用磁性支架进行磁分离，然后小心吸取上清液，保存以供后续检测使用。

19、本申请方案对常规磁珠核酸提取法的方法步骤进行优化，采用疏水液形成疏水相来替代常规洗涤液洗涤，且无需反复多次操作，从而节约大量的操作时间，降低操作难度，能够有效提升核酸提取操作效率，进而能够降低暴露污染的风险，且最终提取效果也相近，有利于实际推广应用。

技术特征：

1.一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，其包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述第一容器和所述第二容器均为1.5ml的ep离心管。

3.根据权利要求1所述的一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述样品裂解步骤中，所加入的疏水液的体积为50～500μl。

4.根据权利要求1所述的一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述样品裂解步骤中，所述疏水液为矿物油、直链烷烃、硅油、食用油、全氟己烷、正丁醇以及辛醇中的任意一种。

5.根据权利要求4所述的一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述矿物油为石蜡油，所述直链烷烃为月桂烷。

6.根据权利要求1所述的一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述样品裂解步骤中，所加入的裂解液的体积为500μl；所加入的样品体积为100μl。

7.根据权利要求1所述的一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述样品裂解步骤中，将样品加入至裂解层中混合5min进行裂解。

8.根据权利要求1所述的一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述磁珠吸附步骤中，所加入的磁珠悬浮液的体积为50μl。

9.根据权利要求1所述的一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述磁珠吸附步骤中，向裂解层中加入磁珠悬浮液，混合1～2min，然后插入磁棒。

10.根据权利要求1所述的一种基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述磁珠洗脱步骤中，所加入的洗脱液的体积为100μl。

技术总结
本申请公开了一种基于磁珠法的核酸提取方法，涉及核酸提取技术领域。一种基于磁珠法的核酸提取方法，其步骤包括样品裂解、磁珠吸附和磁珠洗脱。其使用疏水液形成的疏水相来将结合有核酸的磁珠从裂解液中分离出来，无需使用洗涤液进行多次洗涤也能够起到去除杂质和残留的裂解液的效果；其简化了核酸提取方法步骤，有助于提升工作效率，同时也能够降低暴露污染的风险。

技术研发人员：金雅康,吴兴君,陆永华
受保护的技术使用者：苏州莱必德生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/29