重组α-葡萄糖苷酶及其制备方法与流程

本发明属于生物，具体地说，本发明涉及一种重组α-葡萄糖苷酶及其制备方法。

背景技术：

1、α-葡萄糖苷酶，也称为α-d-葡萄糖苷水解酶或者葡萄糖苷转移酶，属于淀粉水解酶类。它能水解麦芽低聚糖分子中非还原性末端的α-1，4糖苷键，糖苷键的裂解发生在糖基的异头碳和糖苷氧原子之间。并能将水解游离出来的一个葡萄糖残基转移结合到另一个葡萄糖分子或麦芽糖、异麦芽三糖等上面。同时它还具有转糖苷作用，可将低聚糖中的α-1，4-糖苷键转化成α-1，6-糖苷键，从而通过酶的催化作用得到低聚异麦芽糖或糖酯、糖肽等，而不必采用化学途径。

2、α-葡萄糖苷酶是工业生产异麦芽糖、异麦芽三糖、异麦芽四糖等低聚异麦芽糖的关键酶。利用它的转苷作用合成的蛇菊苷衍生物具有高甜度，在食品工业上可以作为优良的甜味剂。α-葡萄糖苷酶在啤酒酿造的过程中形成的异麦芽糖、潘糖和异麦芽三糖等低聚异麦芽糖可以提高啤酒的口感。α-葡萄糖苷酶因在淀粉加工上具有重要作用，其研究多年来一直受到重视。其广泛存在于动物、植物和微生物体内，与常温α-葡萄糖苷酶相比嗜热酶具有热稳定性好、活力高、适应范围广以及纯化成本低等优点，更适于工业化应用。大量研究表明α-葡萄糖苷酶在工业领域的应用会带来很好的经济和社会效益。

3、因此本领域技术人员致力于对明α-葡萄糖苷酶进行改造和重组表达，以便制备出低成本适合工业化生产并能保持高反应效率的α-葡萄糖苷酶。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种重组α-葡萄糖苷酶及其制备方法。

2、在本发明的第一方面，提供了一种重组α-葡萄糖苷酶，所述重组α-葡萄糖苷酶的氨基酸序列如seq id no.1所示，或者所述重组α-葡萄糖苷酶的氨基选序列与seq id no.1相比具有至少80％的同源性；更优选地，具有至少90％的同源性；最优选地，具有至少95％的同源性；如具有至少96％、97％、98％、99％的同源性。

3、本发明的第二方面，提供了一种多核苷酸分子，所述多核苷酸分子编码本发明第一方面所述的重组α-葡萄糖苷酶。

4、在另一优选例中，所述多核苷酸分子序列如seq id no.4所示。

5、本发明的第三方面，提供了一种载体，所述载体含有本发明第二方面所述的核酸分子。

6、本发明的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本发明第一方面所述的载体或染色体整合有本发明第二方面所述的核酸分子。

7、在另一优选例中，所述宿主细胞为原核细胞、或真核细胞。

8、在另一优选例中，所述原核细胞为大肠杆菌。

9、本发明的第五方面，提供了一种制备本发明第一方面所述的重组α-葡萄糖苷酶的方法，包括步骤：

10、(i)在适合的条件下，培养本发明第四方面所述的宿主细胞，从而表达出所述的重组α-葡萄糖苷酶；和

11、(ii)分离所述的重组α-葡萄糖苷酶。

12、在另一优选例中，所述步骤(i)中培养所述宿主细胞的温度为20℃-40℃；优选为25℃-37℃，如37℃。

13、在另一优选例中，所述步骤(i)中所述宿主细胞为大肠杆菌细胞。

14、本发明的第六方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含本发明第一方面所述的重组α-葡萄糖苷酶。

15、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

技术特征：

1.一种重组α-葡萄糖苷酶，其特征在于，所述重组α-葡萄糖苷酶的氨基酸序列如seqid no.1所示，或者所述重组α-葡萄糖苷酶的氨基选序列与seq id no.1相比具有至少80％的同源性。

2.一种多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子编码权利要求1所述的重组α-葡萄糖苷酶。

3.如权利要求2所述的多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子的序列如seq idno.4所示。

4.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求2所述的多核苷酸分子。

5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求4所述的载体或染色体整合有权利要求2所述的多核苷酸分子。

6.如权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞。

7.一种制备权利要求1所述的重组α-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，包括步骤：

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(i)中培养所述宿主细胞的温度为20℃-40℃。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(i)中所述宿主细胞为大肠杆菌细胞。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤(i)中培养所述宿主细胞的温度为25℃-37℃。

技术总结
本发明提供了一种重组α‑葡萄糖苷酶及其制备方法，具体地本发明采用了基因工程大肠杆菌表达重组α‑葡萄糖苷酶，该重组α‑葡萄糖苷酶实现了在大肠杆菌系统的可溶性表达，且蛋白的产量高，并具备较高催化活性。因而具有生产周期短、表达产物容易纯化、成本低等优点，可实现重组α‑葡萄糖苷酶的工业化生产。

技术研发人员：朱伟伟,王佳,蒋析文,刘文丽,何祖强,雷泳森
受保护的技术使用者：广州达安基因股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12