具有脱发再生作用的毛囊干细胞制剂及其制备与应用的制作方法

本发明属于生物制剂，具体涉及一种具有脱发再生作用的毛囊干细胞制剂及其制备与应用。

背景技术：

1、受生活压力、环境变化、遗传、不良饮食习惯等多面的影响，脱发患者日益增多，并且逐渐趋向于常态化和年轻化。目前常见的治疗手段包括药物治疗、植发等。常见的药物包括非那雄胺、度他雄胺、米诺地尔等，药物治疗是治疗脱发的主要方法，但是药物治疗效果有限，且具有一定的局限性，如需长期使用、存在副作用、停药易复发等。植发技术包括是切头皮条技术以及毛囊单位提取术技术，其原理是将脱发患者后脑部的毛囊提取出来移植前部脱发区坏死的毛囊中，使其重新长出头发，但是该方法对有着较大面积脱发的脱发患者而言，效果并不十分理想，且价格昂贵。

2、随着再生医学的进步，干细胞疗法被逐渐用于毛发再生，该方法克服了脱发传统治疗方法的局限，具有广阔的应用场景。宴文静等在《干细胞治疗雄激素脱发的研究进展》中指出，脂肪间充质干细胞、毛乳头细胞、脐带血间充质干细胞等具有治疗雄激素性脱发及促进头发生长的作用。杨莹莹等在《毛囊及相关干细胞在雄性激素性脱发中的作用研究》中阐述了雄激素性脱发的发病机制，并指出hfscs和dpcs在雄激素性脱发治疗中，均体现出促进脱发部位毛发再生的作用。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种具有脱发再生作用的毛囊干细胞或细胞组合物，该毛囊干细胞或细胞组合物符合种子库传代稳定性、表面标志物、分化潜能、细胞因子分泌水平及安全性检测，为后续用于治疗脱发的毛囊干细胞制剂的研发提供了技术支持。

2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、具有脱发再生作用的毛囊干细胞或细胞组合物，所述毛囊干细胞或细胞组合物高表达cd73+、cd90+、cd105+细胞，低表达cd14/34/79a+、cd45+、hla-dr+细胞。

4、进一步，所述毛囊干细胞或细胞组合物传代至p8及以上。

5、进一步，所述毛囊干细胞或细胞组合物包括zs10细胞、zs11细胞、zs12细胞中的任一种或多种。

6、本发明的目的之二在于提供一种前述毛囊干细胞或细胞组合物的制备方法。

7、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

8、前述毛囊干细胞或细胞组合物的制备方法，包括如下步骤：

9、(1)构建毛囊干细胞种子库；

10、(2)利用步骤(1)所述毛囊干细胞种子库中的种子细胞，经传代扩增，得到所述毛囊干细胞或细胞组合物。

11、进一步，所述毛囊干细胞或细胞组合物需经过种子库传代稳定性(种子库代次p4、制剂代次p5及制剂+3代即p8代)、表面标志物、分化潜能、细胞因子分泌水平及安全性检测，并符合要求。

12、进一步，细胞传代方法如下：在毛囊种子干细胞生长汇合度达到90％以上时，采用消化液对细胞进行消化；生理盐水终止消化，得到消化液；消化液离心、重悬后，接种到培养瓶中继续培养，3-4天后继续传代或收获。

13、进一步，毛囊种子干细胞在37℃co2孵箱中消化5-6min。

14、进一步，细胞接种密度为8000-10000cells/cm2底面积。

15、本发明的目的之三在于提供一种毛囊干细胞制剂，该产品可以有效促进毛囊发育再生，且安全性高，无不良反应。

16、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

17、毛囊干细胞制剂，所述囊干细胞制剂含有前述毛囊干细胞或细胞组合物。

18、进一步，所述毛囊干细胞制剂包括毛囊干细胞或细胞组合物和辅料；所述辅料为浓度为0.5～2.0％的海藻酸钠；所述毛囊干细胞或细胞组合物和辅料的配比为0.1～2.0×108细胞：8～10ml。

19、作为优选，所述海藻酸钠的浓度为1.8％。

20、作为优选，所述毛囊干细胞或细胞组合物和辅料的配比为2.0×108细胞：8～10ml。

21、本发明的目的之四在于提供一种前述毛囊干细胞制剂的制备方法。

22、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

23、前述毛囊干细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：

24、(1)利用目的二所述方法制备毛囊干细胞或细胞组合物；

25、(2)将步骤(1)所得毛囊干细胞或细胞组合物与浓度为0.5～2.0％的海藻酸钠混匀，得到所毛囊干细胞制剂。

26、进一步，细胞冻存后复苏方法如下：

27、将含毛囊干细胞或细胞组合物从液氮中取出，37℃水浴不大于2min，解冻后离心、重悬，最后接种到相应培养瓶中，置于37℃co2孵箱中培养，3-4天后传代或收获。

28、进一步，细胞接种密度为8000-10000cells/cm2底面积。

29、进一步，浓度为0.5～2.0％的海藻酸钠的制备方法为：按0.5～2.0％(w/v)称取适宜海藻酸钠,缓慢倒入加热搅拌的注射用水中，60～100℃加热搅拌2-4小时，至海藻酸钠完全溶解，即得。

30、本发明的目的之五在于提供一种用于治脱生发的试剂盒，所述试剂盒包括前述毛囊干细胞制剂和皮肤滚针。

31、本发明的目的之六在于提供一种前述毛囊干细胞或细胞组合物在制备用于促进脱发患者毛发再生的药物中的应用。

32、本发明的目的之七在于提供一种前述毛囊干细胞制剂联合皮肤滚针在制备用于促进脱发患者毛发再生的试剂盒中的应用。

33、本发明的有益效果在于：

34、1.本发明采用异体毛囊干细胞，联合辅料制备毛囊干细胞制剂，该制剂可以使细胞在滚针形成的微创区域存活一定时间，并在此时间内，利用微创形成的血供环境及免疫炎性环境在脱发区域分泌相关生长因子和细胞通路信号，有效促进毛囊发育再生，促进细胞增殖；结合皮肤滚针使用，3个月的毛发增长率可以达到19.5％，并且采用该制剂在治疗期间和后期均无不良反应，安全性高。

35、2.本发明构建的毛囊干细胞工作库的各项指标(种子库传代稳定性、表面标志物、分化潜能、细胞因子分泌水平及安全性检测)及制剂制备均符合质量要求，治疗方式安全有效。

技术特征：

1.具有脱发再生作用的毛囊干细胞或细胞组合物，其特征在于，所述毛囊干细胞或细胞组合物高表达cd73+、cd90+、cd105+细胞，低表达cd14/34/79a+、cd45+、hla-dr+细胞。

2.根据权利要求1所述的毛囊干细胞或细胞组合物，其特征在于，所述毛囊干细胞或细胞组合物传代至p8及以上。

3.根据权利要求1所述的毛囊干细胞或细胞组合物，其特征在于，所述毛囊干细胞或细胞组合物包括zs10细胞、zs11细胞、zs12细胞中的任一种或多种。

4.权利要求1-3任一项所述的毛囊干细胞或细胞组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.毛囊干细胞制剂，其特征在于，所述囊干细胞制剂含有权利要求1-3任一项所述的毛囊干细胞或细胞组合物。

6.根据权利要求5所述的毛囊干细胞制剂，其特征在于，所述毛囊干细胞制剂包括毛囊干细胞或细胞组合物和辅料；所述辅料为浓度为0.5～2.0％的海藻酸钠；所述毛囊干细胞或细胞组合物和辅料的配比为0.1～2.0×108细胞：8～10ml。

7.权利要求5-6任一项所述的毛囊干细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

8.用于治脱生发的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求6所述的毛囊干细胞制剂和皮肤滚针。

9.权利要求1-3任一项所述的毛囊干细胞或细胞组合物在制备用于促进脱发患者毛发再生的药物中的应用。

10.权利要求5-6任一项所述的毛囊干细胞制剂联合皮肤滚针在制备用于促进脱发患者毛发再生的试剂盒中的应用。

技术总结
本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种具有脱发再生作用的毛囊干细胞制剂及其制备与应用。本发明利用种子库传代稳定性、表面标志物、分化潜能、细胞因子分泌水平及安全性检测等，获得毛囊干细胞或细胞组合物，并以此构建毛囊干细胞工作库。并采用筛选出的异体毛囊干细胞，联合海藻酸钠辅料制备毛囊干细胞制剂。本发明毛囊干细胞制剂具有促进毛囊脱发再生的作用，可有效改善患者脱发情况；不仅生发效果显著，且操作简单、无不良反应、安全性高。

技术研发人员：伍明俊,李文娴,李梦,胡晓方,徐云芳,廖芮莹,张博,陈强
受保护的技术使用者：四川新生命干细胞科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24