一种靶向谷蠹RDNCM基因的dsRNA及其应用

本发明属于粮食储备害虫防控，具体涉及一种靶向谷蠹rdncm基因的dsrna及其应用。

背景技术：

1、粮食仓储，环境稳定，食物充足，为储粮害虫的生长繁殖提供理想温床。谷蠹是一类常见的体型较小的储粮害虫，属鞘翅目，长蠹科(coleoptera)。在谷蠹的生长发育过程中，其蛀蚀粮粒产生的大量粉屑会降低粮堆的通透性，此时粮堆内部温度升高，粮食会产生霉变，严重影响粮食品质，使得粮食失去食用价值。

2、至今已有多个地区发现谷蠹产生了高抗性。随着谷蠹磷化氢抗性增强，为了达到预期的杀虫效果，只能通过增加磷化氢浓度的方法进行熏蒸，但有研究表明，在高浓度磷化氢环境中，谷蠹会产生保护性昏迷现象，这会大大降低磷化氢的熏蒸效果。因此，为了有效防控储粮害虫谷蠹，尤其是高抗性谷蠹品系，亟需新型防治药剂与技术，从而保障粮食安全。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种靶向谷蠹rdncm基因的dsrna，施用后，可有效防治储粮害虫谷蠹。

2、本发明还提供所述rdncm基因靶向药剂在防治储粮害虫谷蠹中的应用。

3、本发明的目的采用如下技术方案实现：

4、一种靶向谷蠹rdncm基因的dsrna，采用包括如下步骤的方法制备：将谷蠹的总rna反转录为cdna，以所述cdna为模板，采用seq id no.1和seq id no.2所示的引物对进行pcr扩增，将pcr扩增产物体外转录合成为所述dsrna。

5、在本发明中，所述pcr扩增的体系包括：cdna 1μl、seq id no.1和seq id no.2所示的引物各0.5μl、takara taqtmpcrmaster mix 12.5μl和无rna酶水10.5μl。

6、在本发明中，pcr扩增的程序包括如下步骤：94℃预变性5min；94℃变性1min，58℃退火2min，72℃延伸3min，50循环；72℃再延伸9min

7、本发明还提供所述dsrna在防治储粮害虫谷蠹中的应用。

8、在本发明中，所述应用包括将麦粒经剖开处理，滴加所述靶向谷蠹rdncm基因的dsrna的步骤。

9、在本发明中，所述靶向谷蠹rdncm基因的dsrna的浓度为1900-2100ng/μl，施用剂量为0.7-0.9μl/麦粒。

10、有益效果：储粮害虫谷蠹是变态发育，在其生长发育过程中受到相关基因调控以完成其幼虫转化至成虫的过程。本发明提供的dsdna被储粮害虫谷蠹幼虫取食后，使其体内rdncm基因生长发育调节功能失效，从而阻断储粮害虫谷蠹幼虫向成虫转化，达到杀死储粮害虫谷蠹的目的，尤其是可有效防控磷化氢抗性谷蠹种群，方法可靠，效果稳定。

技术特征：

1.一种靶向谷蠹rdncm基因的dsrna，其特征在于，采用包括如下步骤的方法制备：将谷蠹的总rna反转录为cdna，以所述cdna为模板，采用seq id no.1和seq id no.2所示的引物对进行pcr扩增，将pcr扩增产物体外转录合成为所述dsrna。

2.根据权利要求1所述靶向谷蠹rdncm基因的dsrna，其特征在于所述pcr扩增的体系包括：cdna 1μl、seq id no.1和seq id no.2所示的引物各0.5μl、takara taqtmpcr mastermix 12.5μl和无rna酶水10.5μl。

3.根据权利要求2所述靶向谷蠹rdncm基因的dsrna，其特征在于pcr扩增的程序包括如下步骤：94℃预变性5min；94℃变性1min，58℃退火2min，72℃延伸3min，50循环；72℃再延伸9min。

4.权利要求1所述dsrna在防治储粮害虫谷蠹中的应用。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于包括将麦粒经剖开处理，滴加权利要求1-3之一所述靶向谷蠹rdncm基因的dsrna的步骤。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于所述靶向谷蠹rdncm基因的dsrna的浓度为1900-2100ng/μl，施用剂量为0.7-0.9μl/麦粒。

技术总结
本发明提供一种靶向谷蠹RDNCM基因的dsRNA及其应用，属于粮食储备害虫防控技术领域。该靶向谷蠹RDNCM基因的dsRNA，采用包括如下步骤的方法制备：将谷蠹的总RNA反转录为cDNA，以所述cDNA为模板，采用SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对进行PCR扩增，将PCR扩增产物体外转录合成为dsRNA，即得所述RDNCM基因靶向药剂。本发明靶向谷蠹RDNCM基因的dsRNA，施用后，可有效防治储粮害虫谷蠹。

技术研发人员：吴学友,唐培安,徐宏磊
受保护的技术使用者：南京财经大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12