一种HLA-A1101限制性抗原表位肽、靶向表位肽TCR及其应用

本发明属于t细胞免疫治疗药物，具体涉及一种hla-a1101限制性抗原表位肽、靶向表位肽tcr及其应用。

背景技术：

1、随着生物医药领域研究的进展，靶向恶性实体瘤的t细胞免疫治疗的靶点选择不断演变，从最初的谱系抗原变成了病毒抗原，而随着近年来高通量测序技术的出现，靶向肿瘤个体突变称为新一代t细胞治疗聚焦的靶点。

2、t细胞治疗目前主要包括tcr-t和car-t治疗手段。目前car-t技术治疗在白血病、淋巴病瘤等血液瘤的治疗中起到显著效果，大大提高了患者生存率和生存质量，但是针对实体瘤，car-t治疗手段由于目前的特异性靶点有限，大大限制了其应用前景。tcr-t技术不同于car-t细胞技术，tcr是所有t细胞表面的特征性标志，以非共价键与cd3结合，形成tcr-cd3复合物。外周血中，90％-95％的t细胞表达tcr，经过基因改造的tcr的t细胞，可以对肿瘤细胞表面上的抗原分子进行特异性识别，进而针对肿瘤细胞产生免疫反应。

3、目前，在人类癌症中，pik3ca基因为肿瘤学领域的致癌基因之一，pik3ca的基因突变频率在子宫内膜癌中接近44.5％，在乳腺癌中接近30.7％，在宫颈癌中接近23.6％，在结直肠癌中接近24.7％，在膀胱癌中接近20.4％，在头颈癌中接近13.6％，在食管胃癌中接近13.0％等，除上述癌症以外，pik3ca的基因突变在神经胶质瘤、非小细胞癌、成胶质细胞瘤、胆管癌、黑色素瘤、精原细胞瘤、肝胆癌、肉瘤、胰腺癌、胸膜间皮瘤、前列腺癌、卵巢上皮细胞肿瘤、肾透明细胞癌、肾上腺皮质癌肾、非透明细胞癌和甲状腺癌等中也有发生(参照图1)。

4、目前，野生型pik3ca与mhc结合能力较弱，形成的抗原肽-mhc复合物(pmhc)不稳定，无法形成较好的t细胞杀伤位点。

技术实现思路

1、针对以上问题，本发明中发现了可以和hla-a1101形成稳定的复合物，并提呈到细胞表面的hla-a1101限制性抗原表位肽，该表位肽是pik3ca_h1047l1046-1054突变多肽，与mhc有很强的结合能力，是激活t细胞的较为理想的一个靶点；并且基于该pik3ca_h1047l1046-1054突变多肽筛选的tcr均具有较强的特异性，均能介导t细胞分泌大量的ifn-γ和il-2细胞因子杀死pik3ca_h1047l1046-1054突变的hla-a1101亚型的肿瘤细胞。

2、为了达到上述目的，本发明可以采用以下技术方案：

3、本发明一方面提供一种hla-a1101限制性抗原表位肽，其氨基酸序列如seq idno:56所示。

4、本发明另一方面提供一种靶向多肽-hla-a1101复合物的tcr，多肽序列如seq idno:56所示，该tcr可以从以下四种tcr中进行选择：

5、第一种tcr:

6、第一种tcr包含α链可变区和β链可变区；α链可变区包含如seq id no:1所示序列编码的α链cdr1、如seq id no:2所示序列编码的α链cdr2和如seq id no:3所示序列编码的α链cdr3，β链可变区包含如seq id no:4所示序列编码的β链cdr1、如seq id no:5所示序列编码的β链cdr2和如seq id no:6所示序列编码的β链cdr3。

7、第二种tcr：

8、第二种tcr包含α链可变区和β链可变区；α链可变区包含如seq id no:19所示序列编码的α链cdr1、如seq id no:20所示序列编码的α链cdr2和如seq id no:21所示序列编码的α链cdr3，β链可变区包含如seq id no:22所示序列编码的β链cdr1、如seq id no:23所示序列编码的β链cdr2和如seq id no:24所示序列编码的β链cdr3。

9、第三种tcr：

10、第三种tcr包含α链可变区和β链可变区；α链可变区包含如seq id no:37所示序列编码的α链cdr1、如seq id no:38所示序列编码的α链cdr2和如seq id no:39所示序列编码的α链cdr3，β链可变区包含如seq id no:40所示序列编码的β链cdr1、如seq id no:41所示序列编码的β链cdr2和如seq id no:42所示序列编码的β链cdr3。

11、第四种tcr：

12、第四种tcr包含以下三组中任一组：(a)由seq id no:15所示序列编码的α链和由seq id no:16所示序列编码的β链；(b)由seq id no:33所示序列编码的α链和seq id no:34所示序列编码的β链；(c)由seq id no:51所示序列编码的α链和seq id no:52所示序列编码的β链。

13、本发明再一方面提供一种编码上述tcr的多核苷酸，该多核苷酸可以选择以下几种多核苷酸中的任意一种：

14、第一种多核苷酸，编码上述第一种tcr的多核苷酸，包含如seq id no:1、seq idno:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6所示序列。

15、第二种多核苷酸，编码上述第二种tcr的多核苷酸，包含如seq id no:19、seq idno:20、seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23和seq id no:24所示序列。

16、第三种多核苷酸，编码上述第三种tcr的多核苷酸，包含如seq id no:37、seq idno:38、seq id no:39、seq id no:40、seq id no:41和seq id no:42所示序列。

17、第四种核苷酸包含以下三组核酸序列中的任一组：(a)seq id no:15和seq idno:16；(b)seq id no:33和seq id no:34；(c)seq id no:51和seq id no:52。

18、本发明再一方面提供一种表达载体，其包含以上任一所述的多核苷酸。

19、本发明再一方面提供一种工程细胞，其包含以上任一所述的表达载体。

20、本发明再一方面提供一种药物组合物，其特征在于，其包含以上任一所述的tcr或以上任一所述的多核苷酸或以上任一所述的表达载体或以上任一所述的工程细胞。

21、本发明再一方面提供一种以上任一所述的tcr或以上任一所述的多核苷酸或以上任一所述的表达载体或以上任一所述的工程细胞在制备用于治疗多肽-hla-a1101表达阳性的癌症的药物中的应用；多肽序列如seq id no:56所示。

22、本发明再一方面提供一种以上任一所述的tcr或以上任一所述的多核苷酸或以上任一所述的表达载体或以上任一所述的工程细胞在制备用于检测多肽-hla-a1101表达阳性的肿瘤细胞试剂或试剂盒中的应用；多肽序列如seq id no:56所示。

23、本发明再一方面提供一种包含上述hla-a1101限制性抗原表位肽的多肽在制备治疗性肿瘤疫苗中的应用。

24、本发明有益效果至少包括：

25、(1)本发明提供的hla-a1101限制性抗原表位肽(突变型pik3ca_h1047l1046-1054)与mhc有很强的结合能力，结合能力优于野生型pik3ca_h10471046-1054，是激活t细胞的较为理想的一个靶点。

26、(2)本发明提供的tcr对pik3ca_h1047l1046-1054突变多肽均具有较强的特异性，而且均能介导t细胞分泌大量的ifn-γ和il-2细胞因子杀死pik3ca_h1047l1046-1054突变的肿瘤细胞。