一种鸡滑液囊支原体融合基因、重组腺病毒及其应用

本发明属于生物工程，具体涉及一种鸡滑液囊支原体融合基因、重组腺病毒及其应用。

背景技术：

1、鸡滑液囊支原体(mycoplasma synoviae，ms)是重要的禽类支原体之一，可引起上呼吸道的亚临床感染，也导致关节滑液囊膜及腱鞘等发生渗出性滑膜炎、腱鞘滑膜炎及黏液囊炎。ms感染严重时可引起鸡的生长发育不良，肉鸡胴体品质下降，种鸡的产蛋率、受精率和孵化率均下降，造成重大经济损失。该病原既可水平传播，也可垂直传播，ms阳性鸡场很难彻底净化。ms常与其他病原混合感染，造成病情复杂严重。ms感染遍布全球，国内多地的鸡群也感染严重。

2、ms体外培养需要添加烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)和动物血清，体外培养耗时长、成本高等因素限制了传统疫苗的发展与应用，因此研发ms新型疫苗非常有必要。

技术实现思路

1、针对现有技术中的上述不足，本发明目的之一是提供一种鸡滑液囊支原体融合基因。

2、为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

3、一种基于鸡滑液囊支原体的融合基因，融合基因包括pdhβ基因序列和pdhd基因序列。

4、进一步地，融合基因还包括用于连接pdhβ基因序列和pdhd基因序列的linker连接序列。

5、进一步地，融合基因的核苷酸序列如seq id no.3所示。

6、本发明的目的之二是提供一种重组腺病毒穿梭质粒，包括上述的融合基因。

7、本发明的目的之三是提供一种重组腺病毒载体，包括上述穿梭质粒和骨架质粒。

8、进一步，骨架质粒为复制缺陷型腺病毒载体。

9、本发明的目的之四是提供一种上述重组腺病毒载体的构建方法，包括以下步骤：

10、步骤1、以鸡滑液囊支原体dna为模板进行pcr扩增，获得目的基因；

11、步骤2、将目的基因和质粒进行连接，获得重组穿梭质粒；

12、步骤3、将重组穿梭质粒和骨架质粒重组，获得重组腺病毒载体；优选地，将重组穿梭质粒和骨架质粒转染至hek 293a细胞中同源重组。

13、本发明的目的之五是提供一种重组腺病毒的制备方法，将上述的重组腺病毒载体感染至细胞进行扩增，获得重组腺病毒；优选地，重组腺病毒载体感染hek 293a细胞进行扩增，获得大量重组腺病毒。

14、本发明的目的之六是提供一种重组腺病毒，重组腺病毒采用上述的重组腺病毒的制备方法获得。

15、本发明的目的之七是提供一种将上述的重组腺病毒在制备鸡滑液囊支原体疫苗中的应用。

16、本发明的有益效果：

17、本发明的疫苗能够产生较高水平的抗体和细胞因子，免疫后能对鸡滑液囊支原体感染有一定的保护作用。

18、另外，重组腺病毒载体疫苗可以弥补传统疫苗ms培养成本高的缺陷，且其安全性更高。

技术特征：

1.一种鸡滑液囊支原体融合基因，其特征在于，所述融合基因包括pdhβ基因序列和pdhd基因序列。

2.根据权利要求1所述的鸡滑液囊支原体的融合基因，其特征在于，所述融合基因还包括用于连接所述pdhβ基因序列和pdhd基因序列的linker连接序列。

3.根据权利要求1或2所述的鸡滑液囊支原体的融合基因，其特征在于，所述融合基因的核苷酸序列如seq id no.3所示。

4.一种重组腺病毒穿梭质粒，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的融合基因。

5.一种重组腺病毒载体，其特征在于，包括权利要求4所述穿梭质粒和骨架质粒。

6.根据权利要求5所述的重组腺病毒载体，其特征在于，骨架质粒为复制缺陷型腺病毒载体。

7.权利要求5或6所述重组腺病毒载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.一种重组腺病毒的制备方法，其特征在于，将权利要求5或6所述的重组腺病毒载体感染至细胞进行扩增，表达，获得重组腺病毒。

9.采用权利要求8所述的重组腺病毒的制备方法获得的重组腺病毒。

10.权利要求9所述的重组腺病毒在制备鸡滑液囊支原体疫苗中的应用。

技术总结
本发明公开了一种鸡滑液囊支原体融合基因、重组腺病毒及其应用，融合基因包括pdhβ基因序列和pdhD基因序列；本发明的疫苗能够产生较高水平的抗体和细胞因子，免疫后能对鸡滑液囊支原体感染有一定的保护作用。

技术研发人员：程振涛,宋春,岳筠,朱二鹏,文明,王琦,覃英克,张爱琼,单春兰
受保护的技术使用者：贵州大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11